覚醒ラットの神経活動の精密マッピングのための傍細胞記録と染色

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実験

用ジグに拘束され、目覚めているネズミを頭を所定の位置にしっかりと固定することから始めます。

以前に埋め込まれた記録チャンバーを開き、シリコーンゲルカバーを取り外します。

脳にアクセスするために再生した組織を取り除きます。

水分補給を維持するために生理食塩水を一滴加えます。

次に、シカゴブルー色素を含むプレフィルド記録ピペットをマイクロマニピュレーターに取り付けます。

ピペットを記録チャンバーに降ろし、標的の脳領域に到達します。

ピペットはニューロンと接触し、ニューロンを貫通せずにニューロンからの信号を記録します。

これらのニューロン信号を可聴クリック音として聞き、ピペットを通して電気パルスを送ります。

これらのパルスはニューロンに隣接する色素を注入し、標的脳領域の正確な染色を可能にします。

これらの細胞近傍記録および染色技術により、記録部位を正確に視覚化し、神経活動を脳の解剖学的構造に正確にマッピングできます。

ラットを布製の靴下に入れ、布製の製下を適切な実験治具の硬質チューブに移します。ラットの頭部拘束プレートを治具の対応する部分に取り付けます。次に、ラットに埋め込まれた頭部拘束ボルトに832ナットを置きます。

いて、ネジ付きステンレス鋼棒をヘッドボルトにねじ込みます。その後、記録チャンバーを開き、シリコーンゲルを取り除きます。開頭術で組織が再成長した場合は、細い鉗子を使用して開頭術を洗浄します。必要に応じて、このプロセス中にイソフルラン麻酔を使用してください。

次に、電動マイクロマニピュレーターにピペットを取り付けます。ピペットを前、後、および内側の外側軸の目的の記録位置に移動します。次に、ピペットを硬膜を腹側に進め、意図した記録位置の背側約500マイクロメートルになるまで進めます。記録された増幅電圧のスパイクイベントをオーディオモニターで聞きながら、ピペットをゆっくりと進めます。スパイクイベントが特定されたら、正の電圧たわみが約500マイクロボルトを超えるまで、ピペットを約0〜100マイクロメートル動かし続けます。

記録部位にラベルを付けるには、電流源を負の4マイクロアンペアに設定し、50%デューティサイクルで2秒のパルスを送ります。そして、電流を4分間流して、ピペットを通してシカゴスカイブルーをイオン導入注入します。

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Last updated: 18 July 2026