グルコース欠乏神経芽細胞腫細胞における大気圧血漿治療の評価

培地を含むマルチウェルプレートで神経芽細胞腫細胞の培養物を取ります。

ウェル内の培地をグルコースフリーのニューロン培地に置き換えて、酸化ストレスを誘発します。

プレート

をプラズマジェットノズルの下に置いて、均一な露光に最適な距離に配置します。

選択されたウェルを低用量のヘリウムベースの大気圧プラズマジェット(APPJ)で処理し、制御されたレベルの活性酸素と窒素種を生成します。

細胞をインキュベートして、APPJ処理ウェルでストレス応答経路の活性化と抗酸化酵素のアップレギュレーションを可能にします。

グルコース欠乏下にある未処理のウェル内の細胞は、さらなる酸化的細胞損傷を受けます。

細胞生存率アッセイ試薬を加えてインキュベートします。生細胞は試薬を着色された製品に還元します。

マイクロプレートリーダーを使用して色の強度を測定します。

APPJ処理されたウェルは、細胞生存率が高いため色の強度が増加しますが、未処理のウェルは強度が低く、グルコース欠乏下でのAPPJの神経保護効果が確認されています。

石英管のノズルと96ウェルプレートを配置するプラットフォームの間の距離を3センチメートルに調整して、ビームが培地表面に接触できるようにします。処理前に、各ウェルの培地をグルコース培地を含まないRPMI 1640に変更します。次に、プレートを大気圧プラズマジェットノズルの下に置きます。次に、細胞を別々のウェルで0、1、2、4、8、および12秒間処理します。

処理後、細胞を摂氏37度の細胞インキュベーターで1時間インキュベートし、その後、各ウェルに10マイクロリットルのCell Counting Kit 8溶液でインキュベートします。次に、細胞を摂氏37度で4時間インキュベートします。最後に、マイクロプレートリーダーで450ナノメートルの吸光度を測定します。