落射蛍光顕微鏡を使用した膝状神経節ニューロン応答の in vivo イメージング

処理末梢ニューロンのクラスターである膝状神経節が外科的に露出した麻酔をかけたマウスから始めます。

これらのニューロンは、カルシウム結合時に蛍光を発するカルシウム指示薬であるGCaMPを発現します。

神経節を覆っている液体をすべて取り除き、鮮明に視覚化します。

マウスを顕微鏡下の吸収パッドの上に置き、解剖学的ランドマークを使用して膝状神経節の位置を特定します。

落射蛍光スコープの適切なフィルターを使用して、GCaMP発現ニューロンからの緑色蛍光を検出します。

次に、テイスタントデリバリーチューブに接続されたディスペンスニードルをマウスの口に挿入し、テイスタントをデリバリーします。

味覚は味覚受容体細胞を刺激し、神経節ニューロン受容体に結合するATPを放出し、カルシウムの流入を引き起こします。

これらのカルシウムイオンはGCaMPに結合し、蛍光発光を誘発します。

カメラを顕微鏡の視野に合わせ、ビデオ録画と味覚送達を同期させて、蛍光の変化を通じてリアルタイムのニューロン活動をキャプチャします。

テイスタントパネルを実行するには、吸引を使用して膝状から液体を取り除き、解剖顕微鏡下でマウスを吸収パッドの上に置きます。水疱に残された穴、側頭骨の穴、および第7神経を使用して、膝状神経節を見つけます。また、落射蛍光スコープのFITC/GFPフィルターを使用して、個々のGCaMP発現膝状神経節ニューロンをチェックします。1つのテイスタントラインの調剤針を動物の口にしっかりと入れます。ビデオ録画の開始とテイスタントプレゼンテーションの開始を同期させ、ライブフィードを見て回答を確認します。