自由に動くマウスにおけるリアルタイム微小内視鏡的カルシウムイメージング

移動式ケージシステムに固定された麻酔をかけたマウスから始めます。

このマウスには、ニューロンがカルシウム感受性蛍光タンパク質を発現する脳の扁桃体を標的とする傾斜屈折率レンズが事前に埋め込まれています。

レンズ表面は保護のために覆われています。

マウスを目覚めさせてから、エアフローを適用して摩擦のないケージ回転を実現します。

レンズカバーを取り外し、小型顕微鏡を脳の上に配置します。

顕微鏡のLEDを点灯します。次に、レンズが視野の中央になるように顕微鏡を位置合わせします。

レンズ画像を撮影し、顕微鏡の位置を調整します。

ケージが回転すると、マウスの脚の動きが恐怖を生み出し、扁桃体ニューロンを刺激します。

これにより、カルシウムイオンの流入が引き起こされ、蛍光指示薬に結合します。

LED ライトはこれらのカルシウム結合インジケーターを励起し、蛍光を発します。

勾

配屈折率レンズは、この蛍光を効率的に捕捉し、顕微鏡に透過させます。

これにより、扁桃体ニューロン活動のリアルタイムカルシウムイメージングが可能になります。

GRINレンズ移植の品質を評価するには、トレーラーホームケージシステムのヘッドバー上の麻酔をかけたマウスの下にカーボンケージを置き、ケージが摩擦なく自由に動くように空気の流れをオンにします。顕微鏡グリッパーと定位固定装置マニピュレーターを使用して、小型顕微鏡をフレームに垂直に位置合わせしてから、埋め込まれたGRINレンズの表面がソフトウェア内の画像視野に現れるまで顕微鏡を下げます。埋め込まれたGRINレンズの中心を視野の中心に合わせ、埋め込まれたGRINレンズ表面の画像をキャプチャします。次に、GCaMP発現細胞の外観を観察しながら、顕微鏡の対物レンズをゆっくりと上げます。