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遺伝性難聴の麻酔をかけたマウスの子犬を例に挙げます。
この状態では、内耳の有毛細胞にはグルタミン酸トランスポーターが欠けており、グルタミン酸が小胞に詰め込まれて放出されるのが妨げられます。
これにより、聴覚神経への音声信号の伝達が妨
げられます。マウスの左耳の後ろを剃り、消毒し、眼軟膏を塗ります。
首を伸ばして切開します。
脂肪組織と筋肉を引っ込めて側頭骨を露出させます。
側頭骨の一部である鼓膜水疱に穴を開け、開口部を広げて、内耳への薄い障壁である丸い窓膜またはRWMを露出させます。
RWMに穿刺し、治療遺伝子を運ぶアデノ随伴ウイルスベクターを注入します。
ウイルス粒子は拡散して有毛細胞に入ります。
有毛細胞内では、ウイルス粒子が遺伝物質を核に届け、グルタミン酸トランスポーターの生成を引き起こします。
これにより、グルタミン酸の包装と放出が可能になり、聴覚神経への音の信号が回復します。
つま先つまみで麻酔を確認した後、生後10〜12日目のマウスの左耳介後領域を剃り、70%エタノールとポビドンヨードで皮膚を消毒します。次に、保護眼科軟膏で目を覆い、首を伸ばして動物を温熱パッドの上に置きます。手術の準備が完了したら、小さなハサミで皮下組織を切開し、耳介後筋を露出させます。脂肪組織を切開部の後側に引っ込めた後、切開部に垂直に筋肉を左右に分離します。
側頭骨を露出させる。25ゲージの針を使用して鼓膜水疱に穴を開けます。必要に応じて鉗子で骨を剥がして穴を広げ、蝸牛の基底回転へのアクセスを可能にします。
次に、遡骨動脈と丸い窓膜を視覚化できるように穴を十分に広げます。ホウケイ酸キャピラリーピペットで中央の丸い窓膜にそっと穴を開けます。丸い窓の膜を滅菌濾紙で乾燥させます。次に、体液の流出が安定するまで5〜10分待ちます。
このステップでは、ピペットを保持して前進させるときに注意して、丸い窓の膜のミシン目をできるだけ小さくします。顕微鏡の用途に応じて、ピペットは手またはマイクロマニピュレーターで保持できます。ここでわかるように、顕微鏡がマウスに近づきすぎてマイクロマニピュレーターが使えないため、ピペットを手で持ちます。
次に、1〜2マイクロリットルのウイルスを直径15マイクロメートルの先端を持つ引っ張られたガラスピペットに引き込み、丸い窓の膜に以前に開けたのと同じ穴からウイルスを鼓膜にマイクロインジェクションします。