逆行性ニューロントレースのためのラット脊髄へのウイルスベクター注射

高効率の逆行性輸送またはHiRetウイルスベクターを含むマイクロニードルを備えたマイクロインジェクターを取ります。

HiRetウイルスエンベロープ内の糖タンパク質は、シナプスを介してニューロンへの侵入を促進します。このウイルスは、蛍光タンパク質をコードする遺伝子も持っています。

腰椎脊髄1〜4が露出した麻酔ラットを取ります。

脊髄の正中線を基準として使用して、針を注射部位の上に配置します。

針を脊髄に下げます。

制御された速度でウイルスの投与を開始します。

針を抜く前に、ウイルスの拡散に十分な時間を確保してください。

ニューロン受容体はウイルスの糖タンパク質と結合し、シナプスを介したウイルスの侵入を促進し、軸索を介して体細胞への輸送を促進します。

ウイルス遺伝子は宿主ゲノムと統合され、蛍光タンパク質の発現が可能になります。

これらのウイルスは接続されたニューロンを通過することも移動し、ニューロン経路の追跡を可能にします。

針を脊髄の正中線に置き、マイクロマニピュレーターのバーニアスケールを使用して針を横方向に0.8ミリメートル向けます。次に、針がくぼみになるまで脊髄まで下げますが、硬膜に穴を開けないようにします。そして、針の先端が1.5ミリメートルの深さまで沈むまで、針で硬膜に穴を開ける動きを素早くひねります。

針が所定の位置に配置されたら、毎分400ナノリットルの速度でウイルスを送達するようにインジェクターをプログラムし、色素フロントの進行を観察してウイルスが脊髄に侵入していることを確認します。注射が終了したら、ウイルスの拡散を促進するために針を脊髄に2〜5分間置いてから、針をゆっくりと引き抜いて次の注射部位に配置します。