JoVE 実験百科事典
神経科学
0 回視聴 • 2:43 分 • June 18th, 2025
トランスジェニックマウスの脳から単離された接着神経幹細胞またはNSCを含むマルチウェルプレートを取ります。これらのNSCには、最初の成長期、つまりG1期に特異的な蛍光タグ付きタンパク質が含まれています。
NSCが分裂すると、細胞周期のG1期では蛍光を発し、他の期では蛍光を発しません。
プレートを共焦点レーザー走査型顕微鏡イメージングチャンバーに入れ、制御された温度に維持します。
希望の対物レンズを選択し、蛍光強度を調整します。
タイムラプスイメージングのパラメータを設定します。
大きな画像オプションを選択し、希望の期間、一定の間隔で画像取得をスケジュールします。
光退色を避け、高解像度を維持するために、高速共振スキャナーを使用してください。
明視野設定を使用して細胞形状を視覚化し、適切な蛍光フィルターを使用して蛍光をキャプチャします。
NSCのタイムラプスイメージングを開始して、さまざまな細胞周期の段階を視覚化します。
付属の温度制御チャンバーを5%の二酸化炭素雰囲気下で摂氏37度に予熱することにより、イメージング用の共焦点レーザー走査顕微鏡を準備します。予熱した顕微鏡チャンバー内に96ウェルプレートを配置し、最初のウェルに焦点を合わせます。次に、イメージングソフトウェアを開き、メインウィンドウを右クリックして[取得コントロールの取得]と[取得解除]を選択し、TIパッドを開き、プランのApo VC 20x DIC対物レンズを選択します。
次に、[取得コントロールの取得]をクリックし、タイムラプスオプションを開きます。各ウェルの中心をステージ位置として設定し、[大きな画像]オプションを7 x 7ミリメートルの2乗に選択します。各井戸の中心の周りのモザイク画像を観察します。大きなモザイク画像の重なりを5%に設定し、24時間、20分ごとに写真が撮影されるように頻度を設定します。
A1プラス設定で、メニューバーにリストされている各蛍光の光電子増倍管電圧レベルを選択します。高速共振スキャナーを使用して512 x 512ピクセルのフォーマットで画像を取得し、DICを使用して細胞を視覚化する場合に選択します。次に、データファイルを保存するフォルダーを選択します。ND取得ウィンドウの[今すぐ実行]ボタンを選択して、取得を開始します。