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椎骨が露出した麻酔ラットを取り、棘突起と椎板を胸部レベルT7からT9から
切除します。T8の上下の背根と腹根を切ります。
生理食塩水を塗って出血を止め、スポンジを使用して液体を取り除きます。
T8とT9の間の脊髄を切断して神経線維を切断します。
隙間に圧縮泡を置き、生理食塩水を塗ります。
出血が止まったら、泡を取り除き、残留液を取り除きます。
事前に準備された圧電ポリマー導管を、窓を開いた状態で、吻側脊髄断端の上に
スライドさせます。尾側の切り株を導管の反対側の端に挿入します。
注入可能なマトリックスに懸濁したシュワン細胞を導管窓から
注入します。窓をしっかりと閉めます。
シュワン細胞は導管に生息し、軸索の成長をサポートする神経栄養因子を分泌します。
導管は構造的ガイダンスを提供し、その圧電特性は神経突起の成長のための生体電気手がかりを生成します。
徐々に、軸索は橋を横切って再生し、切り株間の連続性を回復します。
すべての椎板が除去されたら、特にT8で横突起間の隙間が見えることを確認し、T7とT9の間の両側に沿った骨を調べて、外側に突き出た骨片がなく、後根が見えるようになるはずです。角度の付いたバネハサミを使用して、T8の上下の背根と腹根を切ります。そして、出血を止めるために脊髄に生理食塩水を加えます。
次に、T8の横突起の隙間に脊髄の上に角度の付いたバネハサミを置き、神経組織を完全に切断するために1つの切り込みを入れます。得られた2〜2.5ミリメートルの隙間に圧縮フォームの小片を置き、すぐにその領域に生理食塩水を追加します。
切断された臍帯の断端が止血に達するのを待っている間に、吸収三角形を薄くて長い断片に切断し、PBSストレージから導管を取り外します。導管に三角形をいくつか配置して余分な PBS を取り除き、事前にカットされた窓が開いていることを確認します。
次に、GFPシュワン細胞ペレットから培地を取り出し、シュワン細胞を10マイクロリットルの冷たいDMEM / F-12に再懸濁します。10マイクロリットルの冷注入可能なゲルを細胞懸濁液に加え、ピペッティングを繰り返してよく混合します。次に、細胞懸濁液を氷の上に置きます。臍帯断端の準備ができたら、圧縮フォームを取り除き、吸収三角形の長い部分を使用して椎弓切除領域から生理食塩水と血液を取り除きます。
次に、マイクロスパチュラを使用して吻側の切り株をそっと持ち上げ、窓を上に向けて導管を切り株の上に滑り込ませます。切り株全体が挿入され、導管に過剰な出血がないように注意します。尾側の切り株をそっと持ち上げ、導管のもう一方の端をその上に滑り込ませます。切り株全体が挿入され、窓が背側にあるように注意します。
次に、ウェスタンブロットローディングチップを備えたマイクロピペットを使用して、20マイクロリットルのGFPシュワン細胞注射可能なマトリックス混合物を、事前にカットされたウィンドウの1つからコンジットに注入します。そして窓を閉めます。