モーターエンドプレートに沿って筋肉内注射を行い、トレーサーをラットの運動ニューロンに直接シャトルします

麻酔をかけたラットを取り、目の潤滑剤を塗ります。

標的の手足を剃り、皮膚を滅菌し、標的の筋肉への最適なアクセスを確保するためにラットを配置します。

皮膚を持ち上げて切開し、筋肉を露出させます。

運動ニューロン軸索終末が筋線維とシナプスして神経筋接合部を形成する領域である運動終板またはMEPの写真を参照してください。

MEP領域を露出した筋肉に心の中でマッピングします。

蛍光トレーサーを含むガラス製マイクロピペットを取ります。

MEP領域に沿った複数のポイントにトレーサーを筋肉内注射します。

余分なトレーサーを取り除き、切開部を閉じ、鎮痛剤を投与します。

注射は神経筋接合部でのトレーサーの利用可能性を高め、軸索終末でのエンドサイトーシスを促進します。

小胞内に封入されたトレーサーは、脊髄の運動ニューロン細胞体に逆行性に輸送されます。

脊髄にトレーサー標識された運動ニューロンが存在することは、MEP 標的送達の神経治療の可能性を示唆しています。

モーターエンドプレートに生きた筋肉を注入するには、まずマイクロピペットプーラーを使用して、プランジャーを備えた段階的なガラスマイクロピペットを引っ張ります。次に、解剖顕微鏡を使用して、各内腔の内径が約0.5ミリメートルになるように、一対の鉗子でマイクロピペットの先端を壊します。次に、引っ張ったピペットにフルオロ金を入れます。

次に、麻酔をかけた動物に眼用潤滑剤を塗布し、注射する手足を剃ります。ガーゼを使用して、クロルヘキシジンと70%アルコールの3回の交互のスクラブで剃った部分を拭きます。次に、動物を清潔なアンダーパッドの上に置き、対象の筋肉にアクセスできるようにします。動物が所定の位置に着いたら、歯のグリップ付きの鉗子を使用して、標的の筋肉の上の皮膚を下にある筋肉組織から離し、外科用はさみを使用して皮膚を切開します。

切開部が目的の筋肉を完全に露出させるのに十分な大きさであり、筋膜への破壊を最小限に抑えるように注意してください。次に、モーターエンドプレートの写真を使用して、関心のあるモーターエンドプレート領域の位置と形状を筋肉に精神的に転置し、モーターエンドプレート領域の全長に沿って1〜2マイクロリットルのフルオロ金を3〜4回注射しました。

最後の注射後、筋肉を優しく拭いて浸透を取り除きます。次に、鈍い鉗子を使用して、切開した皮膚の両端を近づけます。外科用クリップで傷を閉じ、適切な局所麻酔薬で傷の全範囲に浸潤させます。