in vivoイメージングのためのマウスへの脊髄ウィンドウ移植

外科的に露出した脊髄を持つ麻酔マウスから始めます。

ホ

ウケイ酸塩カバーガラスを脊髄の上に置き、イメージング用の光学窓を作成します。

温かいアガロースをカバーガラスの端に塗布し、毛細管現象によってカバーガラスを下に引き寄せて組織の水分補給を維持します。

脊髄窓を安定させるために、部位を取り巻く無傷の骨構造に組織接着剤を導入します。

促進

剤と混合した歯科用セメントを接着剤層の上に塗布し、セメントが硬化する前に 3D プリントされたバックプレートをカバーガラスの上に配置します。

バックプレートの接着を強化するために、セメントの薄層を追加で塗布します。

セメントが乾いたら、バックプレートを二股のバックプレートホルダーに固定して、呼吸や心拍によるモーションアーティファクトを最小限に抑えます。

生理食塩水を加えて漏れがないか確認し、必要に応じて追加のセメントで密閉します。

最後に、マウスとプラットフォームを2光子顕微鏡に移してイメージングします。

カバーガラスを埋め込む場合は、露出したコードに3ミリメートルのホウケイ酸カバーガラスをそっと塗布します。小さなヘラを使用して、摂氏39度で温めた2%アガロースをガラスの端まで塗布し、毛細管現象でアガロースをカバーガラス表面の下に引き込みます。胸部レベル 11 および 13 の椎骨棘で、無傷の隣接椎骨の露出した骨関節突起に組織接着剤を塗布します。

椎弓切除部位の周囲、隣接する腱と横突起の上にリング状に追加の組織接着剤を塗布します。次に、新しいスパチュラを使用して、促進剤を混合した歯科用セメントを組織接着層に塗布し、カバーガラス窓の中央にある手術野にバックプレートを置きます。

歯科用セメントを複数の薄層に塗布すると、バックプレートの接着力が強くなりますが、歯科用セメントが乾き始める前にバックプレートをすばやく配置してください。

歯科用セメントを10分間硬化させた後、バックプレートの内側のベースと下側に追加の接着剤を塗りつぶします。

歯科用セメントを薄層に塗布すると、セメントがカバーガラスやアガロースに広がり、プロトコル全体が損なわれるリスクを軽減できます。

歯科用セメントが乾いたら、フォークしたバックプレートホルダーを窓の上の適切な位置に適用し、バックプレートをバックプレートホルダーにねじ込みます。次に、バックプレートに生理食塩水を塗布して漏れをテストします。その後、動物と手術台を2光子顕微鏡の光学テーブルに移し、カバーガラス窓を通してイメージングすることができます。