JoVE 実験百科事典
神経科学
0 回視聴 • 2:07 分 • June 17th, 2025
外科的に切除された腫瘍から得られた神経膠芽腫組織スライスから始めます。
細胞の生存をサポートするために、組織スライスを培地に維持します。
スライス内の腫瘍細胞は緑色の蛍光タンパク質(GFP)を発現し、細胞遊走中の腫瘍細胞の視覚化を容易
にします。組織スライスを含む培養プレートを共焦点顕微鏡のステージに置きます。
培地の温度を維持するためにステージトップインキュベーターを配置します。
対物レンズを選択し、顕微鏡下でスライス培養物を視覚化します。
顕微鏡はレーザー光を使用して細胞内の蛍光タンパク質を励起します。
次に、サンプルをレイヤーごとにスキャンして、さまざまな深さで画像をキャプチャします。
画像を重ねて、セルの詳細な 3D 表現を作成します。
次に、Zスタック画像を一定の間隔でキャプチャして細胞の動きと方向を追跡し、時間の経過に伴う腫瘍細胞の移動を研究できるようにします。
皿を共焦点顕微鏡の37度、5%CO2密閉顕微鏡ステージ上部インキュベーターに入れます。長作動距離の10倍の空気対物レンズを単一光子または多光子イメージングと組み合わせて使用して、細胞遊走の3次元の時間分解画像をキャプチャします。顕微鏡でスライスを視覚化し、スライスの端と組織の中心の間に蛍光標識腫瘍細胞の適切な密度を持つ適切なフィールドを見つけます。次に、イメージングソフトウェアの多次元解析モードで、イメージングするすべての位置に可視蛍光セルラーシグナルが含まれるように、Zスタックの中心を設定します。そして、Zスタックの取得ごとに適切な時間を設定します。