JoVE 実験百科事典
神経科学
0 回視聴 • 4:05 分 • August 8th, 2025
まず、麻酔をかけたマウスを椅子の背もたれサポートと平行で座面に対して垂直にして位置決め装置に置きます。
マウスは頭を下げて前かに向かう姿勢で配置され、椅子ベルトを使用して固定されます。
ニューロンを標的とするペプチド-siRNA複合体を充填したマイクロピペットを使用して、片方の鼻孔の近くに滴を置き、マウスが溶液を自然に吸入できるようにします。
吸入中にマウスの頭をそっと下に押して、溶液が肺に流れ込まないようにします。
少し一時停止してから、もう一方の鼻孔で投与を繰り返します。
残りのマウスについても手順を繰り返します。
複合体は鼻粘膜を貫通し、そこから嗅覚神経と三叉神経に入り、それらを通過して脳に到達します。
脳内では、複合体はニューロン受容体に結合し、エンドサイトーシスを起こし、細胞内siRNA送達を促進します。
siRNAはRISC複合体の一部となり、標的mRNAに結合すると遺伝子サイレンシングを誘導します。
この手順を開始するには、手術面を維持するためにマウスの二足歩行反射の麻酔レベルを評価します。次に、必要なすべての試薬に簡単にアクセスできるように、位置決め装置を適切な距離と高さに配置します。
次に、動物の目に軟膏を塗ります。1 本のマウスを椅子ベルトで固定し、マウスが不快感なくリラックスした姿勢にある間、マウスの前肢が自然なサポートを提供していることを確認します。残りのマウスについて手順を繰り返します。各マウスを椅子の背もたれサポートと平行に置き、椅子の座面に対して 90 度にして、指定された椅子にそっと置きます。
動物を押したり押したりせずに、頭を下げたり前かにしたりせずに自然に横たわらせます。すべてのマウスをストラップで固定したら、すぐに鼻腔内接種を開始します。鼻腔内送達を行うには、マイクロピペットに2マイクロリットルのRVG9R-siRNA複合体溶液をロードします。ピペットを利き手で持ち、もう一方の手で支えて、siRNAを投与中の制御不能な動きを避けます。
マウスが直接吸い込めるように、約2マイクロリットルの液滴を片方の鼻孔のすぐ近くに置きます。小さな液滴が簡単に形成されない場合は、ピペットチップを新しいものと交換し、操作を繰り返してください。息を吸いながら人差し指でマウスの頭を5秒間ゆっくりと押し下げ、その位置を維持します。
肺への薬物の排出を防ぐために、マウスが吸い込んでいる間、人差し指でマウスの頭を5秒間わずかに押し下げることが重要です。
ストップウォッチを起動して、この3〜4分後に最初のマウスの2番目のネアへの接種を計ります。この時間間隔は、マウスが最初の用量の吸入を完了し、正常な呼吸を回復するために必要です。最初のマウスに代替鼻孔を接種する間の3〜4分の間隔で、デバイス上に配置された残りの3匹のマウスのそれぞれに1つの鼻腔内接種を行います。
ストップウォッチが鳴ったら、最初のマウスに2番目の鼻孔を接種し、他のマウスに対して上記の手順を繰り返します。4匹のマウスすべてに20〜30マイクロリットルが供給されるまで、この手順を繰り返します。接種手順全体が完了するまでに約30〜45分かかります。動物を指定されたケージに戻します。マウスが胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、マウスを放置しないでください。