シリアルブロックフェイス走査型電子顕微鏡による神経細胞ミトコンドリアのイメージング

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海馬を含むトリミングされた樹脂包埋マウスの脳組織切片を取ります。

この切片は、電子顕微鏡下でコントラストを高めるために重金属で染色されます。

シアノアクリレート接着剤を使用して、セクションをアルミニウムピンに取り付けます。

ブロックの側面をコロイド状銀ペーストでコーティングし、アルミニウムピンへの導電経路を作成します。

シリアルブロック面走査型電子顕微鏡(SBFSEM)を使用して組織ブロックを調べます。

SBFSEM内では、ウルトラミクロトームがブロックを超薄層に順次スライスし、低電圧電子ビームが露出した表面をスキャンします。

後方散乱電子検出器は高解像度の 2D 画像をキャプチャし、ミトコンドリアと周囲の細胞構造を明らかにします。

適切なソフトウェアを使用して、明るさとコントラストを調整して画像の鮮明さを向上させます。

連続した

画像を整列させて、脳組織の3Dボリュームを再構築します。この 3D 再構成により、ミトコンドリアの形態、空間分布、およびニューロン コンパートメント内のそれらの関係を正確にマッピングできます。

サンプルを目的の領域にトリミングし、ゲル化シアノアクリレート瞬間接着剤を使用してアルミニウムピンに取り付けます。次に、サンプルをブロックの側面の周りにコロイド銀ペーストでコーティングし、アルミニウムピンへの導電経路を提供します。チャンバー内ウルトラミクロトームステージと低キロボルト後方散乱電子検出器を備えた走査型電子顕微鏡システムを使用して、組織標本を検査します。

これらの設定でサンプルをイメージします。画像タイプを選択して分析を開始し、次に8ビットを選択して、画像を元の独自の16ビットから8ビットTIFF形式に変換します。このステップでの自動コントラストや明るさの変換が画像に適していない場合は、16ビット画像を再度開いて画像を押します。明るさのコントラストを調整します。

すべての画像で機能する範囲を選択し、[適用]を押します。次に、変換を実行します。スライス間で許容できない画像の移動があった場合は、プラグイン、レジストレーション、および SIFT を使用した線形スタックの配置を選択して画像スタックを整列し、剛体ではなく移動のみのモードに整列を設定します。

画像を選択して、登録前にキャンバスサイズを拡大します キャンバスサイズを調整する キャンバスサイズ。または、目的の領域を選択してトリミングすることで、画像を関心のある領域に縮小します。必要に応じて、image j を使用して画像をより小さく、より管理しやすいサイズに拡大縮小し、次に [画像と拡大縮小] を選択します。

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最終更新:1 8月 2026