臨床試験および筋萎縮性側索硬化症（ALS）のマウスモデルにおける脊髄の除去

筋萎縮性側索硬化症（ALS）のマウスモデルは、臨床的および行動的に検討されている。付随する免疫組織学的分析のための前提条件として、脊髄の調製は、詳細に描かれています。

こんにちは、私の名前はラー・ターナーです。私はドイツのインガム大学の神経内科のポスドクです。こんにちは、私の名前はリン・グンダです。

私は医学生で、この研究室で論文の仕事をしています。今日は、萎縮性側索硬化症のMossモデルであるSODG 93の臨床試験をお見せします。さらに、いわゆるローターテストによる運動機能テストと、さらに、免疫論理分析を行うための吊り下げワイヤーグリップによる別の運動機能テストを実演します。

マウスの機能試験後、必要な手順として、脊髄、STIC神経、および胃筋を切除します。これらの外科的処置を詳細に示し、最後にいくつかの模範的な免疫論理所見を提示したいと思います。さて、ではまずは臨床検査から始めましょう。

これは、私たちの臨床分類システムでは、筋肉の振戦やパーシスなどの臨床症状を示さない、自由に移動する野生型のMOEです。それはスコア4になります。トランスジェニックなA LS萌えです。

初期の疾患段階では、右膝肢の重度の振戦を示し、スコア3に分類します。少なくとも 1 つの後肢の引きずりは、ハンギング ワイヤー テストで臨床スコア 1 に分類され、粗い筋肋骨強度が評価されます。各マウスはカスタムメイドのワイヤーに配置され、ストローで覆われたボタンの上で慎重に逆さまになります。

少なくとも 180 秒の 3 回連続してトレーニングを行った後、落下までのレイテンシーが測定されました。各マウスは、倒立蓋を最大180秒間保持する試みを最大3回与えられ、右側の白いワイヤータイプのマウスと比較して最も長い時間が記録されます。左のプラークトランスジェニックマウスは非常に弱く、マキシマムに達する前に蓋から落ちます。

ローターロッド装置は、運動協調性、バランス性、運動学習能力を測定するために使用されます。優れたパフォーマンスを発揮するには、感覚運動協調の高度な命令が必要です。これは、コンピュータ制御のモーター駆動回転スピンドルと、5mの5レーンで構成されています。

マウスの故障は、底面のプラスチックプレートに圧力をかけることで自動的に検出されます。毎分15ラウンドの一定速度で少なくとも180秒の3回連続して訓練した後、動物が回転する腐敗物に留まることができる時間が測定されます。各動物は3回の試行を受け、転倒しない最長の潜伏時間が記録されます。

左側の健康な野生型モスはローターロッドで難なく走っています。これに対し、右側のトランスジェニックα smoは、ローターロッドにさえ残るほど深刻な問題を抱えており、後ろからしばらく観察すると滑り落ちます。左のリトレマウスの深刻なランニングの難しさがわかります。

健康なワイヤータップマウスと比較すると、ローターロッドの速度に追いつくことができず、HINの手足で上向きに押すことができません。脊髄の免疫化学的分析を行うためには、動物を犠牲にする必要があります。動物実験を適切に実施するためには、常に現地のガイドラインを厳格に守ることが非常に重要です。

この文脈では、脊柱とその周辺組織のこの非常に単純化された概要では、主要な解剖学的構造が描かれています。動物を腹側に置き、背側袋から筋肉の準備を始めます。筋肉組織が除去された後、脊髄を囲む脊柱にアクセスします。

動物を屠殺し、溶液を含むパラフォームの高さで灌流した後、脊髄を取り外すことができます。動物を手術台に載せ、四肢全体を側面に固定し、マウスの裏側を露出させます。動物を濡らして毛皮を平らにし、次の皮膚切開を容易にします。

このために、鋭いメスが使用されます。皮膚を両側に伸ばすように注意してください。脚の筋肉の切断を容易にするために準備する必要があります。

彼らの皮膚も切開する必要があります。皮膚切開が完了したら、そっと脇に引っ張ります。ピンセットで 脚の筋肉と坐骨神経を取り除き、脊髄に近づき続け、動物を新しい手術台に置きました。

これで、頭蓋頸部、筋肉、脊柱を簡単に特定できるようになりました。これらすべての構造を特定したら、次のステップに進むのは簡単です。首の筋肉とnu靭帯を取り除く必要があります。

深く切開しすぎて脊柱をリードしないように注意してください。次のステップでは、傍脊椎筋を完全に除去して脊柱を露出させます。脊柱にアクセスするためには、いくつかの切除術を行う必要があります。

私たちは、大西洋後頭部を含む脊柱の頸部から始めます。椎弓切除術を行うには、椎体からすべての椎骨突起を取り除くことができるように、椎弓を切断する必要があります。前に説明したように、椎弓切除術は椎弓の切断から始まります。

その後、ライナを引き抜くことができます。繰り返しになりますが、より多くのラルを取り除く必要があるため、脊髄を傷つけないように注意してください。角度のついたハサミを使用して、一度に両側の複数の椎弓を切開することは非常に役立ちます。

次に、背側突起を引っ張って、椎骨ラミンとクローズアップを完全に取り除きます。ハサミは、脊柱管の側面に最も横方向に慎重に挿入する必要があることがわかります。脊柱の残りの部分は、後で脊髄を完全に除去するために除去する必要があります。

脊髄の解剖学的ランドマークは、いわゆる頸椎および腰椎のエセンシアです。脊髄全体の切除術を終えたら、脊髄のすべての腹側根も横断し、髄膜の硬膜から解放することを確認してください。次に、頸髄をカットします。

Craniallyとその除去が再び開始されます。この組織を傷つけないように、脊髄に非常に慎重に触れてください、なぜならこれは後の免疫免疫化学分析に深刻な制限を引き起こす可能性があるからです。脊髄の除去は、胸部レベルでさらに続けられ、腰部に進みます。

最後に、今度は紐の馬の側面で再びカットされます。今では完全にリリースすることができます。ここでは、RAL列の元の位置のすぐ隣に脊髄が配置されているのがわかります。

最終的に、Paraform Hydeポスト固定ソリューションに入れられます。脊髄免疫組織化学分析の古典的な例として、コリン、アセチルトランスフェラーゼを認識する抗体を適用して、脊髄前角の運動ニューロンを同定できます。ここでは、健康な野生型の動物に多数の運動ニューロンが見られます。

対照的に、末期のトランスジェニック a LS 動物は、前角ではるかに少ない数の運動ニューロンを示します。このビデオ記事を見て、SODG 93の基本的な臨床検査を学んだはずです。萎縮性側索硬化症のマウスモデル。

ローターテストと吊り下げワイヤーテストの2つの運動動作テストが実証されています。それらは、基本的な運動機能を評価するための良い可能性を提供します。それらは実行しやすく、運動障害の検出に敏感で、時間効率が良いです。

このビデオの主要部分は、脊髄の準備技術のデモンストレーションにあります。もちろん、これは他のマウス疾患モデルにも適用でき、脊髄の疾患病理の後の免疫化学的解析に不可欠なステップです。ご視聴いただきありがとうございました。

この動画記事が今後の実験にお役立ていただければ幸