0 閲覧数 • 2:11 分 • August 7th, 2025
脂質ベースの細胞外ナノ小胞であるエクソソームの懸濁液を含むチューブから始めます。
リン酸緩衝生理食塩水またはPBSをチューブに加え、均一なエクソソーム分散を得る。
エクソソーム溶液を吸引し、メンブレンフィルターを使用してろ過し、残留汚染物質を除去します。
このろ過されたエクソソーム懸濁液を新しいチューブに移します。
神経治療剤であるドーパミンを含む溶液をエクソソーム懸濁液に加え、続いて界面活性剤であるサポニンを加えます。
混合物を生理学的温度でインキュベートして、エキソソーム膜透過性を高めます。
サポニンは、エクソソーム膜から膜に結合したコレステロールを選択的に除去し、エキソソーム脂質二重層に細孔を作ります。
ドーパミンはこれらの細孔を通ってエクソソームに拡散します。
時間が経つにつれて、エクソソーム膜の脂質が再分布し、細孔が閉じてドーパミンをエクソソーム内にカプセル
化します。次に、混合物溶液を超遠心分離して、ドーパミンを充填したエキソソームをペレット化します。
遊離ドーパミンとサポニンを含む上清を取り除きます。
ドーパミンを負荷したエクソソームを含むペレットは、さらなる研究の準備が整いました。
超遠心分離で先に採取したエクソソーム懸濁液に3ミリリットルのPBSを加え、0.22ミクロンのフィルターを使用してろ過して希釈した懸濁液を滅菌します。
次に、滅菌したエキソソーム懸濁液500マイクロリットルを別のチューブに移します。
次に、500マイクロリットルの0.5ミリグラム/ミリリットルのドーパミン溶液とサポニンを滅菌懸濁液に順次加えます。インキュベーション後、懸濁液を超遠心分離します。