尾懸垂テスト

尾懸垂試験は、さまざまな実験的処置による抗うつ効果を予測するために一般的に用いられる行動試験です。この動画では、本試験の手順を解説します。尾懸垂試験はマウスにおいて妥当性が確認されており、より大型のげっ歯類への適用は推奨されていません。

尾懸垂試験では、マウスを尾から吊り下げます。マウスは6分間吊り下げられた状態にあり、この間の被験体の行動を記録します。

6分間のテスト時間の終了後、被験者の尾からテープを取り除きます。テスト完了後、視覚的記録をコンピューターまたはビデオモニターに転送します。分析のために、観察者はマウスが6分間のセッション全体でもがいた時間を測定します。

抗うつ作用を持つ化合物は、マウスが抗う（struggling）時間を増加させます。これは、不動時間の短縮として反映されます。例えば、臨床的に補助的な抗うつ薬として有用な気分安定薬であるリチウムが、尾懸垂試験において不動時間を減少させたことを我々は報告しています。

こんにちは。私はボルチモアにあるメリーランド大学医学部精神科のTodd Gould博士の研究室のSeanです。こんにちは、同じ研究室のChantelです。このビデオでは、尾懸垂試験の実施方法とスコアリングについて解説します。

尾懸垂試験は、抗うつ薬治療の潜在的な有効性を評価するために用いられます。それでは、ラボに移動して、実験の手順を説明しましょう。必須ではありませんが、ここでは専用に設計された尾懸垂ボックスを使用します。

本試験では、尾部懸垂ボックスを4つのコンパートメントに分割し、各コンパートメントにマウスを1匹ずつ配置します。仕切りを設けることで、試験中にマウス同士が互いを視認できないようにしています。

ただし、棚やその他の構造物を使用してマウスを吊り下げさせることも可能です。尾懸垂試験ボックスの寸法は、マウスが端に届いたり、掴まったりすることがないように選択します。実験を開始する前に、十分な数のテープ断片を用意し、尾への接着に使用する部分に印を付けておきます。

当研究室では、17 centimeterのテープ断片を使用します。このテープ断片の端から2 centimeterの箇所に印を付け、ここを尾への接着に使用します。この2 centimeterの範囲の中央に尾を配置します。

尾懸垂試験ボックスとビデオカメラを設置します。動物を導入する前に、前の被験個体による臭いを除去するため、ボックスを滅菌溶液で十分に洗浄してください。当研究室では、色の点を除いてあらゆる面で同一である2種類の尾懸垂ボックスを使用しています。

アルビノマウスの場合、ビデオ撮影にはダークグレーのボックスが良好なコントラストを提供します。色が濃いマウス系統には、白いボックスが適しています。ホワイトノイズマシンを起動してください。

断続的な音を遮断する必要があります。マウスを処置室に連れて行き、順化させます。室内条件は一定に保ち、騒音や光強度の変化、その他の妨げとなる要因がないようにしてください。

この期間は通常、少なくとも1時間です。順化期間が終了した後、特定のマウス系統が自分の尾に登るのを防ぐためにテストを進めることができます。尾懸垂試験では、尾の上に配置するプラスチック製シリンダーを使用します。

これらのシリンダーは、テスト中に尾の基部に配置されます。当研究室では、長さ4 cm、直径1 cm、重量1.5 gのプラスチック製シリンダーを使用しています。登攀を防ぐためにプラスチック製シリンダーを使用する場合は、テープを貼付する前に尾に配置してください。

尾の最端にテープを貼り、テープの外側に2〜3 mmの尾が残るようにします。マウスをホームケージに入れた状態で、尾にテープを貼付します。テープの印がついた端を使用し、テープが尾にしっかりと貼り付き、さらにテープ自身に折り返して固定されるようにしてください。

テープを貼付した後、異なる個体に貼ったテープ同士が絡まるのを防ぐため、各マウスをケージの壁面に固定します。この操作は迅速に行ってください。そうしないと、マウスに不必要なストレスを与えることになります。

動物を吊るす前に録画を開始してください。処理グループ間でカウンターバランスをとった順序で、かつカメラの視界を遮らないように、テープの自由端を吊り下げバーに固定して動物を吊り下げます。マウスは1匹ずつ吊り下げるため、個体ごとにテストの開始時間がわずかに異なります。

各マウスの吊り下げ開始と同時に、正確にスコアリングを開始してください。カメラの視野を遮らないことが重要です。尾部吊り下げセッション全体をスコアリングするため、カメラの視野が遮られるとデータの欠落につながる可能性があります。

すべてのテープの端が吊り下げバーに対して垂直であり、弛みが同じ長さであることを確認してください。各被験体について、タイマーを開始します。尾懸垂試験の時間は6分間です。

6分間のテスト時間が経過したら、各マウスの尾端からテープを取り外し、ホームケージに戻します。テスト終了後、被験体情報をビデオで記録してください。マウスをコロニー室に戻した後、テストボックスを滅菌溶液で徹底的に洗浄し、拭き上げてください。

試験が終了しましたので、行動のスコアリングについて説明します。尾懸垂試験のスコアリングにおいて通常評価される唯一の変数は、動物が不動状態でいた時間です。不動時間を算出するために、マウスが活動していた時間を測定し、それを6分間の試験時間から差し引きます。試験の全6分間をスコアリングします。

まず、評価対象ではないマウスをカバーで覆い、観察者が一度に1匹のマウスのみに集中できるようにします。移動時間は、ゲームパッドで操作する画面上のストップウォッチで計測します。ここでは、ご覧のように、2つの個別の画面上ストップウォッチを同時に操作しています。

1つ目のストップウォッチは360秒からカウントダウンし、観察者にテスト時間を知らせます。2つ目のストップウォッチは、被験者が活動的に動いている時間を計測します。見ての通り、2つ目のストップウォッチは1つ目のストップウォッチに覆われており、観察者にはミリ秒の小数部分のみが見えるようになっています。

このようにすることで、観察者はストップウォッチが作動していることは確認できますが、スコアリングが完了するまで総移動時間を知ることはできません。これは、観察者のバイアスが結果に影響を与えるのを防ぐためです。マウスは、特にセッションの開始時に、逃避に関連した行動を示します。

これらの行動には、装置の壁や吊り下げバーに到達しようとする試み、激しい身体の震え、および走行に似た四肢の動きが含まれます。これらの動きは明らかに運動性を構成しています。しかし、試験が進むにつれて、動きはよりわずかなものになります。

当研究室では、後肢に動きがなく、前肢のみに限定された小さな動きは、移動能力（mobility）としてカウントしません。また、前回の移動時に得た慣性による振り子のような揺れについても、移動能力とは見なしません。それでは、実際の尾懸垂試験セッションにおけるスコアリングを確認しましょう。

一般的に報告されるのは、活動時間ではなく不動時間である。不動時間は、全試験時間である360秒から総活動時間を差し引くことで算出できる。スコアリング。テイルサスペンション試験には、習熟と練習が必要である。

内部的なラボ標準を確立し、新しい観察者が高い信頼性に達するまでトレーニングすることが重要です。本論文では、尾部懸垂試験の実施方法とスコアリングについて説明します。今後の実験の成功をお祈りいたします。