人工多能性幹細胞由来ヒトミクログリア細胞のマウス脳への経鼻移植

阻害剤を含む食事を与えられた麻酔マウスを取ります。

脳組織では、この阻害剤はミクログリア細胞を選択的に排除します。

ヒアルロニダーゼ溶液を両方の鼻孔に塗布します。

溶液の排出を防ぐために、マウスを仰臥位に短時間置きます。

ヒアルロニダーゼは鼻粘膜の細胞外マトリックスを分解し、細胞を緩め、組織の浸透を促進します。

多能性幹細胞由来のヒトミクログリアまたはiPSMG細胞懸濁液を1つの鼻孔に投与します。

マウスを仰臥位に置きます。次に、もう一方の鼻孔に懸濁液を投与します。

投与を数回繰り返します。

iPSMG細胞は鼻粘膜に浸透し、嗅覚経路をたどって脳に到達し、それによって血液脳関門を迂回します。

マウスが回復するまで待ちます。

マウスを麻酔し、移植培地を一定の間隔で鼻腔内に投与します。

培地中の成長因子は、マウス脳に移植されたiPSMG細胞の増殖と生存をサポートします。

経鼻移植のためにマウスを準備するには、雄マウスにPLXを含む食事を7日間与えます。7日目の終わりに、PLX食をつかみ、マウスに通常の食事を与えます。iPSMGの経鼻移植の1時間前に、10マイクロリットルのピペットチップを使用して、2.5マイクロリットルのPBS中のヒアルロニダーゼを各鼻孔に2回投与し、鼻粘膜への透過性を高めます。

ヒアルロニダーゼを塗布した後、マウスを仰臥位に置きます。iPSMGの経鼻移植の10分前に2.5マイクロリットルのヒアルロニダーゼを投与します。10マイクロリットルのピペットチップを使用して、2.5マイクロリットルの細胞懸濁液をマウスの1つの鼻孔に塗布します。マウスを仰臥位に5分間置いてから、もう一方の鼻孔に細胞懸濁液を投与します。

細胞懸濁液を4回投与し、動物あたり総量20マイクロリットルを塗布します。PLX摂食の停止から48時間後、同じマウスにヒアルロニダーゼと細胞懸濁液の投与を繰り返します。サイトカインの投与には、10マイクロリットルのピペットチップを使用して、2.5マイクロリットルの移植培地をマウスの1つの鼻孔に塗布します。