Name: ブラジルにおけるフィールドリリースのための遺伝子組み換え Aedes aegypti の大量生産 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 17 min 41 s
Description: 学ぶ、RIDL®システムを用いた遺伝子組み換えAedes aegyptiの大量飼育技術。高品質な雄蚊の生産と品質管理、性別分離の手法を解説し、ブラジルでのフィールドリリースに向けた効率的な繁殖方法を示す。

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ビオファブリカ・モスカッド・ブラジル、フンダサン・デ・アンパロ・ア・ペスキサ・ド・エスタド・デ・サンパウロ(FAPESP)、コンセロ・ナシオナル・デセンボルヴィメント・シエンティフィコ・エ・テクノロジア(CNPq)の財政支援に感謝します。 また、以下の方々のご支援に感謝申し上げます。ミリアム・ドス・サントス、ギルデアン・シルバ、ゲッシラン・ドス・サントス、ファビオ・ゴンサルベス、ジョン・ポール・オリベイラ、ルイザ・ガルジエラ、ホセ・カルロス・バレンサ。

昆虫の要件
1. 概要
<ol><li>質量の飼育は、それぞれがマスリアリングユニットの異なる領域で行われるいくつかのフェーズを持っています。 図1 は、飼育の主な段階と、それらが大量の飼育施設で発生する場所を示しています。</li>
</ol>2. 昆虫のバイオセキュリティに関する考察
<ol><li>このプロジェクトは、サンパウロ大学(ブラジル)の動物倫理委員会によって承認され、必要なすべての許可と承認が得られました。</li>
	<li>RIDL システムは条件付き致死性を使用します。栄養補助食品(テトラサイクリン)は、昆虫を大量に飼育することを可能にするRIDL系の発現を防ぐ。テトラサイクリンがなければ蚊は死ぬ。テトラサイクリンは野生のAe.aegyptiの繁殖地には見つからないので、脱出から生み出された子孫は生き残りません。 これは、他の方法(すなわち放射線)によって殺菌された野生型(WT)昆虫を使用する上で、セキュリティの追加レベルを追加します。</li>
	<li>二重ドア入力、「公認人員のみ」の標識と昆虫スクリーンを使用して、昆虫の中に。任意の窓は、WT昆虫とのコロニーの汚染を避けるために密封され、昆虫の中からの脱出を防ぐのに役立つ必要があります。</li>
	<li>現地の規制および当局には、特定の追加要件または代替要件がある場合があります。早い段階で情報やガイダンスについては関係当局に連絡し、必要な許可と承認を確保してから、昆虫の中でRIDL株を確立してください。</li>
	<li>大量飼育昆虫はRIDL飼育にのみ使用してください。他の株や昆虫は存在してはならない。これは、RIDL株の汚染と、フィットネスと生存に影響を与える可能性のある病原体との汚染を避け、解放された男性の生産性と有効性を低下させるためです。</li>
</ol>3. 昆虫設計
<ol><li>
図2 は、ブラジルのビオハブリカ・モスカメッドで使用された昆虫の計画を示す。</li>
	<li>全室の温度は26°C±2)で、相対湿度は約70~80%、蛍光灯を用いた12:12時間の明度:暗いサイクルでした。</li>
	<li>このブループリントは、特定のスペース要件に従って変更できます (例えば 、リリースのスケールが全体的なサイズを決定します)。しかし、卵の生産、飼育と選別、品質管理(QC)およびリリースは、4つの異なる領域に分ける必要があります:卵生産コロニー、リリース生成、QC、およびリリースのための成人貯蔵。</li>
	<li>卵生産コロニールーム(約20 m2)は、放出生成のための卵を生産するために使用されます。</li>
	<li>品質管理領域は、ハッチレート、子犬の数、子犬の大きさ、女性の選別と除去の有効性を測定するなど、手順とRIDLラインの適合性をチェックするための実験を行う場所です。また、致死性を測定するオフセットアッセイを用いて蛍光マーカーと表現型の有無をチェックすることにより、WT汚染の検査も行われます。</li>
	<li>剥離生成室(約36 m2)には、トレイと幼虫や子犬の選別のための十分なスペースが必要です。皿は専用のアルミニウム製の棚に保持される。大きな作業領域とシンクは、飼育と仕分けのために必要とされ、別の大きなシンクは、トレイやケージの洗浄に必要です。フィルターキャッチトラップは、下水道を通して生きている蚊の脱出を軽減するために、シンクから排水口に含まれています。</li>
	<li>トレイに使用されるすべての水は、開発のどの段階でも昆虫の脱出を防ぐメッシュを含むコンパートメントを持つドレインを通して配置されます。</li>
	<li>大人がリリース前に成熟している間、リリースデバイスを保持するためのラックを含むリリース(リリース用の成人ストレージ、 図2)のための大人の保管には、エリアが必要です。</li>
</ol>RIDL を大量に飼育するための製造方法:
卵生産コロニーは、成人を生産するために放出生成(図1)で使用される卵を生産します。2 つのリアリング方法には多くの類似点がありますが、いくつかの明確な違いもあります。両方の手順で同じ飼育プロセスについては、エッグ生産コロニーセクションのみで説明します。
卵生産コロニー
4. ラーバル生産
卵生産コロニーは放出生成のためのホモ接合OX513A RIDLの卵8 を発生させる。高い品質管理は、供給された卵の生存率、適合性およびひずみの完全性を保証します。
<ol><li>孵化の刺激は、溶存酸素の低レベルで水中に沈む。水中の酸素濃度を下げるには、沸騰するまで水を加熱し、すぐに500mlのガラス瓶(74mmの開口円周)に400mlを入れ、蓋をしっかりと固定し、室温で数時間放置して冷却します。</li>
	<li>沸騰したお湯の瓶に卵1gを入れ、再シールし、1時間待ちます。内容物を2L水でトレイに移し、昆虫条件下で一晩放置します。</li>
	<li>孵化した幼虫を既知の水の体積に入れ、磁気スターラーとノミを使用してアリコートを取るのに十分な時間をかき混ぜます。激しくかき混ぜるか、または長い時間のために幼虫を損傷し、最小限に抑えるべきです。幼虫の孵化に使用される標準的な体積は1 Lですが、300以上の幼虫/mlの密度は数えにくく、損傷を与える可能性があります。したがって、約30万個以上の水を孵化しないでください。</li>
	<li>3つの1 mlアリコートを取り、1cmの正方形のグリッドを持つ吸収性紙の上に、余分な水を浸すために吸収性スポンジの上に置くことによって、ハッチレートを決定します。 孵卵の欠けているキャップを探して、3つの正方形から孵化卵と孵化していない卵の数を数えます。ハッチ率は80~90%前後と予想されます。</li>
	<li>それぞれ1mlの4つのアリコートを取り、4つの黒い重量を量るボート(幼虫は白く、したがって黒い背景に対してより容易に見える)に入れ、目で存在する生きた幼虫の数を数えます。カウンターの使用をお勧めします。ml当たりの平均幼虫数は、各トレイに追加する水の量を計算するために使用され、トレイあたりの必要な幼虫数を得る。</li>
	<li>幼虫が系統と種の間で飼育される密度には大きな違いがある。また、RIDL成人男性のサイズを野生型の男性と比較することも望ましいです;理想的には、野生の男性と正常に競合することができる大きなサイズのRIDLの男性に似てしたいです.したがって、各RIDL株の場合、幼虫の理想的な密度を決定する必要があり、飼育のためのスペース制約と生産の規模に対するトレードオフです。0.1~2.5の幼虫/mlの密度は、生産生産と品質の良い組み合わせであることが分かりました。また、メディチ23によって議論.</li>
	<li>トレイに幼虫を加えます。当社の施設では、約53cm×37cm x 8cm(L x W x H)のトレイと必要な量の水を使用して、生産用の幼虫の密度を達成しています。</li>
	<li>テトラサイクリン(水中3mg/ml)のストック溶液を1:100希釈でトレイに加え、必要な最終濃度30μg/mlを得ます。</li>
	<li>幼虫にフレークフィッシュフード<a href="http://www.sera.de">(www.sera.de)</a>を毎日食べ、細かい粉に押しつぶします。 表1 は、一日あたりの幼虫あたりの食物のmgにおける典型的な摂食体制を示す。上述の昆虫条件下での選別の適切な日まで幼虫を供給する。</li>
</ol>5. 子犬と男性/女性の子犬から幼虫を選別
<ol><li>幼虫と子犬を分離して孵化の8日後に子犬から幼虫を選別する。その後、男性のための子犬をセックスソート。プレート分離器24,25 として知られている装置は、雄の子犬と雌の子犬から幼虫を選別することができます。 図3 は、幼虫と雌の子犬を分離するためにこのプレートセパレータを使用することを示す。</li>
	<li>底にメッシュを入れた測定スプーンを使用して、500匹以上の子犬でキャリブレーションし、ケージを設置し、生産された男性とメスの子犬の総量を推定するために使用します。</li>
	<li>選別の初日(8日目)は、ほとんどの子犬は男性なので、並べ替えられた幼虫をトレイに戻し、子犬のほとんどが女性である翌日まで後方に戻します(図4)。</li>
	<li>すべての幼虫が子犬になるまで、または作業週の終わりまで、ステップ2.1-2.3に記載されているように、毎日ソートプロセスを繰り返します。</li>
	<li>ケージに1,000匹のオスの子犬(メジャースプーンを使用)を入れ、9日目に同じケージに3,000匹のメスの子犬を加えます(メッシュトップとネットアクセスホールに適合した高さ30cm、直径30cmのPVCパイプを使用していますが、30cm x 30cm x 30cmのプラスチックケージもBugDormから入手可能です)。</li>
	<li>大人が少なくとも2日間交尾し、スクロース溶液(10%)を提供することを許可する血液供給の前に湿った綿 のアドリビタム に。週に2回の血液供給で2週間(2回のゴトロフィックサイクル)卵を集める。これは、3,000匹のメス(平均48個の卵/メス)のケージから平均143,000個の卵を生成します。週に400万個の卵を生産するには、毎週約28個のケージを設置する必要があります。</li>
</ol>6. 血液供給
<ol><li>アルミニウム板の供給システムは週に2回の血液を入れてケージを供給する。パラフィルム(図5)を使用して、アルミニウム板(10cm x 10cm x 3 mm)の側面に血液のポケットが作成されます。給餌を促すために、加熱されたビーンバッグをプレートフィーダーの上に置くことによって血液を温める。このビーンズバッグは、約250gの小麦粒を布袋に入れ、電子レンジで約10秒間加熱した。私たちが摂食に使用する血液は、地元のアバトワールからです。これらの動物(主にヤギと羊)は、病原体の存在を避けるためにテストされている人間の消費のためである。</li>
	<li>授乳の3日後に、メスが卵を産むのに卵子を産むのに対する卵子部位が設けられる。オビポジション部位は、内部を覆う水とろ紙で約1/4に充填された丸いプラスチック容器です。2日後に、卵位部位が除去される。最大の卵の生産のために、フィルターペーパーが容器の中の利用可能な表面全体を覆い、濡れたままであることを確認してください。</li>
	<li>卵紙を取り出し、昆虫条件下で乾燥させるために吸収性の紙の上に置きます。卵は、高湿度でのコンディショニングの期間を必要とします (70% 以上)敷設された後、少なくとも48時間の。卵は、湿度が高く保たれている限り、孵化率の最小限の減少で最大3ヶ月間昆虫に残すことができます。</li>
	<li>卵生産コロニーは、放出プログラムのために毎週必要な卵の数を提供するのに十分な大きさである必要があります。上記の施設では、毎週28個のケージを設置して約400万個の卵を生産できます。放出生成と卵生産コロニーのための卵の少なくとも4週間を保証するために十分な卵を保管することをお勧めします。</li>
</ol>リリース生成
7. ラーバル生産
放出生成のための孵化、飼育および選別プロセスは、卵生産コロニーのための前述の方法と同一である。しかし、生産の規模ははるかに大きく、これはより多くのトレイとより多くの労力を必要とします。
8. 幼虫、男性の子犬、女性の子犬を選別する
<ol><li>幼虫、雄の子犬、雌の子犬の選別は、卵の生産のために記述された方法と同じです。</li>
	<li>オスの子犬を選別した後、リリース前に女性の汚染を確認することが重要です。女性が1%を超える存在であってはならない。500匹の子犬(3匹のランダムな子犬測定スプーン)の3つのアリコートを取り、存在する女性の子犬の数を数えます。女性は、一般的に男性よりも大きく、生殖器葉の形状の違いから識別することができる(図6)27。1%以上の女性がいる場合は、リゾートし、再びチェックする必要があります。</li>
	<li>リリースのために8日目と9日目から男性のみを使用してください。残りの幼虫と子犬をオートクレーブ。ブラジルでは、この廃棄物は医療廃棄物と同じ方法で処理する必要がありますが、規制は他の国で異なる場合があります。品質管理、大量の飼育および汚染リスクの違い、および品質管理の低下のため、卵生産コロニーの放出生成から雌の子犬や幼虫を使用しないでください。</li>
</ol>リリースのための大人のストレージ:リリース前に出現し、成熟するために解放デバイスに男性を配置します。リリース デバイスの詳細については、この方法では説明しません。しかし、私たちが使用するリリースデバイスの容量は約1,000人の男性です。リリース方法の詳細 (リリース デバイスとリリース システム) については、この方法では説明しません。

<ol><li>Dyck, V., et al. Sterilizing Insects with Ionizing Radiation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDyck%2C+V+%22Sterile+Insect+Technique%22">Sterile Insect Technique</a>. , Springer. Netherlands. 233-268 (2005).</li>
<li>Dyck, V., Hendrichs, J., Robinson, A. S., Klassen, W., Curtis, C. History of the Sterile Insect Technique.. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDyck%2C+V+%22Sterile+Insect+Technique%22">Sterile Insect Technique</a>. , Springer. Netherlands. 3-36 (2005).</li>
<li>Alphey, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sterile-insect+methods+for+control+of+mosquito-borne+diseases+%E2%80%93+an+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Vector+Borne+Zoonotic+Dis%22%5BJournal%5D)">Sterile-insect methods for control of mosquito-borne diseases – an analysis.</a> Vector Borne Zoonotic Dis. 10, 295-311 (2010).</li>
<li>Thomas, D. D., Donnelly, C. A., Wood, R. J., Alphey, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+population+control+using+a+dominant%2C+repressible%2C+lethal+genetic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Insect population control using a dominant, repressible, lethal genetic system.</a> Science. 287, 2474-2476 (2000).</li>
<li>Fu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female-specific+insect+lethality+engineered+using+alternative+splicing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Female-specific insect lethality engineered using alternative splicing.</a> Nat. Biotechnol. 25, 353-357 (2007).</li>
<li>Fu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female-specific+flightless+phenotype+for+mosquito+control%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Female-specific flightless phenotype for mosquito control.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 4550-4554 (2010).</li>
<li>Gong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dominant+lethal+genetic+system+for+autocidal+control+of+the+Mediterranean+fruitfly%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A dominant lethal genetic system for autocidal control of the Mediterranean fruitfly.</a> Nat. Biotechnol. 23, 453-456 (2005).</li>
<li>Phuc, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late-acting+dominant+lethal+genetic+systems+and+mosquito+control%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Late-acting dominant lethal genetic systems and mosquito control.</a> BMC Biol. 5 (11), (2007).</li>
<li>Harris, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+suppression+of+a+field+mosquito+population+by+sustained+release+of+engineered+male+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Successful suppression of a field mosquito population by sustained release of engineered male mosquitoes.</a> Nat. Biotechnol. 30, 828-830 (2012).</li>
<li>Harris, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+performance+of+engineered+male+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Field performance of engineered male mosquitoes.</a> Nat. Biotechnol. 29, 1034-1037 (2011).</li>
<li>Bailey, D. L., Lowe, R. E., Dame, D. A., Seawright, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+rearing+the+genetically+altered+MACHO+strain+of+Anopheles+albimanus+Wiedemann%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Mass rearing the genetically altered MACHO strain of Anopheles albimanus Wiedemann.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 29, 141-149 (1980).</li>
<li>Benedict, M. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonisation+and+mass+rearing%3A+learning+from+others%5BTitle%5D)+AND+%22Malar.+J.%22%5BJournal%5D)">Colonisation and mass rearing: learning from others.</a> Malar. J.. 8 Suppl 2 (S4), (2009).</li>
<li>Alphey, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Re-engineering+the+sterile+insect+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Re-engineering the sterile insect technique.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 32, 1243-1247 (2002).</li>
<li>Wise de Valdez,, R, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+elimination+of+dengue+vector+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Genetic elimination of dengue vector mosquitoes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 4772-4775 (2011).</li>
<li>Macoris Mde,, L,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+Aedes+aegypti+from+the+state+of+Sao+Paulo%2C+Brazil%2C+to+organophosphates+insecticides.%5BTitle%5D)+AND+%22Mem.+Inst.+Oswaldo+Cruz%22%5BJournal%5D)">Resistance of Aedes aegypti from the state of Sao Paulo, Brazil, to organophosphates insecticides.</a> Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 98, 703-708 (2003).</li>
<li>Campos, J., Andrade, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Larval+susceptibility+of+Aedes+aegypti+and+Culex+quinquefasciatus+populations+to+chemical+insecticides%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Saude+Publica%22%5BJournal%5D)">Larval susceptibility of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus populations to chemical insecticides.</a> Rev. Saude Publica. 37, 523-527 (2003).</li>
<li>Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resurgent+vector-borne+diseases+as+a+global+health+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Resurgent vector-borne diseases as a global health problem.</a> Emerg. Infect. Dis. 4, 442-450 (1998).</li>
<li>Harris, A. F., Rajatileka, S., Ranson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyrethroid+resistance+in+Aedes+aegypti+from+Grand+Cayman%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Pyrethroid resistance in Aedes aegypti from Grand Cayman.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 83, 277-284 (2010).</li>
<li>Lima, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+of+Aedes+aegypti+to+organophosphates+in+several+municipalities+in+the+State+of+Rio+de+Janeiro+and+Espirito+Santo%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Resistance of Aedes aegypti to organophosphates in several municipalities in the State of Rio de Janeiro and Espirito Santo.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 68, Brazil. 329-333 (2003).</li>
<li>Paris, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+Bacillus+thuringiensis+israelensis+%28Bti%29+in+the+environment+induces+resistance+to+multiple+Bti+toxins+in+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag.+Sci%22%5BJournal%5D)">Persistence of Bacillus thuringiensis israelensis (Bti) in the environment induces resistance to multiple Bti toxins in mosquitoes.</a> Pest Manag. Sci. 67, 122-128 (2010).</li>
<li>Rendon, P., McInnis, D., Lance, D., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medfly+%28Diptera%3A+Tephritidae%29+genetic+sexing%3A+large-scale+field+comparison+of+males-only+and+bisexual+sterile+fly+releases+in+Guatemala%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Medfly (Diptera: Tephritidae) genetic sexing: large-scale field comparison of males-only and bisexual sterile fly releases in Guatemala.</a> J. Econ. Entomol. 97, 1547-1553 (2004).</li>
<li>Papathanos, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+separation+strategies%3A+past+experience+and+new+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Malar.+J.%22%5BJournal%5D)">Sex separation strategies: past experience and new approaches.</a> Malar. J.. 8 Suppl 2 (S5), (2009).</li>
<li>Medici, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+Aedes+albopictus+larval+mass-rearing+optimization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Studies on Aedes albopictus larval mass-rearing optimization.</a> J. Econ. Entomol. 104, 266-273 (2011).</li>
<li>Focks, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+separator+for+the+developmental+stages%2C+sexes+and+species+of+mosquito+%28Diptera+Culicidae%29.%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">An improved separator for the developmental stages, sexes and species of mosquito (Diptera Culicidae).</a> J. Med. Entomol. 17, 567-568 (1980).</li>
<li>Fay, R. W., McCray, E. M., Kilpatrick, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+production+of+sterilized+male+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Mosquito+News%22%5BJournal%5D)">Mass production of sterilized male Aedes aegypti.</a> Mosquito News. 23, 210-214 (1963).</li>
<li>Christophers, S. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChristophers%2C+SR+%22Aedes+aegypti+the+yellow+fever+mosquito%3A+Its+life+history%2C+Bionomics+and+Structure%22">Aedes aegypti the yellow fever mosquito: Its life history, Bionomics and Structure</a>. , Cambridge University Press. (2009).</li>
<li>Jones, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+sexing+living+Anopheles+Larvae+%28diptera%2C+culicidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Entomol.+Soc.+Am%22%5BJournal%5D)">A simple method for sexing living Anopheles Larvae (diptera, culicidae).</a> Ann. Entomol. Soc. Am. 50, 104-106 (1957).</li>
<li>Koenraadt, C. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pupal+Dimensions+as+Predictors+of+Adult+Size+in+Fitness+Studies+of+Aedes+aegypti+%28Diptera+Culicidae%29.%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Pupal Dimensions as Predictors of Adult Size in Fitness Studies of Aedes aegypti (Diptera Culicidae).</a> J. Med. Entomol. 45, 331-336 (2008).</li>
<li>Alphey, L., Nimmo, D., O'Connell, S., Alphey, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+population+suppression+using+engineered+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Insect population suppression using engineered insects.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 627, 93-103 (2008).</li>
<li>Alphey, N., Bonsall, M. B., Alphey, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+resistance+to+genetic+control+of+insects%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Theor.+Biol%22%5BJournal%5D)">Modeling resistance to genetic control of insects.</a> J. Theor. Biol. 270, 42-55 (2011).</li>
<li>Atkinson, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+the+control+of+mosquito-borne+diseases+by+a+dominant+lethal+genetic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Analyzing the control of mosquito-borne diseases by a dominant lethal genetic system.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 9540-9545 (2007).</li>
<li>Bargielowski, I., Nimmo, D., Alphey, L., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+life+history+characteristics+of+the+genetically+modified+OX513A+line+and+a+wild+type+strain+of+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparison of life history characteristics of the genetically modified OX513A line and a wild type strain of Aedes aegypti.</a> PLoS One. 6 (e20699), (2011).</li>
<li>Bargielowski, I., Alphey, L., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost+of+mating+and+insemination+capacity+of+a+genetically+modified+mosquito+Aedes+aegypti+OX513A+compared+to+its+wild+type+counterpart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cost of mating and insemination capacity of a genetically modified mosquito Aedes aegypti OX513A compared to its wild type counterpart.</a> PLoS One. 6 (26086), (2011).</li>
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オキシテック社に所属する著者は、オキシテック株式会社の雇用および/または株式権益を有し、オックスフォード大学はこの論文のトピックに関連する知的財産を保有しています。

RIDL は、効果的で環境に配慮した安全な蚊3,29-31を制御する方法です。この技術は、統合された害虫管理プログラムに適用可能であり、幼虫、繁殖部位の減少および殺菌剤を含む最新の制御方法は、この技術と互換性がある。この方法は、Aeの制御で使用するために週に最大570,000人のRIDL雄の子犬を生産する方法を説明します。Aegyptiと私たちの知る限りでは、これはこの規模でトランスジェニック蚊の生産の最初の記述です。1960年代と70年代の25年代に野生型Ae.aegypti用にいくつかの同等の生産システムが開発されましたが、それ以来、この規模では同等の生産はありませんでした。ブラジルでは、2011年2月から2012年2月まで約1,100万人の男性が釈放されています。特定の領域を制御するために必要な男性の数は、野生の集団の大きさ、放出された男性の分散、放出後の男性の生存および交配競争力、および環境条件を含む多くの要因に依存する。 これまでの研究では、RIDLは蚊の個体数を少なくとも80%9減少させることができることが示されている。
生産規模とコスト対男性の品質に対する大量の飼育を最適化するバランスが必要です。例えば、幼虫密度を高めることは、必要なスペースを減らすことによって生産能力を高めることができ、分娩および子犬32にかかる時間。しかし、幼虫の密度が高すぎると、交配能力が32,33に低下した、より小さく、より短い生きた男性が生きることがある。SITプログラムに関連する男性の質は、最終的には、解放された男性が現場で女性と交尾する能力によって評価されます。野生の相手に対する交配の競争力を評価するために広範なフィールド評価が必要です9,10.これはしばしば、どの要因が「高品質」の雄の蚊を作るかを正確に評価することは現実的ではありません。しかし、大規模な大量の飼育において(日常的に評価できる範囲で)一貫した生産と品質を維持することが最も重要です。これには、大きな影響を与える可能性のある小さな変動を伴うすべてのプロセスの高いレベルの警戒と標準化が必要です。L1幼虫のアリツーチャーは重要なステップであり、この点を示しています。正しい数の幼虫をトレイにアリクォートすることは、良質の生産のために不可欠です。給餌体制は、特定の数の幼虫に合わせて正確に調整されています。幼虫が少なすぎると、過剰/下の餌となり、幼虫の生存、子犬の大きさ、子犬の時間に影響を与えます。大量飼育の技術に秘訣がある場合、この論文に記載されているように、生産サイクルの多くの小さなステップが一貫して、正確かつ高いレベルの品質管理で行われるようにすることです。

蚊は、人間の病気の範囲を引き起こす可能性のある多くの病原体を伝播し、これらの蚊を制御し、何世紀にもわたって進行中の戦いでした。化学的および生物学的方法に基づいて昆虫を制御する戦略は、いくつかの顕著な成功を収めていますが、多くの場合、制御は長期的に持続可能ではありませんでした。例えば、ブラジルは50年代 にAe.aegypti の根絶を達成しましたが、蚊は過去40〜50年間に再侵略しました。これは、殺虫剤耐性、環境損傷、悪い制御プログラムの実施15-20、および十分な監視または応答なしに急速な再侵攻を含む多くの原因に起因することができる。
蚊との戦いに勝つために新しい技術と方法が求められています。 分子技術の最近の進歩は、滅菌昆虫技術(SIT)1-3を中心に、蚊対策の新しい革新的な方法の開発につながっています。RIDL(優勢致死性を持つ昆虫の放出)4として知られている制御方法は、SITの周りに基づいていますが、放射線滅菌の必要性を取り除くために遺伝的方法を使用しています。RIDL株は、Ae. aegypti 5-8を含むいくつかの害虫種のために構築されています, Ae. aegyptiのRIDL株は、グランドケイマンのフィールドで正常にテストされました9,10;さらに、世界中の他の国々で、さらなる分野利用が計画または進行中である。 RIDLを使用して蚊の集団を抑制するには、高品質の男性成人を大量に飼育する必要があります 3,14.
SITプログラムの場合、男性のみを解放することが望ましいと考えられています。メスの蚊は噛んで病気を伝播する。さらに、放出された無菌の男性は、プログラムの有効性を低下させる解放された女性によって「気を散らす」ことができます。男性のみのリリースは、照射された地中海の果実ハエ21を用いた大規模なフィールド実験において、男女混合放出よりも3〜5倍の効果が示された。
RIDL大量飼育プログラムでは、放出のための男性を生産するいくつかの段階があります。 1つ目は、放出生成に必要な卵を作製する方法です(図1)。次の段階は、卵を子犬や大人にまで飼育し、幼虫と雌の子犬から幼虫を分離することです。女性からの男性の大規模な分離は、集団選別22に適した特定のライフステージで男女間の差を必要とする。 Ae. aegypti( および他の蚊種)では、性分離技術のために利用することができるオスとメスの子犬の間に有意なサイズ差があります。ソートされたRIDL男性は、その後、子犬または大人11,12としてコントロールプログラムで解放されます。
以下に、AeのRIDL株であるOX513Aの大量飼育方法について説明 する。アエジプティ、 リリースのため。説明する方法は、コントロールプログラムのための卵およびRIDL雄の生産に必要な技術をカバーする。

<table><tbody><tr><td> &lt;p&gt;Vipan Premium&lt;/p&gt; </td><td>Sera GmbH</td><td>&lt;p&gt;190&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;sera vipan 3

sera vipan 3は、魚類における細菌性感染症の治療に使用される、広範囲に作用する抗生物質製剤です。

特長：
・広範囲の細菌に有効な、強力な治療効果。
・治療期間中、水質への影響を最小限に抑えます。
・投与が簡単で、飼育水への直接添加または餌への混和が可能です。

適応症：
・細菌性の皮膚および鰭の腐敗症。
・細菌性の鰓炎。
・内部細菌感染症（全身感染症）。

使用方法：
詳細な投与量および投与期間については、製品パッケージに記載されている指示に従ってください。治療中は、定期的な換水を行い、水質を適切に管理してください。

注意点：
本剤は治療用薬剤です。予防目的での使用は推奨されません。使用にあたっては、必ず用法・用量を遵守してください。&quot;&gt;sera vipan 3

sera vipan 3は、観賞魚用の高品質なビタミン製剤です。

水中のビタミンは、照明による分解や、魚の代謝、または水換えによって失われます。ビタミンは、魚の健康維持、成長促進、および免疫システムの強化に不可欠な微量元素です。

特に、大量の餌を与える場合や、魚がストレスにさらされている場合（輸送、水質変動、病気など）には、ビタミンの需要が高まります。

sera vipan 3は、水溶性ビタミン（B群およびC）を豊富に含んでおり、魚の生理機能を正常に保ち、活力を向上させます。

使用方法：
餌に混ぜて与えるか、直接水中に投与してください。

特長：
・水溶性ビタミンの補給
・免疫力の向上
・成長と回復の促進
・ストレスの軽減&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;テトラサイクリン&lt;/p&gt; </td><td>Sigma Aldrich</td><td>&lt;p&gt;T7660&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&amp;amp;N5=検索結合製品番号|ブランドキー&amp;amp;N4=T7660|SIGMA&amp;amp;N25=0&amp;amp;QS=ON&amp;amp;F=SPEC&quot;&gt;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&amp;amp;N5=検索結合製品番号|ブランドキー&amp;amp;N4=T7660|SIGMA&amp;amp;N25=0&amp;amp;QS=ON&amp;amp;F=SPEC&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;プレートセパレーター&lt;/p&gt; </td><td>J.W. Hock</td><td>&lt;p&gt;5412&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;分離装置の使用説明書

1. 概要
本装置は、固液分離および液液分離などの分離プロセスを効率的に行うために設計されています。

2. 安全上の注意事項
装置を操作する前に、以下の安全上の注意事項を必ずお読みください。
・装置の接続が正しい電圧および電源仕様に適合していることを確認してください。
・化学薬品を取り扱う際は、適切な個人用保護具（PPE）を着用してください。
・作動中の可動部品に手を近づけないでください。
・異常が発生した場合は、直ちに電源を切り、認定された技術者に連絡してください。

3. 設置
・装置を水平で安定した作業台の上に設置してください。
・適切な換気設備が整っていることを確認してください。
・電源コードを適切に配線し、断線や踏みつけによる損傷を防いでください。

4. 操作手順
4.1 準備
・容器を適切に選択し、サンプルを投入してください。
・各接続部がしっかりと締まっていることを確認してください。
4.2 運転
・電源スイッチをオンにし、制御パネルで設定パラメータ（回転数、時間、温度など）を入力してください。
・「スタート」ボタンを押して分離プロセスを開始してください。
4.3 停止と回収
・プロセス完了後、装置が完全に停止したことを確認してからサンプルを回収してください。
・回収後は速やかに容器を取り出し、次回の使用に備えて清掃してください。

5. 保守と点検
・使用後は、装置内部を適切な溶剤または水で洗浄し、汚染を防いでください。
・定期的にOリングやパッキンの摩耗状態を点検し、必要に応じて交換してください。
・モーターや駆動系の異音がないか定期的に確認してください。

6. トラブルシューティング
・電源が入らない場合：電源プラグの接続およびブレーカーの状態を確認してください。
・振動が激しい場合：サンプルの充填量およびバランスが適切であるか確認してください。
・期待した分離結果が得られない場合：設定パラメータおよびサンプルの物性を再確認してください。&quot;&gt;本装置は、液体から固体を分離して回収することを目的とした、高品質な遠心分離機です。

**製品仕様**

* 最大回転数：12,000 rpm
* 最大遠心力：15,000 x g
* 最大容量：2 x 500 ml
* 電源：110V / 220V, 50/60 Hz
* 重量：25 kg
* 寸法：400 x 400 x 300 mm

**安全上の注意**

1. **バランスの確認**：遠心分離機を運転する際は、必ずチューブの重量が対向して等しくバランスが取れていることを確認してください。不均衡な状態で運転すると、装置の故障や重大な事故につながる恐れがあります。
2. **蓋の閉鎖**：運転中は必ず蓋を完全に閉じてください。回転中に蓋を開けないでください。
3. **チューブの適合性**：必ず指定された規格の遠心チューブを使用してください。破損したチューブや不適切なチューブを使用すると、危険な事故が発生する可能性があります。
4. **安定した設置**：装置を平坦で安定した場所に設置してください。

**操作手順**

1. **サンプルの準備**：分離したい液体サンプルを遠心チューブに入れ、適切に密閉してください。
2. **サンプルの設置**：チューブをローターに挿入します。この際、必ず対向するポジションに同重量のサンプル（またはバランス用のダミーチューブ）を配置し、重量バランスを等しくしてください。
3. **蓋を閉める**：蓋をしっかりと閉め、ロックされていることを確認してください。
4. **設定**：コントロールパネルを使用して、必要な回転数（rpm）と運転時間を設定してください。
5. **運転開始**：スタートボタンを押して運転を開始します。
6. **運転終了**：ローターが完全に停止するまで待ってください。絶対に、回転中のローターに手を入れたり、無理に停止させようとしたりしないでください。
7. **サンプルの回収**：停止後、蓋を開け、分離された固相と液相を慎重に回収してください。

**メンテナンス**

* **清掃**：使用後は、柔らかい布と中性洗剤を用いて内部および外部を清掃してください。腐食性のある化学薬品や研磨剤は使用しないでください。
* **点検**：定期的にローターの摩耗やチューブホルダーの緩みがないか点検してください。
* **校正**：回転数の精度を維持するため、定期的な点検と校正を推奨します。

**トラブルシューティング**

* **振動が激しい場合**：直ちに停止させ、サンプルの重量バランスを再確認してください。
* **電源が入らない場合**：電源プラグが正しく差し込まれているか、およびブレーカーの状態を確認してください。
* **設定速度に達しない場合**：負荷が過大でないか、またはモーターの異常がないかを確認し、販売店またはサービスセンターに問い合わせてください。&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;Parafilm M&lt;/p&gt; </td><td>ペシネー社製プラスチック充填材</td><td>&lt;p&gt;PM-996&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;http://www.parafilm.com&quot;&gt;www.parafilm.com&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;放流個体育成用パン（53 cm x 38 cm x 8 cm）&lt;/p&gt; </td><td>プレオン</td><td>&lt;p&gt;0757&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;製品一覧&quot;&gt;製品一覧&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;蛍光顕微鏡&lt;/p&gt; </td><td>Leica Microsystems</td><td>&lt;p&gt;MZ FLIII&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;**Leica MZ FLIII**
**高度な蛍光顕微鏡システム**

**優れた光学系による最高水準のイメージング**

Leica MZ FLIIIは、研究者のニーズに応えるために設計された、高性能で汎用性の高い蛍光顕微鏡システムです。最先端の光学技術と使いやすさを兼ね備え、細胞生物学、組織学、およびバイオテクノロジーにおける多様なアプリケーションに最適です。

**主な特長：**

* **高精細な光学性能：** 業界最高水準のプランアポクロマート対物レンズにより、広い視野にわたって極めて高い解像度とコントラストを実現します。
* **柔軟な構成：** モジュール設計により、研究目的に合わせて構成を容易に変更でき、将来的なアップグレードにも対応しています。
* **最適化された蛍光観察：** 高効率なフィルターキューブと強力な光源により、微弱な蛍光信号であっても鮮明に捉えることが可能です。
* **直感的な操作性：** エルゴノミクスに基づいた設計により、長時間の観察でも疲労を軽減し、精密なフォーカス調整が可能です。
* **デジタルイメージングへの対応：** 最新のデジタルカメラシステムとシームレスに連携し、高解像度画像の取得と解析を効率化します。

**アプリケーション：**

* 免疫蛍光染色（Immunofluorescence）
* GFPなどの蛍光タンパク質の観察
* ライブセルイメージング
* 共焦点顕微鏡への導入前スクリーニング

**Leica Microsystems：イメージングの先駆者**

Leica Microsystemsは、科学的な発見を加速させるため、信頼性と革新性を追求した光学ソリューションを提供し続けています。&quot;&gt;**Leica MZ FL III**
**蛍光顕微鏡**

**細胞生物学、組織学、および臨床診断における卓越したイメージング**

Leica MZ FL IIIは、高い汎用性と使いやすさを兼ね備え、日常的なルーチンワークから高度な研究まで、幅広いアプリケーションに対応する高性能な蛍光顕微鏡システムです。

**主な特長**

* **優れた光学性能：** 精密に設計された光学系により、高コントラストで鮮明な画像を提供します。
* **柔軟な構成：** 様々なフィルターキューブや対物レンズを組み合わせることができ、ユーザーのニーズに合わせた最適なカスタマイズが可能です。
* **直感的な操作性：** 人間工学に基づいた設計により、長時間の観察でも疲れにくく、スムーズな操作を実現しています。
* **効率的なワークフロー：** 簡単なセットアップと迅速な切り替えにより、サンプルの処理時間を短縮し、スループットを向上させます。

**アプリケーション**

* **免疫蛍光染色：** 特定のタンパク質や抗原の局在を詳細に解析します。
* **生細胞イメージング：** 蛍光プローブを用いて、生きた細胞内でのダイナミックな現象を観察します。
* **組織形態学的解析：** 組織切片における細胞構造や分子分布を可視化します。
* **臨床診断：** 病理組織や細胞診における特異的なマーカーの検出に活用します。

**技術仕様**

* **光源：** 高輝度で安定した照明を提供し、微弱な蛍光信号の検出を可能にします。
* **フィルターセット：** DAPI、FITC、TRITC、Cy5など、主要な蛍光波長に対応した最適化フィルターを搭載しています。
* **対物レンズ：** 高解像度かつ色収差を最小限に抑えたプランアポクロマートレンズなどのラインナップをご用意しています。

**Leica Microsystems — 科学的発見を加速させるイメージングソリューション**&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;成体用ケージ&lt;/p&gt; </td><td>BugDorm</td><td>&lt;p&gt;DP1000&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;昆虫飼育ケージ 30x30x30 cm（1個入り）&quot;&gt;昆虫飼育ケージ 30x30x30 cm（1個入り）&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td> &lt;p&gt;ろ紙&lt;/p&gt; </td><td>CELAB</td><td>&lt;p&gt;&lt;/p&gt;</td><td> &lt;p&gt;&lt;a href=&quot;centrifugação (遠心分離)

Equipamentos para Centrifugação (遠心分離装置)

A centrifugação é um processo de separação de misturas heterogêneas, composto por partículas de diferentes densidades, através da aplicação de uma força centrífuga. (遠心分離とは、遠心力を加えることによって、密度の異なる粒子からなる不均一混合物を分離させるプロセスである。)

As centrífugas são instrumentos que permitem a separação de componentes de uma mistura, acelerando a sedimentação de partículas sólidas em suspensão num líquido. (遠心分離機は、液体中に懸濁している固形粒子の沈降を加速させ、混合物の成分を分離することを可能にする器具である。)

Existem diversos tipos de centrífugas, dependendo da aplicação e da velocidade de rotação: (用途および回転速度に応じて、さまざまな種類の遠心分離機が存在する。)

Centrífugas Clínicas: Utilizadas para a separação de sangue em plasma e células, urinálise e outras amostras biológicas. (臨床用遠心分離機：血液の血漿と細胞の分離、尿分析、およびその他の生体試料に使用される。)

Centrífugas de Alta Velocidade (Microcentrífugas): Utilizadas para a separação de amostras pequenas, como DNA, RNA e proteínas em tubos Eppendorf. (高速遠心分離機（マイクロ遠心分離機）：エッペンドルフチューブを用いたDNA、RNA、およびタンパク質などの微量試料の分離に使用される。)

Ultracentrífugas: Capazes de atingir velocidades extremamente altas, permitindo a separação de partículas muito pequenas, como vírus e organelas celulares. (超遠心分離機：極めて高い速度に達することができ、ウイルスや細胞小器官などの非常に小さな粒子の分離を可能にする。)

Refrigeradas: Equipadas com sistemas de refrigeração para evitar a degradação de amostras termolábeis. (冷却式遠心分離機：熱に不安定な試料の分解を防ぐための冷却システムを備えている。)

Acesse nosso catálogo para conhecer a linha completa de centrífugas e acessórios. (当社のカタログにアクセスし、遠心分離機および付属品の全ラインナップをご確認ください。)&quot;&gt;分析天秤

分析天秤は、非常に高い精度で質量の測定を行うために設計された精密機器であり、通常、0.1 mg（0.0001 g）またはそれ以上の分解能を備えています。これらの天秤は、化学分析、製剤調製、および研究室での定量的な測定に不可欠であり、微量なサンプルの重量を正確に測定することを可能にします。

主な特徴：
- 高精度：極めて小さな質量の変化を検出可能。
- 風防（ドラフトシールド）：空気の流れによる測定値への影響を防ぐためのガラス製ケース。
- 校正機能：正確性を維持するための内部または外部校正システム。
- 安定性：振動や温度変化の影響を最小限に抑える設計。

用途：
- 分析化学における試薬の精密秤量。
- 医薬品の調製および品質管理。
- 科学研究における微量サンプルの定量分析。

メンテナンスと取り扱い：
分析天秤の精度を維持するためには、水平な安定した台の上に設置し、直射日光や空気の流れ（エアコンの風など）から遠ざける必要があります。また、定期的な校正を行い、計量皿を常に清潔に保つことが重要です。&lt;/a&gt;&lt;/p&gt; </td></tr></tbody></table>

ブラジルにおけるフィールドリリースのための遺伝子組み換え aedes aegypti の大量生産

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

蚊との戦いに勝つために新しい技術と方法が求められています。分子技術の最近の進歩は、滅菌昆虫技術(SIT)1-3を中心に、蚊対策の新しい革新的な方法の開発につながっています。RIDL(ドミナント致死性を持つ昆虫の放出)4として知られている制御方法は、SITの周りに基づいているが、放射線滅菌の必要性を除去するために遺伝的方法を使用する5-8。Ae. aegyptiの RIDL 株はグランド ケイマン9,10のフィールドでテストに成功しました;さらに、世界中の他の国々で、さらなる分野利用が計画または進行中である。
昆虫の大量飼育は、いくつかの昆虫種で、週に数十億のレベルに確立されています。しかし、蚊では、一般的にはるかに小規模に飼育が行われ、1970年代から80年代にかけてほとんどの大規模な飼育が行われています。RIDLプログラムの場合、病気を噛んで伝染させるので、できるだけ少ない女性を放出することが望ましい。大量飼育プログラムでは、卵の生産、子犬まで卵を飼育し、放出前にメスから男性を選別するという、放出するオスを生産するいくつかの段階があります。これらの男性は、次に、子犬または成人11,12としてリリースされたRIDLコントロールプログラムに使用されます。
RIDLを使用して蚊の集団を抑制するには、高品質の男性成人の多数を飼育する必要があります13,14.以下は、放出のためのOX513A(ae.aegypti 8のRIDL株)の大量飼育方法を説明し、対照プログラムのための卵の産生およびRIDL雄の大量飼育に必要な技術をカバーする。

生産に期待される子犬の結果を 図 4に示します。オスは最初に子犬を出し、8日目にピークを迎え、孵化後9日目にメスがピークに達する。女性から男性を並べ替える最良の時期を知るために、この子犬曲線を測定することが重要です。
男性と女性の子犬を選別する6ヶ月以上の結果は、女性の汚染が平均0.02%であることを示しています(図5;SEM = 0.004%)。この汚染率は、リリースの1ヶ月間に放出されたわずか400人の女性(約200万人の男性)を表します。現在の週あたりの卵生産量は400万です。このうち350万個は卵のコロニーと生産のために孵化し、残りはバックアップのために保管されています。卵の約11%は卵生産コロニーに使用され、残りは放出生成のために使用されます。卵の孵化率の平均は87.3%(SEM = 0.5%)L1幼虫由来の雄の子犬の収量は平均29.5%(SEM = 1.2)です。約571,000匹の雄の子犬(SEM = 14,000)を生産するリリースジェネレーションコロニーのために、毎週200万匹の幼虫が飼育されています。発育中および放出中の成人死亡率は平均5%であり、その結果、1週間に約543,000個(SEM =13,000)が成人雄蚊を放出した。現在の400万個の卵/週の生産量は、浪費と貯蔵による損失を減らすためにさらなる最適化を行い、週300万個に削減できると予想されています。合計で6人のスタッフが説明した生産のために必要とされます。4つは放出生成に取り組み、残りの2つは卵のコロニーに取り組んでいます。

品質管理

大人の質、飼育の効率、人件費、コストを維持するためには品質管理が不可欠です。 

トランスジーン表現型コントロール
RIDL遺伝子発現を検証するために、2つのコントロールが行われ、まず蛍光マーカーの発現をチェックし、次にテトラサイクリンの存在しない場合にRIDL致死性形質の発現をチェックする。すべての幼虫は蛍光マーカーを発現する必要があります。蛍光マーカーが期待通り発現しているかどうかを確認するために、2,000頭の最初のインスター幼虫をDsRed2フィルター(テキサスレッド)を用いたライカMZFLIIIステレオ顕微鏡でチェックし、非蛍光個体が存在するかどうかを判断します。テトラサイクリンがなければ、RIDL遺伝子が発現し、成人8に対して3〜4%の生存率が期待される。これを確認するために、テトラサイクリンなしでリリースバッチごとに余分なトレイが設定されています。正常な飼育との唯一の違いは、死んだ幼虫による過剰な食物の蓄積が過剰な細菌増殖をもたらす可能性があるため、6日目から食品が2/3減少することです。

リアイング制御
リリース生成の4つのトレイは、ソートされ、別々にカウントされるようにランダムに選択されます。男性と女性の子犬の数は、毎日各トレイから記録されます(図4)。男性と女性の予想数からの逸脱は、生産および/またはフィットネスに影響を与える可能性があり、問題の原因を決定するのに役立つ卵コロニーと比較することができる潜在的な問題を示しています。

パパエ測定
pupaeサイズは、成体サイズ28と相関することが示されている。成人サイズの品質管理として、セファロソラックスの幅は、リリース世代からの各ソート日に対して少なくとも30人の男性の子犬を測定する。卵生産コロニーの雌の子犬も測定されます。平均頭蓋幅は、リリースされた男性の場合は1.05mm(SEM 0.005)、男性と女性の1.04mm(SEM = 0.006)と1.29mm(SEM = 0.006)でした。同様の結果が Ae. アルボピクトゥス 質量飼育24.
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig1.jpg"> 図 1.RIDL/SITプログラムで使用する蚊を大量に飼育する段階。 卵生産コロニーは、放出生成に供給される卵の品質を確保するために品質管理の高レベルを有する。 卵は、オスがメスから選別される放出コロニーの子犬に飼育される。 その後、男性成人はRIDLコントロールプログラムに使用されます。
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig2.jpg"> 図 2. リリースプログラムのためのRIDL男性の生産のための飼育施設の概略図。 高品質の卵は、卵生産コロニーの部屋で継続的に生産され、その後、リリースジェネレーションルームで子犬に飼育されています。その後、幼虫と子犬は分離され、子犬は男性のためにセックスソートされます。男性は、その後、リリースデバイスに配置され、大人の貯蔵室と解放室で解放するために成人に成熟することができます。
<img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig3.jpg"> 図 3. 幼虫、雄の子犬、および雌の子犬をプレートセパレータ26を用いて分離する。  プレートセパレータは、幼虫、オスの子犬、メスの子犬の間のサイズ差を使用して、これら3つの異なるライフステージをソートします。幼虫は雌の子犬よりも小さい雄の子犬よりも小さい傾向がある。 器械は2つのガラス板から成っている;1つは斜めの金属フレームに固定され、もう1つは最初のプレートの上に座り、4つの調整ネジ(A)を使用して最初のプレートに対して相対的に移動することができます。 4つの調整ねじは外板を裏板に対する角度で置くことを可能にするので、プレート間にくさび状のスペースが形成され、下方に先細りする。 ガラス板(B)の間に幼虫と子犬を注ぎ、水ホース(C)を用いて穏やかに洗浄する。 プレートの角度を調整することにより、幼虫、雄の子犬と雌の子犬を分離することができます(D)。 連続的な洗浄とプレートの角度を増加させると、幼虫は最初に(ふるいに)、続いて雄の子犬と最後にメスの子犬を通して洗い流すことができます。
<img alt="Figure 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig4.jpg"> 図 4. 大量飼育RIDL Ae. aegyptiのための子犬曲線.  このグラフは、週に約135,000匹の子犬が回復した23週の観察中に大量飼育RIDLの雄と女性の子犬の平均割合を示しています。 誤差範囲 = 平均の標準誤差 n = 23。最初のコレクション(8日目)では、5日間にわたってトレイから回収された総子犬から平均59%の男性と30%の女性の子犬を回復しました。
<img alt="Figure 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig5.jpg"> 図 5. 並べ替えられた雄の子犬の平均的な女性汚染。 このグラフは、6ヶ月間に孵化した後の8日目の男性の選別中の女性汚染の月平均割合を示しています。
<img alt="Figure 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig6.jpg"> 図 6. アルミニウム板の血の供給装置。 プレート(B)はパラフィルム(A)で覆われ、血液をポケットに入れ、密封(D)する。プレートはケージの上に置かれ、温めたビーンバッグ(C)を上に置いて加熱する(E)
<img alt="Figure 7" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig7highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig7.jpg"> 図 7. 男性と女性 のAe.アエジプティ の子犬を区別する。  Ae. aegypti pupaeは、生殖器葉の形状の違い(パドルのすぐ下のプパル腹部セグメントの終わり)によって確実にセックスすることができます。さらに、男性は女性よりも小さい傾向があります。
<img alt="Table 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579table1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579table1.jpg"> 表 1. Ae. aegypti RIDL幼虫の一般的な給餌体制 (1日あたりの幼虫あたりの食物の mg). 必要な食品の実際の量を計算するために、トレイあたりの幼虫の総数を掛ける。

RIDL®(優勢致死性を持つ昆虫の放出)システムを用いてAedes aegyptiの集団抑制を達成するためには、多数の雄の蚊を放出する必要がある。これは、高品質のオスの蚊の最大数を得るために信頼性の高いシステムを提供するために大量の飼育技術と技術の使用を必要とします。

ブラジルにおけるフィールドリリースのための遺伝子組み換え Aedes aegypti の大量生産

蚊との戦いに勝利するため、新たな技術や手法が模索されています。分子生物学的手法の最近の進歩により、...

Aegyptiの制御は、子世代を死滅させる遺伝子改変を施した昆虫を用いることで達成できます。雄を放出すると、それらが雌と交尾し、その交尾によって産まれた子世代は死滅します。遺伝的に不妊の雄を継続的に放出することで、個体群の制御が可能となります。死に至る遺伝子は、飼料に解毒剤を添加することで制御可能であり、これにより遺伝子改変された昆虫を生存させることができます。aegyptiの個体群抑制を達成するためには、遺伝子改変された蚊の系統を用い、大量の雄の蚊を放流させる必要があります。これには、可能な限り最高品質かつ高い適応能を持つオス蚊を最大数得るための大量飼育技術が必要です。OX 5 1 3 Aの大量飼育は、卵生産、オス生産、および放出前のオスの羽化と成熟という3つの主要な領域に分けられます。これは、ブラジルのMoscamedにおけるOX 5 1 3 Aの生産に使用される飼育施設の概略図です。卵生産コロニー室では、高品質な卵が継続的に生産されています。これらの卵は、オス生産エリアで蛹まで育成され、その後、蛹の状態で雌雄の選別が行われます。オスについては、品質管理作業のための専用エリアが設けられています。選別されたオスは放出装置に入れられ、放出前に羽化して成熟するまで待機させられます。このビデオで示す手法は、卵生産およびオス生産のいずれの領域にも適用可能です。オス生産用の卵を得るために、地域の屠畜場から提供された動物の血液を用いた人工膜給餌を行います。このプロセスに必要な材料は、バイオフィルムと、表面に盛り上がったトレッドパターンを持つ約10 cm²のアニンプレートです。一方に、少量の血液と約250 gの小麦粒を詰めたビーンバッグを用意します。プレート給餌システムでは、蚊が吸血しやすくするために、パラフィルムを膜として使用します。パラフィルムを人間の皮膚の上に被せます。次に、パラフィルムを注意深く伸ばして厚みを薄くします。その後、アルミニウムプレートのパターン面をパラフィルムで3辺覆い、パラフィルムを傷つけないように注意しながら、端をしっかりと密封します。そして、プレートとパラフィルムの開いた側から血液を注入します。フィーダーに血液を約3分の1まで満たします。次に、血液が漏れ出さないよう、バイオフィルムで慎重に密閉します。その後、血液フィーダープレートを成虫用ケージの上部に設置します。ビーンバッグを電子レンジで10秒間加熱し、血液を温めるためにプレート上に置きます。必要に応じて、10〜15分ごとにビーンバッグを再加熱してください。吸血の3日後にFUポジションサイトを提供します。産卵部位として、水を半分まで満たした円形のプラスチック容器内にフィルターペーパーを設置します。この産卵部位を成虫用ケージに入れ、雌に産卵させます。2日後、卵が付着したペーパーを取り出し、吸水紙の上に置いて昆虫飼育条件下で乾燥させます。乾燥後、卵を紙から取り出します。絵筆を使用し、卵を傷つけないように注意しながら、大きなトレイに優しく掃き寄せます。強く掃きすぎないように注意しながら、卵を篩（ふるい）に通して死虫やその他のゴミを取り除き、カビの発生を防止します。さらに、重量によるより正確な卵数の計量を行うため、乾燥させた卵を1gずつ分注します。これは100,000個の卵に相当します。分析天秤を用いて小型プラスチック容器に分注し、これらの容器に入れて昆虫飼育条件下で最大6週間保存することが可能です。卵を孵化させるため、瓶に沸騰した水を注ぎ、蓋をして冷却することで準備します。これにより、水中の酸素濃度を下げ、卵の孵化を誘導します。1 gの卵を瓶に加え、再び蓋を密閉します。1時間後、瓶の中身を2Lの水が入ったトレイに移し、昆虫飼育条件下で一晩放置する。孵化の翌日、幼虫を200メッシュのステンレス製ふるいでトレイから回収する。ふるいの穴の直径は約0.075 mmです。次に、幼虫を2 Lのビーカーに移します。その後、ビーカーに水を加え、2 Lまで満たします。ビーカーをマグネチックスターラーの上に置き、大型の撹拌子を投入します。幼虫が十分に混ざり合う速度に設定しますが、速すぎないように注意してください。高速で撹拌すると損傷を招く可能性があるため、品質管理における損傷を防ぐために、撹拌は可能な限り最短時間で行う必要があります。孵化率は、ドロー内で1時間孵化させた後、およびその翌日に決定します。1 mLのアリコートを3つ、吸収性スポンジを敷いた白い吸水紙の上に滴下します。吸水紙の下には、カウントに使用するための正方形の格子（グリッド）があります。3つの異なる格子区画から、孵化した卵と孵化しなかった卵の数をカウントします。孵化した卵の識別は容易です。卵の上部の卵蓋が失われているため、孵化率は80から90%程度になると予想されます。1mlあたりの幼虫の平均数を用いて、各トレイに加える水の量を算出します。トレイ1枚あたりに希望する幼虫数を確保するため、1mlずつの分注を3回行い、それぞれ別のペトリ皿に入れます。さらに10〜20 mLの水を加え、幼虫を分散させて数えやすくします。幼虫は外見が白いため、黒い背景を用いてカウントすると容易になります。記録の際は、カウンター、ピペットを使用し、慎重に操作することを推奨します。1,000匹あたりの幼虫の総数を算出し、適切な量の水と幼虫をカップに分注します。毎回、ビーカーの同じ箇所から幼虫を取り出すように注意してください。その後、あらかじめ水を入れたトレイに幼虫を加えます。トレイには、30 µg/mLの濃度の解毒剤テトラサイクリンが含まれています。トレイ内の幼虫密度は、水深、表面積、および成虫のサイズに合わせて最適化する必要があります。最適密度は、1〜3匹/mLであることが分かりました。幼魚の餌として、フレーク状の魚類用飼料を使用します。この飼料をブレンダーで粉砕します。均一な微粉末にするため、成長段階に応じて餌の量をわずかに調整する必要があります。このように、食事内容は日ごとに最適化されており、作業負荷を軽減するためにトレイごとに特定の重量が用いられています。必要量の餌を簡単かつ効率的に分配できるよう、定量的に計量できるスプーンを設計し、作製しました。雄の陰毛は7日目に現れ始め、8日目までには雄の約70%が発毛します。雌は雄よりも化蛹が遅いですが、8日目でもかなりの割合の雌が存在しています。雄の蛹の選別は8日目と9日に行われます。可能な限り多くの雄の蛹を回収するため、トレイの内容物をふるいにかけ、プレートの選別に備えてジャグに入れます。分離装置は、幼虫、および雄と雌の成虫の形態的およびサイズ的な違いを利用して、それらを分離します。本装置は2枚の平行なガラスプレートで構成されています。外側のプレートは、4つの調整ネジを使用して前後に移動させることができます。調整ねじにより外側のプレートを角度をつけて設定できるため、プレート間に下方向に向かって細くなる楔形の空間を形成できます。プレートセパレーターの下には、水を回収するための容器を設置します。トレイに入った幼虫とピーピーを、プレートセパレーター上部のガラスプレート間に注ぎ入れます。雌のpopeは雄のpopeよりも大きく、それらは上部で分離します。幼虫は雄のpubeよりも薄い扁平な形状をしており、水でフラッシングし角度を調整することで、さらに下の方で分離します。継続的なフラッシングとプレート角度の調整により、幼虫と雄および雌のpubeをさらに分離させることができます。底部の調整ネジを使用して、幼虫を容器内へフラッシングして回収することが可能です。幼虫が入ったコンテナを取り除き、プレートセパレーターの下に新しいコンテナを配置します。次に、雄のプユを新しいコンテナへと流し込みます。この際、雌のプユが雄と一緒に流されないように注意してください。雄の個体が入った容器を取り除き、新しい容器と交換します。最後に、雌の個体を新しい容器に洗い込みます。雄の個体に雌の混入がないか、品質管理による確認を行います。分級後、500匹のオス蛹を3つの分注量として取り出し、顕微鏡下でメスの蛹が何匹含まれているかを確認します。メスは生殖葉の形状で判別可能です。メスの生殖葉は、オスよりもかなり小さく、丸みを帯びています。メスの割合が1%を超える場合は、そのバッチを再選別し、再度確認する必要があります。選別された雄の幼虫は、野外に放出される前に羽化し成熟させるため、放出装置に割り当てられます。6ヶ月以上にわたる雄とメスの選別結果です。Pupiらは、雌の混入率が平均0.02%であったことを示しています。この混入率は、毎月放出される雌がわずか400匹であることを意味します。このグラフは、6か月の生産期間における雄と雌の平均的な蛹化データを示しています。雄は主に8日目に、雌は9日目に蛹化します。蛹のサイズを測定し、水に浮かせた蛹の写真を撮影してグライコをスケールとして用い、胸部幅を測定することで比較しました。雄は雌よりも一貫して小さく、サイズの重複はほとんど見られませんでした。これにより、卵生産施設から一貫した飼育パラメータが達成されたことが示されました。約19 m²の面積を持つ雄の生産エリアからは、毎週400万個以上の卵が生産されました。週平均571,000匹のオスが生産されました。卵から選別後のオス幼虫までの生産効率は約26%でした。羽化の過程で一部のオスが失われ、週あたりに放出されたオスの総数は平均543,000匹でした。

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