尾懸垂テスト
January 28th, 2012
尾懸垂試験は、マウスにおける薬物治療の抗うつ効果を評価するための実験手順として検証されます。マウスは、6分間その尾によって中断され、エスケープ関連の行動が評価されています。我々は、尾懸垂試験の実施に使用される手順を説明します。
テールサスペンションテストは、さまざまな実験的操作の抗うつ薬の有効性を予測するために使用される一般的な行動テストです。この動画では、このテストの手順を説明しています。テールサスペンションテストはマウスで検証されており、より大きなげっ歯類には推奨されません。
尾部懸濁試験では、マウスは尾部によって吊り下げられます。マウスは6分間停止したままになります。この間、被験者の行動が記録されます。
6分間の試験期間の終わりに、テープは被験者の尾から取り除かれます。テストが完了すると、視覚的な記録がコンピューターまたはビデオモニターに転送されます。分析のために、観察者は、マウスが6分間のセッション全体で苦労して費やした時間を測定します。
抗うつ作用のある化合物は、私が苦しむ時間を増やします。これは、不動の期間が短いことに反映されています。例えば、抗うつ薬の補助薬として臨床的に有用である気分安定薬リチウムを服用した結果、尾部懸濁液試験において不動時間が短縮されたことを報告しています。
こんにちは、ボルチモアにあるメリーランド大学医学部精神科のトッド・グールド博士の研究室のショーンと申します。こんにちは、同じ研究室のシャンテルです。このビデオでは、テールサスペンションテストの実行方法と採点方法をご紹介します。
テールサスペンション試験は、抗うつ薬治療の潜在的な有効性を評価するために使用されます。それでは、研究室に行って、実験の実行方法をお見せしましょう。必須ではありませんが、特別に設計されたテールサスペンションボックスを使用しています。
このテスト用。テールサスペンションボックスは4つのコンパートメントに分かれており、それぞれが1匹のマウス用に予約されています。ディバイダーは、テスト中にマウスが互いに観察するのを防ぎます。
ただし、棚などの構造物を使用してマウスを吊り下げることは可能です。テールサスペンションテストボックスの寸法は、マウスがエッジに到達して保持するのを防ぐために選択されます。実験を開始する前に、十分なテープ片をカットし、テールへの接着に使用するセグメントに印を付けます。
私たちの研究室では、17センチメートルのテープ片を使用します。このテープ片の端から2センチメートルのところに印をつけ、尾に付着させるために使用されます。この2センチの部分の中央にテールを配置します。
テールサスペンションテストボックスとビデオカメラを配置します。動物を紹介する前に、前の被験者から残った臭いを中和するための滅菌液で箱を徹底的に洗浄する必要があります。私たちの研究室では、色以外のすべての面で同じ2つの異なるテールサスペンションボックスを使用しています。
アルビノマウスの場合、ダークグレーのボックスはビデオ録画のコントラストを良くします。より暗い色のマウス系統には、白いボックスが適切です。ホワイトノイズマシンを始動します。
断続的な音を隠す必要があります。マウスを処置室に連れて行き、順応させます。部屋の条件は一定に保ち、騒音、光レベルの変化、その他の混乱がないようにする必要があります。
この時間は通常、少なくとも 1 時間です。順応期間が終了すると、特定のマウス系統が尾を登るのを防ぐために、テストを続行できます。テールサスペンションテストでは、テールに載せるプラスチックシリンダーを使用します。
これらのシリンダーは、テスト中、尾の付け根で休んでいます。私たちの研究室では、長さ4センチ、直径1センチ、重さ1.5グラムのプラスチックシリンダーを使用しています。クライミングを防ぐためにプラスチックシリンダーを使用している場合は、テープを貼る前にテールに配置する必要があります。
テールの両端にテープを貼り、テールの2〜3ミリメートルをテープの外側に残します。ホームケージのマウスの尻尾にテープを接着します。テープのマークされた端を使用して、テープがテールにくっついて戻ってくることを確認します。
テープを貼ったら、各マウスをケージの壁に固定して、異なる動物に取り付けられたテープが絡まないようにします。このプロセスを迅速に完了します。そうしないと、マウスは不必要なストレスにさらされます。
動物が一時停止される前に、録音を開始する必要があります。テープの自由端をサスペンションバーに置き、治療グループ間でバランスが取れ、カメラの視界を妨げないようにして、動物を吊り下げます。マウスは1匹ずつ吊り下げられるため、各動物はテストの開始時間がわずかに異なります。
各マウスのスコアリングは、一時停止期間の開始時に正確に開始するようにしてください。カメラの視界を遮らないことが重要です。テールサスペンションセッション全体が障害物として採点されるため、カメラビューがデータを失う可能性があります。
すべてのテープの端がサスペンションバーに対して垂直で、同じ長さのたるみがあることを確認してください。各科目について、タイマーを開始します。テールサスペンションのテストは6分です。
6分間のテスト期間が経過したら、各尾部の端からテープをはがし、マウスを自宅のケージに戻します。テストの最後に、被験者情報をビデオ録画する必要があります。マウスをコロニールームに戻した後、テストボックスを徹底的に洗浄し、滅菌溶液で拭く必要があります。
テストが終了したので、ビヘイビアのスコアリングについて説明します。尾部懸垂試験を採点する際に通常評価される唯一の変数は、動物が動かない時間です 不動時間を得るために、マウスが動いている時間を測定し、それを6分間のテスト時間から差し引きます。テストの6分間全体を採点します。
まず、評価されていないマウスを取り上げ、観察者がマウスが費やした時間ごとに1匹の動物にのみ焦点を合わせることができます。モバイルは、ゲームパッドデバイスによって制御される画面上のストップウォッチによって測定されます。ここでは、ご覧のとおり、同時に制御される2つの別々の画面上のストップウォッチがあります。
最初のストップウォッチは360秒からカウントダウンし、テスト時間をオブザーバーに示します。2つ目のストップウォッチは、被験者が動いている時間を測定します。お気づきかもしれませんが、2 番目のストップウォッチは 1 番目のストップウォッチに覆われており、オブザーバーにはそのミリ秒の小数点以下しか見えません。
このようにして、オブザーバーはストップウォッチがカウントされているかどうかを確認できますが、スコアリングが完了するまで合計移動時間を確認することはできません。これは、オブザーバーバイアスが結果に影響を与えるのを防ぐためです。マウスは、特にセッションの開始時に、エスケープ関連の行動を示します。
これらの行動には、装置とサスペンションバーの壁に到達しようとすること、体を強く揺らすこと、走るのに似た手足の動きが含まれます。これらの動きは明らかに機動性を構成しています。しかし、テストが進むにつれて、動きはより微妙になります。
当研究室では、前足に限った小さな動きは数えず、後ろ足の動きがないものを可動性としてカウントしています。さらに、この振り子のようなスイングは、前の機動性の試合中に勢いを得たものによるもので、機動性とは見なされません。それでは、実際のテールサスペンションテストセッションのスコアリングを見てみましょう。
移動時間ではなく、不動時間が一般的に報告されます。不動時間は、360 秒のテスト時間から合計移動時間を差し引くことで計算できます。採点。テールサスペンションのテストにはトレーニングと練習が必要です。
内部ラボ標準を確立し、新しいオブザーバーが高いレベルの信頼性に達するまでトレーニングすることが重要です。この論文では、テールサスペンションテストの実行方法と採点方法について説明します。今後の実験に頑張ってください。
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概要
テールサスペンションテストは、マウスにおける薬物治療の抗うつ効果を評価するために使用される、検証済みの行動手順です。このテスト中、マウスは尾で6分間吊るされ、その脱出関連行動が記録されます。
主要な研究構成要素
科学分野
- 行動神経科学
- 精神薬理学
- うつ病の動物モデル
背景
- テールサスペンションテストは、抗うつ効果を評価するための研究で広く使用されています。
- このテストは特にマウスで使用するために検証されており、より大きなげっ歯類には適していません。
- 様々な実験的操作の効果について洞察を提供します。
- テスト中の行動観察は、絶望のレベルや脱出の意欲を示す可能性があります。
研究目的
- テールサスペンションテストの手順を示す。
- 抗うつ効果の信頼できる測定手段としてテストを検証する。
- マウスの行動反応を評価するための標準化された方法を提供する。
使用される方法
- マウスはテスト中、尾で6分間吊るされます。
- 吊るし期間中の行動反応が記録され、分析されます。
- テストは気分と不安レベルを示す脱出関連行動を評価します。
- 一貫性と信頼性を確保するために標準化された手順に従います。
主な結果
- テスト中に収集された行動データは、抗うつ治療の成果と相関させることができます。
- テストは気分に対する様々な薬物の効果を効果的に区別します。
- 結果は動物モデルにおけるうつ病と治療効果の理解に貢献します。
- 標準化された結果は新しい抗うつ療法の開発に役立つ可能性があります。
結論
- テールサスペンションテストはマウスにおける抗うつ効果を評価するための貴重なツールです。
- 研究者が治療に対する行動反応を評価するための信頼できる方法を提供します。
- このテストの継続的な使用は、うつ病とその薬理学的治療の理解を深めることができます。
よくある質問
Executive Industry Relevance
The tail suspension test provides a standardized behavioral readout for evaluating antidepressant-like activity in preclinical models, supporting early-stage target validation and mechanistic de-risking of CNS-active compounds. By quantifying escape-oriented behaviors as a proxy for behavioral despair, the assay enables high-throughput screening of prospective therapeutics with predictive confidence in mood disorder indications. This assay informs go/no-go decisions in discovery pipelines by linking pharmacological modulation to quantifiable behavioral outputs relevant to antidepressant efficacy.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Interrogates therapeutic hypotheses related to monoaminergic and glutamatergic pathways implicated in mood regulation.
- Operational Value: Enables functional validation of targets through dose-responsive changes in immobility time, reducing false positives in target engagement.
- Predictive Value: Supports portfolio triage by identifying compounds with sustained effects on behavioral despair across multiple chemotypes.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Delivers quantitative, time-based immobility metrics suitable for automation and plate-based screening formats.
- Reproducibility: Standardized suspension duration and scoring protocols minimize inter-observer variability when internal reliability thresholds are met.
- Scalability: Compatible with multi-compartment testing boxes and video tracking systems for parallel evaluation of compound libraries.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Models behavioral despair constructs with construct validity to human depression symptomatology, supporting translational biomarker alignment.
- Preclinical Continuity: Bridges target validation to efficacy testing in chronic stress models by providing an early-phase behavioral screen.
- Risk-Adjusted Advancement: Enables go/no-go decisions based on statistically significant reductions in immobility versus vehicle controls, de-risking later-stage investment.
Pipeline & Workflow Integration
The tail suspension test fits within the discovery continuum from target hypothesis testing through lead identification to preclinical efficacy assessment, particularly for CNS depression indications where behavioral despair is a measurable endpoint.
- Discovery Biology: Tests mechanistic hypotheses by measuring behavioral responses to pharmacological or genetic manipulations of mood-regulating circuits.
- Screening: Provides assay-ready output (immobility time) that enables comparison across treatment groups in dose-response studies.
- Analytics: Generates continuous, quantifiable data (seconds of immobility) suitable for statistical comparison and effect size calculation.
- Translational Research: Aligns with FDA guidance on animal models for psychiatric disorders by assessing core symptomatology domains relevant to clinical endpoints.
- Enterprise Reuse: Establishes a transferable behavioral platform applicable across indication areas involving motivation, reward, and affective processing.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in target validation by linking molecular modulation to ethologically relevant behavioral outputs.
- Operational Value: Enhances reproducibility through standardized training protocols and scorer reliability benchmarks.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early elimination of compounds lacking behavioral efficacy.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by identifying compounds with dose-dependent and reproducible effects on behavioral despair.
Implementation Considerations
- Requires behavioral neuroscience expertise in rodent handling and ethogram interpretation to ensure accurate scoring of mobility versus immobility.
- Depends on video recording infrastructure and controlled environmental conditions (light, sound, odor) to minimize confounding variables.
- Necessitates cross-team standardization of scoring criteria and inter-rater reliability testing before deployment in screening campaigns.
- Involves adaptation considerations for mouse strain-specific behaviors (e.g., tail climbing in C57BL/6) requiring mechanical interventions such as tail cylinders.
- Limited to mice due to apparatus size and behavioral validity; not scalable to rats or non-rodent species without significant redesign.
