マウス脳におけるTRPV1脱感作のためのレシニフェラトキシンによる脳室内治療

感覚ニューロンに発現する痛みに敏感なイオンチャネルであるTRPV1受容体の高親和性アゴニストであるレシニフェラトキシンで満たされたマイクロシリンジを取ります。

針を金属管に通し、先端の短い端を露出させて、正確な心室ターゲティングを行います。

麻酔をかけたマウスをうつ伏せにし、アルコールを使用して頭を消毒します。頭蓋骨を安定させるために頭をしっかりと持ちます。

矢

状縫合糸に引っ掛かるまで、頭皮の上で針を横方向に動かします。

針を右にずらし、吻側に移動して冠状縫合糸に引っ掛けます。

針を右側脳室に挿入し、RTXをゆっくりと注入します。

針を短く保持して RTX の拡散を許可し、逆流を防ぐためにゆっくりと引き抜きます。

RTX は脳内の感覚ニューロンの TRPV1 チャネルに結合し、持続的なカルシウム流入と長期にわたるニューロンの脱分極を引き起こします。

これにより、リン酸化を介した TRPV1 の脱感作が引き起こされ、続いて TRPV1 の内在化とリソソーム分解が引き起こされ、痛みの刺激に対するニューロンの反応性が低下します。

マウスをペントバルビタールナトリウムで腹腔内に麻酔し、正位反射の喪失を確認します。皮下治療の場合は、体重10グラムあたり0.1ミリリットルの量で、1ミリリットルあたり20マイクログラムのRTXを首の後ろに注射します。対照群の場合、同じ方法で車両を注入します。使い捨ての27ゲージの針を金属管に通し、針の先端を3〜3.5ミリメートル露出させます。

次に、マウスの扁平上皮骨を指でしっかりと持ちます。頭皮の上で針を横方向に動かし、矢状縫合糸を見つけます。針先が縫合糸に引っ掛けられているので、先端を右に約1ミリ動かします。次に、先端を吻側に動かして冠状縫合糸を見つけます。その後、針をゆっくりと垂直に挿入します。RTX 溶液を 10 秒かけて注入し、その後さらに 10 秒間保持します。その後、針をゆっくりと引き抜き、マウスをホームケージに戻します。