器官型マウス脳スライスにおける腫瘍増殖を評価するための生物発光イメージング

腫瘍細胞を含む器官型マウス脳スライスを含むマルチウェルプレートを取ります。これらの細胞は酵素ルシフェラーゼを発現します。

インサートを持ち上げてルシフェリン溶液を培地に加え、よく混ぜます。インサートをウェルに戻します。

ルシフェリンは腫瘍細胞に入り、ルシフェラーゼによって酸化され、生物発光を放出します。

サンプルから放出される生物発光を捕捉できる in vivo イメージング システムのイメージング チャンバー内にプレートを置きます。

外部光の干渉を防ぐためにチャンバーをロックします。

カメラの設定を調整して、画像ごとに 1 つのウェルをキャプチャします。

ステージを移動して、ウェルをカメラの真下に配置します。

放出される生物発光の強度に基づいて取得時間を最適化します。

腫瘍の形状を定義し、生物発光イメージングを開始します。

生物発光シグナルを定量化して、脳スライス上の腫瘍の増殖を評価します。

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マイクロリットルの30ミリグラムのルシフェリン溶液を、滅菌フード内のインサートの下の培地にピペットで入れます。蓋付きの6ウェルプレートを装置のイメージングチャンバー内に固定カメラの下に置き、チャンバードアをロックします。

ソフトウェアを開き、機器を初期化します。カメラ設定を選択し、画像ごとに1つのウェルのみを視覚化してキャプチャできるようにした後、画像化するウェルをカメラの真下に配置します。ROIツールを使用して、腫瘍の形状とサイズにフィットさせます。ROIを測定し、合計測定値を報告して、スライス上の各腫瘍の生物発光シグナルを定量化します。