0 閲覧数 • 3:06 分 • August 7th, 2025
神経栄養タンパク質である神経成長因子またはNGFと、正に帯電したキャリアタンパク質であるプロタミンを含む微量遠心チューブを取ります。
プロタミン複合体とNGFは、カプセル化を促進し、分解を防ぐ静電相互作用を介して
形成されます。ガラスバイアルに、ナノ粒子形成のために高密度リポタンパク質またはHDLの脂質組成を模倣する脂質賦形剤を含むエタノールを加えます。
均一な分散のために追加のエタノールと混合します。窒素下でエタノールを蒸発させて、薄い脂質膜を形成します。
超純水を加えて高速で均質化することで、HDLを模倣したプロトタイプナノ粒子に自己組織化できます。
NGF-プロタミン複合体をナノ粒子に導入し、撹拌しながらインキュベートすることで、NGF-プロタミンの生物活性を維持しながらカプセル化を促進します。
ナノ粒子を安定化するために懸濁液を冷却し、HDLの一次構造タンパク質であるアポリポタンパク質A-Iを加え、撹拌を続けてタンパク質をナノ粒子構造に組み込みます。
これらのNGFを搭載したHDL模倣ナノ粒子は、さらなる研究の準備が整いました。
まず、10マイクロリットルのNGFと10マイクロリットルのプロタミンUSPを1.5ミリリットルの微量遠心チューブで混合し、室温で10分間放置して複合体を形成します。次に、59マイクロリットルのホスファチジルコリンと11マイクロリットルのスフィンゴミエリンをガラスバイアルに加えます。
また、4マイクロリットルのホスファチジルセリン、15マイクロリットルのオレステロール、および45マイクロリットルのトコフェロールポリエチレングリコールコハク酸を追加します。穏やかな窒素流の下でエタノールを約5分間混合し、蒸発させます。すべての賦形剤は、ガラスバイアルの底に油性の薄い膜を形成する必要があります。
バイアルに1ミリリットルの超純水を加え、室温で9,500 RPMで5分間均質化して、プロトタイプのナノ粒子またはNPを形成します。次に、調製した複合体をプロトタイプのNPに加えます。ガラスバイアル内の小さな攪拌棒を使用して、懸濁液を摂氏37度で30分間、攪拌しながらインキュベートします。
室温でさらに30分間かき混ぜてMPを冷却します。冷却後、106マイクロリットルのアポリポタンパク質A-Iを加え、室温で一晩撹拌して、NPを模倣した最終的なNGF HDLを形成します。