蛍光マクロコピーを使用したマウス脳における脳脊髄液輸送の in vivo イメージング

まず

、外科的に露出した頭蓋骨を蛍光マクロスコープの下に配置した麻酔をかけたマウスから始めます。

頭は頭蓋骨の上にヘッドプレートを使用して安定し、頭蓋窓を作成します。

蛍光トレーサーを含むカニューレが脳の大槽(CM)に挿入されます。

CM は、脳を取り巻くくも膜下腔を循環する脳脊髄液 (CSF) の貯蔵庫として機能します。

可視光を使用して、頭蓋骨に焦点を合わせます。

蛍光トレーサーをCMに注入し、蛍光イメージングに切り替えます。

特定の波長の光を使用してトレーサーを励起します。

トレーサーはこの光を吸収し、蛍光シグナルを発します。

蛍光トレーサーはCSFとともに移動し、くも膜下腔を通って脳動脈を取り巻く血管周囲腔への流れと、細動脈を貫通

して

脳組織に入る

流れを視覚化できます。

時間の経過に伴う蛍光シグナルをキャプチャして、CSFの流れを視覚化します。

マウスとカニューレに取り付けられた輸液ポンプをカートに慎重に置き、巨視鏡に運び、ヘッドホルダーを巨視鏡のステージに置きます。シリンジポンプからシステルナマグナカニューレまでのラインがピンと張っておらず、よじれがないことを確認してください。呼吸数と粘膜のピンク色を観察して、良好な酸素化を確認します。

顕微鏡カメラと発光ダイオードの電源を入れ、ライブモードを開始します。フィールドの上部にある鼻前頭縫合糸と下部のラムドイド縫合糸がはっきりと見えるように、イメージングフィールドの倍率を調整します。所定の位置に設置したら、ヘッドホルダーをマクロスコープステージにテープで固定し、焦点面が冠状縫合糸の後方の頭頂骨の外側に位置するまで、露出した頭蓋骨にマクロスコープの焦点を合わせます。

CSFトレーサー注入の場合は、輸液ポンプを適切な速度と容量に設定し、各チャネルのトレーサーの適切な励起波長と露光時間を設定します。次に、トレーサー注入とイメージングを同時に開始する前に、マクロスコープのトリガー機能が正しいことを確認します。