レーザーアブレーション誘導結合プラズマ質量分析法によるマウス脳組織中の金属の可視化

マウスの脳組織サンプルと標準をレーザーアブレーションチャンバーに入れます。

この標準には、子羊の脳組織ホモジネートにスパイクされた既知の濃度の金属が含まれています。

チャンバーをアルゴンガスで満たし、紫外線レーザービームを組織に集束させます。

レーザーはサンプルと標準物質を線形パターンで蒸発させ、微粒子のエアロゾルを作成します。

アルゴンガスは、粒子を高温イオン化源である誘導結合プラズマに運びます。

プラズマは粒子を霧化し、正に帯電したイオンにイオン化します。

イオンは質量分析計に入り、質量電荷比に基づいて分離されます。

得られたデータは参照データベースと比較され、サンプル中に存在する金属が特定されます。標準試料から検量線が生成されます。

サンプル中の金属濃度を標準物質の信号強度に対して校正することで、サンプル中の金属濃度を計算し、脳スライス内の金属の空間分布を明らかにします。

まず、脳組織サンプルとすべてのマトリックスが一致した組織標準をレーザーアブレーションチャンバーに入れます。サンプルがLACCDカメラの被写界深度内にあることを確認します。チャンバードアを閉じ、ネジを指で締めます。

次に、ICP-MSソフトウェアでキャリアガスバルブを開き、流量を毎分1.2リットルに設定します。LAソフトウェアで、2容量のアブレーションセルのキャリアガスでアブレーションセルを30分間パージします。10分ごとに、サンプルステージをチャンバーの各コーナーに移動して、セル内の残留空気の量を減らします。

ICP-MSの電源を入れ、装置を2時間ウォームアップします。器具がウォームアップしている間に、レーザーアブレーションソフトウェアで、最初の組織標準の表面に長さ約3ミリメートルのアブレーションの線を引きます。アブレーションの線をクリックし、デフォルトのビーム直径、スキャン速度、および放射フルエンスを設定します。線を 6 回複製し、線の間隔を梁の直径だけ間隔を空けます。標準ごとにこのプロセスを繰り返します。

次に、線ツールを使用して、標準と同じパラメーターを使用して、サンプルの左上隅からサンプルの最も広い点を横切ってサンプル上にアブレーション領域を描画します。

必要に応じて、標準で使用されているのと同じ間隔でサンプルを完全にカバーするために、ラインを複製します。次に、サンプルをスキャンしてから20時間後、または各サンプル間に、標準試料を断続的にスキャンするための一連の線を引きます。実験の最後に標準のスキャンを追加します。

ラインの長さとスキャン速度に基づいて、サンプルラインと標準ラインの分析時間を決定します。次に、ICP-MSソフトウェアで新しいバッチを作成し、時間分解分析を選択します。対象の質量電荷比の値を選択し、各比の積分時間を設定すると、1サイクルの合計積分時間が0.25秒になります。バッチを保存しま