0 閲覧数 • 2:55 分 • June 17th, 2025
ニューロンが遺伝的にコードされたカルシウム指標を発現する内側前頭前野を標的とする勾配屈折率レンズを埋め込んだ麻酔形質導入マウスを取り上げます。
レンズキャップを取り外し、クリアな光透過のために表面をきれいにします。
ミニスコープをレンズホルダーに固定します。
ミニスコープの位置を調整して、最適な焦点面を特定します。この調整により、神経細胞体が鮮明に視覚化されます。
ケーブルを取り外し、マウスを回復させます。
ケーブルをミニスコープに接続し、動作記録セットアップを備えたチャンバーにマウスを移します。
イメージング中、ミニスコープはカルシウムインジケーターを励起するために光を発し、細胞内カルシウムの流入時に蛍光を発します。
勾配屈折率レンズは、これらの光信号を脳深部組織からミニスコープに中継し、光散乱を低減し、ニューロン活動のリアルタイム視覚化を可能にします。
記録されたカルシウム一過性活動を行動観察とともに処理し、ニューロン活動を特定の行動に関連付けます。
マウスをイソフルランで短時間麻酔した後、保護キャップを外す前に小さなドライバーでベースの固定ネジを緩め、アセトンを染み込ませた綿棒でGRINレンズの表面をきれいにします。ミニスコープをケーブルに接続し、NewViewソフトウェアを起動して、鈍い鉗子を使用してベースに対するミニスコープの位置をわずかに締めたり緩めたりして、最適な焦点面の特定を開始します。最適な焦点面が決定したら、ケーブルを外してマウスをホームケージに戻す前に、ロックネジを締めます。
ビヘイビアカメラソフトをONにすると、ライブストリーム機能でマウスの振る舞いアリーナを視聴できます。トップカメラのフォーカスを手動で調整します。[トリガーストロボ]を選択し、[トリガーの有効化/無効化]にチェックを入れてから、[記録]ボタンをクリックします。次に、参照を使用して、行動記録を保存する場所を選択します。希望の画像形式を選択します。
マウスをアリーナに近づけ、ミニスコープをデータ収集システムに接続されたケーブルに接続します。次に、マウスをアリーナの中央に置きます。ビヘイビアカメラソフトウェアで、[録画開始]をクリックします。
NewViewで、LED1にチェックを入れ、キャプチャをクリックしてから、トリガーボタンをクリックして記録を開始します。これにより、カルシウムイメージングとマウスの行動を同時に記録できます。3,000フレーム後に[停止]を押してファイルを保存します。