ラットモデルにおける組換えアデノ随伴ウイルスベクターの静脈内投与

まず、麻酔をかけたネズミを尻尾を露出させて横向きに置きます。

尾静脈の外側を見つけ、その長さに沿って注射部位を特定し、その領域を消毒します。

注射部位の上にわずかな圧力を加えて静脈を拡張します。

標的遺伝子を運ぶ組換えアデノ随伴ウイルスまたはAAVベクターを含む注射器を取ります。

針を静脈に合わせ、尾の皮膚に穴を開けます。

静脈への圧力を解放して、正常な血流を回復します。

尾静脈に針を挿入し、ゆっくりとウイルスを注入します。

注射後、針を引き抜き、圧力をかけて出血を止め、ラットの回復を監視します。

外側尾静脈はウイルスを血流に送り込み、そこで心臓を循環して脳に入り、ニューロンに到達します。

ニューロン内部では、ウイルスは核に入り、その遺伝物質を放出し、神経治療用途の標的タンパク質の産生を促進します。

麻酔システムを使用してラットを適切に麻酔します。つま先のつまみに対する反応がないことにより、適切な麻酔面を確保します。次に、ラットを作業エリアに横向きに置き、ノーズコーンを使用して麻酔を維持します。ラットを横向きにして横たわった状態で、片方の外側尾静脈が上を向く必要があります。

注射部位は尾の長さの3分の2下にあります。アルコール調製パッドで注射部位を拭きます。注射部位の少し上にある尾部を、1本の指で尾静脈の真上にしっかりと持ちます。これにより静脈が拡張します。ベベルを上に向けて、針を目に見える尾静脈と同じ方向に合わせます。

もう一方の手が尾を握って尾静脈を押さないように細心の注意を払いながら、尾静脈の上の皮膚を突き刺します。尾静脈からの圧力を解放して、正常な血流を可能にします。次に、針を静脈に動かします。針が尾静脈に穴を開けていることを確認するには、プランジャーを少し引き戻します。針が静脈にある場合、血液は針に流れ込みます。

針の位置を変更した後、必要に応じて、注射器の端を尾に当てて針を安定させます。ベクターを毎秒約20マイクロリットルでゆっくりとテールに注入します。

注射が不十分な場合、動物は部分的にしか形質導入されず、結果はおそらく役に立ちません。しかし、練習すれば、優れた注射は非常に再現性が高く、信頼性があります。

ベクターが投与されている場合は、尾から針を抜き、ガーゼパッドを注射部位に押し付けて、30〜60秒間出血を止めます。イソフルラン麻酔と酸素をオフにします。意識を取り戻すまでネズミを監視し、ケージに戻します。AAVで汚染された可能性のある材料は適切なバイオハザード容器に廃棄し、ワークステーションを70%エタノールで洗浄します。