感覚軸索再生を促進するマウス後根核のエレクトロポレーション媒介トランスフェクション

感覚ニューロン細胞体を含むL4およびL5後根神経節が露出した麻酔マウスを取ります。

軸索再生を調節する蛍光色素タグ付きRNAコンストラクトとトレーサー色素をマイクロインジェクションピペットにロードします。

混合物をDRGに注入します。

エレクトロポレーション電極を使用して、DRGに電気パルスを印加します。

これにより、感覚ニューロン細胞体の膜が破壊され、構築物が細胞質に入ることを可能にする細孔が形成され、トランスフェクションが促進されます。

切開部を縫合し、マウスを回復させます。

数日後、マウスを再麻酔して固定します。

左側の正中線の横側に切開を行います。筋肉を解剖して坐骨神経を露出させます。

神経を粉砕して感覚ニューロン軸索を損傷します。縫合糸の結び目でサイトをマークします。

切開部を縫合し、マウスを回復させます。

トランスフェクトされた構築物は、DRG感覚ニューロン細胞体のmRNAを標的とし、タンパク質産生を一時的に調節して、損傷後の感覚軸索の再生を促進します。

DRG注入の場合は、DNAプラスミドまたはRNAオリゴをガラスキャピラリーピペットにロードします。次に、キャピラリーガラスピペットの先端をDRGに慎重に挿入します。そして、細胞内マイクロインジェクションディスペンスシステムを使用して、DNAプラスミドまたはRNAオリゴの1マイクロリットル溶液を徐々に注入します。

エレクトロポレーションの場合は、ターゲットのDRGを電極でそっとつまみ、エレクトロポレーションシステムで5角の電気パルスを印加します。続いて、筋肉を閉じ、次にナイロン縫合糸で皮膚を層にします。DRGエレクトロポレーションの2〜3日後、マウスを腹腔内に麻酔し、コルクボードに手足をテープで留め、正中線に沿って左側に0.5センチメートルに1センチメートルの切開を行います。

次に、大殿筋や梨状筋などの筋肉を縦方向に切断します。次に、大坐骨孔と坐骨切痕の間の坐骨神経のセグメントを露出させます。顕微手術鉗子で神経を12秒間押しつぶし、ナイロン神経上縫合糸で圧傷部位に印を付けます。その後、筋肉と皮膚の層をナイロン縫合糸で閉じます。