Name: 骨髄移植によるマウス大腸炎における免疫および非免疫細胞からの遺伝子発現の機能的役割を差別化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 43 s
Description: 学ぶ骨髄移植を用いたマウス大腸炎におけるlyin抗菌ペプチドの抗炎症効果と免疫応答制御メカニズム。フローサイトメトリーと組織学的解析で移植成功を検証し、炎症性腸疾患治療への応用可能性を探索する。

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この作品は、カリフォルニア大学ロサンゼルス校（UCLA）-CUREセンター、クローン病とアメリカのキャリア開発賞（＃2691）と健康NIDDK K01研究所（DK084256）本町ワイクーンへの資金の大腸炎財団からパイロットとフィージビリティスタディの助成金によって賄われていた。 骨髄照射操作がバーナード·レヴィンとエイズ研究ヒト/マウスキメラ中核施設のためのUCLAのセンターのスコット·キッチンの援助を受けた。フローサイトメトリー操作はUCLAのベクトル·コア施設によって支援された。

1。前あなたスタート技術的な考慮事項<ol><li>対応するCD分子とマウスはマウスの主要ベンダーから購入することができますので、我々は実験のためにC57/BL6野生型マウスとノックアウトマウスの両方を使うことをお勧めします。 </li><li>それは、骨髄移植後の野生型マウスとノックアウトマウス由来のドナー細胞を追跡するのは困難であるので、それは野生型マウスを表すためにCD45.1マウスを使用する必要があります。 （CD45.1 C57/SJL WTマウスジャクソン研究所の株式＃002014）。 </li><li>ほとんどのマウスコロニーがCD45.2です。私たちのノックアウトマウスは、CD45.2遺伝子型（：ジャクソン研究所株式＃000664交互CD45.2 WTマウスソース）に属しています。 CD45.1またはCD45.2遺伝子型の決定は、このプロトコルのセクション7で説明したように、骨髄や末梢血のフローサイトメトリーを用いて行うことができる。 </li><li>照射後のマウスは、免疫力を損なわれている。病原体フリー施設でマウスをおいてください。 </li><li>照射装置の動作は、特別なセキュリティを必要とするclearanceとトレーニング。訓練および承認プロセスに時間を節約するために、それは照射装置を操作することができる資格を持つ技術者による実験室と協力するのが最善です。 </li><li>多くの機関は、経験豊富な技術者とフローサイトメトリー実験室を持っています。フローサイトメトリーの動作に問題を最小限に抑えるために、それはあなたが開始する前に、経験豊富な技術者を使ってフローサイトメトリー実験計画を議論することをお勧めします。 </li><li>マウス（各群10匹）、このように割り当てられていた： </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td> グループ </td><td></td><td> 受信者への骨髄ドナー </td><td> 治療 </td></tr><tr><td> A </td><td> BMの交換</td><td> CD45.1 WTにCD45.2 KO </td><td> DSS大腸炎</td></tr><tr><td> B </td><td></td><td></td><td>水の正常なコントロール</td></tr><tr><td> C言語</td><td> BMの交換</td><td> CD45.1 WTにCD45.2 KO </td><td> DSS大腸炎</td></tr><tr><td> D </td><td></td><td></td><td>水の正常なコントロール</td></tr><tr><td> E </td><td>ごまかし</td><td> CD45.1 WTにCD45.1 WT </td><td> DSS大腸炎</td></tr><tr><td> F </td><td></td><td></td><td>水の正常なコントロール</td></tr><tr><td> G </td><td>ごまかし</td><td> CD45.2 KOへCD45.2 KO </td><td> DSS大腸炎</td></tr><tr><td> H </td><td></td><td></td><td>水の正常なコントロール</td></tr></tbody></table>実験プロトコルの*簡単な例を図1に示します。 2。レシピエントマウス照射<ol><li>マウスは飼育と無菌施設に保管されています。フィルタ付きのオートクレーブ処理照射パイでマウスを置きます。照射パイの各スロットに1マウスを置きます。照射器にパイを置き、ターンテーブルとパイが回っていることを確認してください。 </li><li>エアーポンプの電源を入れ換気のために。照射装置のドアを閉じてロックします。 </li><li> 10分（放射線源及び半減期に応じて）約1,000ラド（10グレイに相当）をマウスに照射します。この時点から、放射線照射したマウスは免疫不全で、感染に弱い免疫を持っています。照射後、パイを取り出して、動物施設におけるバイオセーフティキャビネットへの輸送のための無菌の容器に入れる。感染の機会を最小限にするために外部環境にマウスを近づけないようにしてください。 </li><li>バイオセーフティキャビネット内で、（ - 水100ml当たり3.12ミリリットルをケージあたり4匹sulfatrim懸濁液と新しい滅菌水を追加）オートクレーブした寝具を使用してオートクレーブしたマウスのケージにマウスを移す。 </li><li>抗生物質は光感受性であるためアルミホイルで水のボトルを包む。ケージにそれをロードする前によくsulfatrimソリューションボトルを混ぜてシェイク。 </li></ol> 3。ドナー骨髄の抽出<ol><li>二酸化炭素またはisoflur持つマウスを生け贄に捧げるインピーダンスその後1:200ライゾール溶液中に浸す。肌を濡らし、オープン骨を切開し、70％エタノールでマウスをスプレーしてください。 </li><li>滅菌のための70％エタノール中で解剖器具を浸す。 </li><li>バイオセーフティキャビネット内郭清を行う。筋肉や靭帯を取り付けるから無料上腕骨、大腿骨、脛骨と腓骨の骨を露出させ、無菌の解剖器を使用します。 </li><li>赤色骨髄を表示するために骨の両端を切り開く。ピンセットで骨を保持します。シャーレに3mlの注射器と25G針で冷PBSで赤色骨髄を洗い流す。より骨髄細胞を生成するために骨の両端からフラッシュします。 </li><li>繰り返し吸引と吐出によって赤色骨髄プラグを壊すために6ミリリットルのシリンジと18G1 / 2の注射針を使用しています。 50mlのFalconチューブで骨髄を転送します。 </li><li> 4℃で5分間のために1800回転で骨髄をスピンダウン5から10秒間ボルテックスすることにより上清、ペレットを再懸濁しを破棄します。 </li><li>滅菌水で10倍のRBC溶解緩衝液で希釈します。広告D 1X RBC溶解バッファー（ドナーマウスあたり5ml）、5秒間再びボルテックスし、室温で正確に3分間保つ。 </li><li> 3分後、溶解及び混合を停止するには、20ミリリットル冷PBSでチューブを埋める。新しい50mlファルコンチューブに直接40μmのセルストレーナーを介してコンテンツを注ぐ。 </li><li> 5mlのPBSで元のチューブを洗浄し、同様にセルストレーナーに転送されます。 PBSおよびミックスで50mlに水を補充して下さい。 </li></ol> 4。骨髄ドナー細胞をカウント<ol><li>エッペンドルフチュー​​ブ、エッペンドルフチュー​​ブとミックスに骨髄懸濁液100μlにトリパンブルーの100μlを添加する。血球計数器に染色された細胞混合物をピペット。 </li><li>細胞の量は、16の正方形でファルコンチューブ=非染色細胞数×2（トリパンブルーの希釈に起因する）×10,000×50ミリリットルの総リビング骨髄細胞数によって計算され</li><li> 4℃で5分間、2,000 rpmで50ミリリットルのファルコンチューブに骨髄細胞をスピンダウン</li><li>上清を取り除きます。基づい総細胞数で、1mlあたり1×10 8個の細胞をPBSでペレットを再懸濁</li></ol> 5。レシピエントマウスに注入<ol><li>熱パッド上と温暖ランプの下で、レシピエントマウスを温める。拘束中のレシピエントマウスを置きます。静脈内に100から200μlにマウスあたり1×10 7個の細胞を注入します。 </li><li>ドナー骨髄の注入は、照射後4から24時間の間に行わなければなりません。 </li><li>ケージあたり4注射したマウスについていく。病原体フリー動物施設の最初の4週間の抗生物質で処理した水を用いてオートクレーブしたケージの中に注入されたレシピエントマウスを維持し、マウスは免疫力を取り戻すことができます。衛生状態を維持するために4日毎にはケージ、抗生物質で処理した水や食料を変更します。 </li></ol> 6。大腸炎や大腸炎の評価の誘導<ol><li> 4週間照射と骨髄移植後に、それらの正常を取り戻すために抗生物質を含まない通常の水に切り替えて、さらに2週間のマウスを維持叢を腸。 </li><li> 6週間骨髄注入後、初期の体重を測定します。いくつかのマウスは大腸炎を誘発するために水を自由に摂取を飲んで5％硫酸デキストランを与えられている。一部のマウスでのみ正常対照群として定期的な飲料水を与えられている。 </li><li> 5日後、末梢血を撤回し、ヘパリンコーティングチューブ（バキュテイナー）に転送して、氷の中に保管してください。 1チューブに4匹から血液をプール。 =600μlの細胞染色バッファ300μlの血液300μlのを兼ね備えています。 100μlで5エッペンドルフチュー​​ブ、それぞれに血を分けてください。 </li><li>二酸化炭素又はイソフルランを持つマウスを生け贄に捧げる。巨視的な損傷のスコア（詳細1のための別のJOVEビデオ出版物を参照してください）を評価します。体重変化を測定します。デジタルキャリパーと腸の長さと厚さを測定します。スツールテクスチャを（ハード、ソフトや血）に従ってください。 Hemooccultと便中の潜血を決定します。結腸組織を解剖し、H＆E染色のためにホルマリンで固定します。 </li><li> 1大腿boを解剖するね当たりマウスは、骨髄を​​抽出し、25G針と1mlシリンジ経由冷PBSで骨髄をフラッシュします。プール4骨髄は1管に差し込むと、氷の中に保管してください。 </li><li>全く骨髄プラグが存在しなくなるまでペトリ皿、せん断18G針と5mlシリンジで数回骨髄プラグに骨​​髄を注ぐ。 </li><li> 4℃で5分間1500 rpmでスピンダウン上清を除去し、600μlの細胞染色バッファーで再懸濁する。 100μlで5エッペンドルフチュー​​ブ、それぞれに再懸濁させた骨髄を分ける。 </li></ol> 7。フローサイトメトリーによる骨髄移植の品質検査<ol><li>血液や骨髄＃1-5の各サンプルチューブにラベルを付ける： </li><li>暗闇の中で、それぞれの管のための抗体混合物を準備します。 </li></ol>第1抗体なし 第230μlのFITCアイソタイプコントロール+30μlのPEのアイソタイプコントロール+15μlのCD16/32ブロッキング 第330μlのFITC CD45.1 AB +15μlのCD16/32ブロッキング ＃4を30μlのPECD45.2 AB +15μlのCD16/32ブロッキング 第530μlのFITC CD45.1 AB +30μlのPE CD45.2 AB +15μlのCD16/32ブロッキング<table border="1"><tbody><tr><td>血液や骨髄のサンプル＃1には何も追加しない</td></tr><tr><td>各血液または骨髄サンプル＃2への抗体混合物＃25μlを追加</td></tr><tr><td>各血液または骨髄サンプル＃3に抗体混合物＃3の3μlを加え</td></tr><tr><td>各血液または骨髄サンプル＃4に抗体混合第43μlを追加</td></tr><tr><td>各血液または骨髄サンプル＃5への抗体混合物＃5μlを加え</td></tr></tbody></table><ol start="3"><li> 30分間氷上で、暗所で保管してください。 </li><li>各チューブに2ミリリットル1X RBC溶解バッファーを追加します。氷上で15分間、暗所で保管してください。 </li><li> 4℃で5分間、1500rpmで細胞をスピンダウン（GH 3.8ローター、1,500回転= 350×g）で上清を除去します。暗い、その後渦簡潔で500μlの細胞染色バッファーでペレットを再懸濁します。 </LI&gt; <li>フローサイトメトリーによる免疫染色された血液や骨髄サンプルでCD45.1（WTを表す）とCD45.2を（KOを表す）を確認してください。 KO CD45.2を表すために、WT CD45.1とPEを表すためにFITCを選択します。 </li><li> FlowJoソフトウェアによってフローサイトメトリーの結果を分析します。ドナーの遺伝子型は、血液や骨髄中の支配的な遺伝子型であるかどうかを判断するのFITC比：PEの比、またはPE：FITCの比率を計算します。 </li></ol>

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</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

この骨髄移植のアプローチは、大腸炎の免疫学研究、感染症、癌、肥満や他の病気のために適している。この骨髄移植実験は、目的遺伝子が両方の骨髄由来と非骨髄由来細胞と目的遺伝子がいずれの集団からの細胞によって病気を媒介することが疑われるで発現した場合に必要とされる。例えば、抗菌ペプチドカテリシジンは、急性大腸炎を調節することが示されている。しかし、それは、上皮細胞や免疫細胞（マクロファージなど）の両方で表されます。その後、我々はマウスの急性大腸炎を調節する細胞のどの集団を定義するために骨移植を使用していました。大腸炎の重症度が有意に骨髄移植を介した骨髄カテリシジン遺伝子型の変更後に変更されていました。その後、我々は、DSSに対応して変調急性大腸炎に重要な役割を果たしている骨髄由来細胞で発現したカテリシジンを締結することができます。 骨ミリアンペアrrow由来の細胞は、典型的には赤血球、白血球、血小板が含まれています。骨髄移植は、これらの細胞ではなく、他の遺伝子型を変更します。横方向に言えば、この実験は、非骨髄由来の細胞に対する骨髄由来細胞における目的遺伝子の役割を区別することができます。し...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>細胞染色バッファ</td><td> Biolegend </td><td> ＃420201 </td></tr><tr><td> 10X RBC溶解バッファー</td><td> Biolegend </td><td> ＃420301 </td></tr><tr><td> FITC標識マウスアイソタイプコントロール</td><td> Biolegend </td><td> ＃400207 </td></tr><tr><td> PEのマウスアイソタイプコントロール</td><td> Biolegend </td><td> ＃400211 </td></tr><tr><td> PE抗マウスCD45.2 </td><td> Biolegend </td><td> ＃109807 </td></tr><tr><td> FITC抗マウスCD45.1 </td><td> Biolegend </td><td> ＃110705 </td></tr><tr><td>抗マウスCD16/32ブロッキング</td><td> Biolegend </td><td> ＃101301 </td></tr><tr><td> 40μmのセルストレーナー</td><td> Fisherbrand </td><td> ＃22363547 </td></tr><tr><td> PBS 1X </td><tD&gt; MPバイオメディカル</td><td> ＃1860454 </td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td> Fisherbrand </td><td> ＃BP2425 </td></tr><tr><td> Sulfatrim（SMZ） </td><td> Qualitest </td><td> NC9242720（漁師） </td></tr><tr><td>ライゾールIC </td><td> Andwin科学</td><td> NC9745686（漁師） </td></tr><tr><td> Vaccutainer </td><td> BD </td><td> ＃8000813 </td></tr><tr><td>マウス制止</td><td>トリーサイエン</td><td> ＃テレビ-150 </td></tr><tr><td>照射器</td><td> JLシェパード·アンド·アソシエイツ</td><td>私は68Aマーク</td></tr><tr><td>フローサイトメーター</td><td> BD </td><td> BD FACSCanto II </td></tr><tr><td>フローサイトメーターの試験管</td><td>ファルコン</td><td> ＃352052 </td></tr><tr><td>デジタルノギス</td><td> Fisherbrand </td><td> 14-648-17 </td></tr><tr><td>ヘモカルトICT </td><td>ベックマン·コールター</td><td> G0328QW </td></tR&gt; </tbody></table>

骨髄移植によるマウス大腸炎における免疫および非免疫細胞からの遺伝子発現の機能的役割を差別化

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

大腸炎の開発における遺伝子の役割を理解するために、我々は、野生型マウスと大腸炎に目的遺伝子欠損ノックアウトマウスの応答を比較した。目的遺伝子は、骨髄由来の細胞とホストの非骨髄由来細胞の両方で発現される場合、ただし、それは、骨髄由来の細胞と非骨髄に目的の遺伝子の役割を区別することが可能である骨髄移植技術によって誘導された細胞。マウスの骨髄由来細胞の遺伝子型を変更するには、レシピエントマウスのオリジナルの骨髄を照射して破壊され、その後、別の遺伝子型の新しいドナー骨髄に取って代わられた。野生型マウスのドナー骨髄をノックアウトマウスに移植したとき、我々は骨髄由来の細胞における野生型遺伝子の発現とノックアウトマウスを生成することができます。あるいは、時のノックアウトマウスドナー骨髄は目的遺伝子を発現せず、野生型レシピエントマウスは、野生型マウスに移植した骨髄由来の細胞を作製した。しかし、骨髄移植は100％完全ではありません。そこで、レシピエントマウスと骨髄移植の成功におけるドナー骨髄由来の細胞の割合を追跡するために、ドナーとレシピエント細胞のマーカーとして分化（CD）の分子のクラスタ（CD45.1とCD45.2）を利用。 CD45.2遺伝子型を持つCD45.1遺伝子型とノックアウトマウスと野生型マウスを用いた。レシピエントマウスの照射後、異なる遺伝子型のドナー骨髄細胞をレシピエントマウスに注入した。新しい骨髄がその免疫を引き継ぐために再生したときに、マウスは大腸炎を誘導する化学剤（デキストラン硫酸ナトリウム、DSSの5％）でチャレンジした。ここで我々はまた、マウスでは大腸炎を誘導し、骨髄由来の細胞から発現対象の遺伝子の役割を評価するための手法を示した。骨由来の細胞から目的遺伝子は、疾患の発症に重要な役割を（例えば大腸菌などに再生される場合TIS）、骨髄移植によるレシピエントマウスの表現型を大幅に変更することができます。大腸炎の実験の最後に、血液や骨髄中の細胞を骨髄由来がCD45.1とCD45.2に対する抗体と存在の彼らの量的比率を用いて標識したフローサイトメトリーにより、骨髄移植の成功を評価するために使用することができる。成功した骨髄移植はレシピエントマウスの骨髄や血液の両方で受信者の遺伝子型以上のドナー遺伝子型（CD分子マーカーの任期で）の大半を示すべきである。

目的遺伝子は、大腸炎の開発の間に免疫細胞で重要な役割を果たしている場合には、骨髄を​​介して異なる遺伝子型の骨髄を受けたマウスは、移植（KOまたはKOにWTとWTは）DSS大腸炎への応答変化があるはずです。大腸炎の重症度を決定するための最も重要なパラメータの1つは、結腸組織のH＆E染色である。結腸組織構造の変化や炎症の徴候を定量的に、H＆E組織像のスコアリングシステムで評価することができる。 DSS大腸炎モデルのため、H＆E組織像のスコアの基準は、ここに2を発見することができます。あるいは、化学物質誘発性大腸炎はまた、ニトロベンゼンスルホン酸（TNBS）によって誘導することができる。 TNBS腸炎誘導し、H＆E組織学採点基準の方法は前の刊行物3に記載されています。グループ間の組織学的スコアの差はスチューデントの t-検定により分析することができる。 マウスはかなり持っているかもしれ改善または偽骨髄移植（WTまたはKOにKOにWT）を持つマウスと比較した場合、大腸炎を悪化させた。目的遺伝子は、骨髄由来細胞を介して大腸炎にお...

骨髄移植は、骨髄由来細胞の遺伝子型を変更する方法を提供します。目的の遺伝子が骨髄由来細胞と非骨髄由来細胞の両方で発現されている場合は、骨髄移植では、非骨髄由来細胞の遺伝子型を変更することなく、異なる遺伝子型に骨髄由来細胞を変更することができます。

大腸炎の発症におけるある遺伝子の役割を理解するため、野生型マウスと目的遺伝子欠損ノックアウトマウスの応答を比較した...

このビデオで実演する実験の全体的な目的は、抗菌ペプチドlysinが、マウスにおけるデキストラン硫酸誘発結腸炎の改善に役割を果たすかどうかを評価することです。これは、野生型マウスからの骨髄を放射線照射したlysin欠損マウスおよびノックアウトマウスに注入し、またノックアウトマウスからの骨髄を放射線照射した野生型マウスに注入することによって行われます。移植された骨髄により、レシピエント内でドナーの遺伝子型を持つ新しい血球が生成されます。その後、レシピエントマウスにデキストラン硫酸を投与し、4週間後に大腸炎を誘導します。移植の成功はフローサイトメトリーによって検証し、結腸組織の損傷は組織学的解析により評価します。その結果、ノックアウトマウスに野生型骨髄を移植すると大腸炎が改善することが示されました。逆に、ノックアウト骨髄を野生型マウスに移植すると、大腸炎は悪化します。この手法は、炎症または感染における骨髄由来細胞または非骨髄由来細胞からの遺伝子発現を特定するための重要な疑問を解決するのに役立ちます。野生型マウスとノックアウトマウスの追跡を可能にするため、本実験ではC57BL/6野生型マウスおよびC57BL/6ノックアウトマウスの使用を推奨します。骨髄移植後のドナー細胞。野生型マウスとしてCD 45.1マウスを、ノックアウトマウスとしてCD 45.2マウスを使用します。ここに示すチャートは実験設定を表しており、各グループに5匹のドナーマウスと10匹のレシピエントマウスが割り当てられています。グループAおよびBでは、野生型マウスからノックアウトマウスへ骨髄を移植します。グループAには大腸炎を誘発させますが、グループBには誘発させません。グループCおよびDでは、ノックアウトマウスから野生型マウスへ骨髄を移植し、グループCにのみ大腸炎を誘発させます。グループEおよびFでは、野生型から野生型への移植を行い、グループGおよびHでは、ノックアウトからノックアウトへの移植を行います。放射線照射マウスへの移植に用いるドナー骨髄を調製するため、まずバイオセーフティキャビネット内で、犠牲にしたマウスの骨から骨髄を抽出します。滅菌済みの解剖器具を用いて、上腕骨、大腿骨、脛骨、および腓骨を、付着している筋肉や靭帯から切り離して露出させ、シャーレに移します。骨の両端を切断し、赤色骨髄を露出させます。次に、ピンセットで骨のいずれか1本を保持します。3 mLシリンジと25G針を用い、冷PBSで赤色骨髄を別のペトリ皿へ洗い出します。次に、骨の反対側からも同様に洗い出し、さらに多くの骨髄細胞を回収します。この工程をすべての骨に対して繰り返します。野生型マウスとノックアウトマウスの骨髄をそれぞれ別にプールします。18ゲージの1/2インチ針を装着した6 mLシリンジを用い、吸引と排出を繰り返すことで赤色

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

マウス骨髄移植は、ヒトにおいて、移植片対宿主病を支配する免疫のメカニズムを研究するために広く使われているテクニックです。...

移植片対宿主病の誘導および<emインビボで&gt;</emMHCマッチしたマウスモデルを使用する&gt; T細胞のモニタリング

マクロファージは、多くの組織の恒常性と病理学の中心的な役割を果たしています。ここで紹介するプロトコルは、マクロファージを枯渇させるための方法について説明します...

マウスのマクロファージの枯渇と再構成

ドナー細胞の生着を​​決定することは、明確に定義された表現型マーカーを欠くマウス骨髄移植モデルにおける課題を提示する。私たちは、女性の移植レシピエントマウスに男性ドナー細胞の生着を​​定量化するための方法論を説明した。このメソッドは、HSCの機能の研究のためにすべてのマウス系統で使用することができます。...

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ここでは、同系CD4+CD45RB高T細胞をT細胞およびB細胞欠損レシピエントに養子として移すことにより、マウスに結腸炎症を誘発するプロトコールを提示します。臨床的および組織病理学的特徴は、ヒトの炎症性腸疾患を模倣しています。この方法により、結腸性炎症の開始と疾患の進行の研究が可能になります。...

エフェクターCD4の養子移入によるマウス腸の炎症の誘導<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt;高い</sup&gt;免疫不全マウスへのT細胞

ホーミングや骨髄 (BM) のニッチに造血細胞の生着を研究する遺伝的動物モデルとの組み合わせで、calvarium の生体内蛍光顕微鏡 (IVFM)...

骨髄ニッチに造血細胞の生着のダイナミクスを研究する遺伝的モデルと生体内蛍光顕微鏡 (IVFM) を組み合わせること

このプロトコルの目的は、コラゲナーゼを用いて組織の酵素消化によって結腸のラミナプロプリに存在する単核細胞を単離させることである。このプロトコルは、単核細胞の効率的な単核分離を可能にし、その結果、単一細胞懸濁液を生成し、堅牢な免疫表現型に使用することができます。...

コラゲナーゼEを用いてマウスコロンからのラミナプロプリア単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞の単核細胞

移植片対宿主病は、同種骨髄移植後の主要な合併症である。樹状細胞は、移植片対宿主病の病因において重要な役割を果たす。現在の記事では、移植片対宿主病の発症における樹状細胞の役割と移植片対白血病効果を調査するための新しい骨髄移植プラットフォームについて説明しています。...

移植片対宿主病における樹状細胞の役割を調べる骨髄移植プラットフォーム

骨髄移植(BMT)の3つの方法について、全体照射によるBMT、シールド照射を伴うBMT、マウスモデルにおけるクローナル造頭法の研究のための予備調整なし(養子BMT)を用いたBMT法について述べた。...

クローン造造を研究するマウスにおける骨髄移植手順

このプロトコールでは、腸内微生物叢抗原特異的T細胞養子移入大腸炎モデルが記載されている。CD4+ T細胞は、CBir1...

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学ぶ骨髄移植を用いたマウス大腸炎におけるlyin抗菌ペプチドの抗炎症効果と免疫応答制御メカニズム。フローサイトメトリーと組織学的解析で移植成功を検証し、炎症性腸疾患治療への応用可能性を探索する。

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