マウスの網膜下腔への蛍光色素の送達

麻酔をかけたマウスを取り、ひげをトリミングして、目の視覚化を容易にします。

マウス

を顕微鏡下に置き、体温を維持するために保温パッドの上に置きます。

瞳孔を拡張して網膜の視覚化を可能にし、乾燥を防ぐために目を滑らかにします。

透明な膜である結膜をつまんで切開します。

下にあるテノン嚢を切開し、目を回転させながら結合組織層を取り除きます。

これにより、目の外層である強膜が露出し、視神経近くの注射部位へのアクセスが可能になります。

強膜切開を行い、網膜光受容体層と網膜色素上皮の間の網膜下腔に蛍光色素を含む注射器を挿入します。

染料を注入して制御された網膜剥離を作成し、針を引き抜きます。

感染を防ぐために目をすすぎ、抗生物質を塗布してください。

マウスを回復させ、痛みを和らげます。マウスは、網膜下注射の成功を確認するためのイメージングの準備が整いました。

この手順を開始するには、麻酔をかけたマウスのひげをトリミングして視覚化を容易にし、循環水パッドで動物の体温を摂氏 37 度に維持します。次に、2.5%フェニレフリン点眼薬で瞳孔を拡張します。

次に、メチルセルロース点眼薬を塗布して乾燥を防ぎ、麻酔による一過性白内障を最小限に抑えます。手術前に器具を滅菌してください。その後、希釈したフルオレセインをバイオセーフティキャビネットで調製します。注射器に適切な量のフルオレセインを入れます。

次に、つま先をつまんで動物が深く麻酔されていることを確認し、注射する目が上を向いて解剖顕微鏡ではっきりと見えるようにマウスを配置します。先端の細い鉗子で側頭結膜をそっとつまみます。

次に、湾曲したヴァンナスはさみを使用して、周囲に約90度の切開を行います。下にあるTenonのカプセルで手順を繰り返します。その後、地球を鼻に回転させながら、細い先端鉗子で周囲の結合組織を切除します。視神経から約0.5ミリメートル離れた注射部位に向かって作業し、眼窩後洞を破壊しないように細心の注意を払います。

重要なステップは注射部位を露出させることであり、これには眼自体や関連する構造に損傷を与えることなく眼を回転させる必要があり、特に眼窩の血嚢への損傷を避ける必要があります。

この手順では、22.5度の眼科用ブレードでアイカップをそっと引っ掻いて、注射部位の強膜に小さな切開を行います。この切開は、針の先端が強膜を通過できる十分な大きさにする必要があります。

次に、面取りされた33ゲージの針を、面取りを網膜と平行に向け、強膜切開術に挿入します。プランジャーを均一な圧力でゆっくりと押して、所望の量の0.01%フルオレセインを注入します。

針が網膜下腔にある場合、プランジャーを押すとわずかな抵抗が感じられることに注意してください。針が網膜に穴を開けても抵抗はありませんが、針が強膜またはRPEを貫通しない場合は抵抗が高くなります。

もう一つの重要な