3次元イメージングによる脳スライスにおけるリアルタイム遺伝子発現モニタリング

ルシフェリンを添加した培地中のトランスジェニックマウス胚からの皮質脳スライスを含む皿から始めます。

皮

質領域には、緑色の蛍光タンパク質またはGFPを発現する神経幹細胞と、ルシフェラーゼレポーター遺伝子に融合した目的の遺伝子が含まれています。

皿

を顕微鏡ステージに置き、蛍光と輝度を測定します。

GFP蛍光のテスト画像を、関心領域に焦点を当ててキャプチャします。

ニューロンの分化中に、幹細胞は目的の遺伝子を発現し始め、ルシフェラーゼ酵素と融合したタンパク質を産生します。

ルシフェリンはルシフェラーゼ酵素と相互作用し、分化中の目的の遺伝子の発現を直接反映する生物発光を生成します。

蛍

光画像をキャプチャして特定の活動領域を特定し、生物発光画像をキャプチャして動的遺伝子発現を監視し、明視野画像をキャプチャして形態学的情報を提供します。

これらの3次元タイムラプス画像を取得して、天然組織環境内のニューロン分化中の遺伝子発現を視覚化します。

スライス培養内のルシフェラーゼレポーター発現を視覚化するには、40倍の目的を選択します。そして、サンプル皿を顕微鏡ステージに置きます。蛍光のテスト画像を取得します。そして、位置と焦点面を、適切な励起光の照明下で関心のある領域に設定します。次に、3次元発光、蛍光、明視野取得によるタイムラプス取得を24時間実行します。