Name: 大腸癌の同所性マウスモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:21:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: 学ぶ大腸癌の同所性マウスモデル構築法。盲腸壁への細胞懸濁液注入または皮下腫瘍移植により、自然な進行と転移を再現し、新規治療薬の効果評価に有用なモデルを確立する方法です。

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外科、カリフォルニア大学、サンフランシスコ レイモンドシャヒーン、MD

I.細胞の調製<ol><li>大腸がん細胞を培養中で成長し、時サブコン収穫されています。 </li><li>単一の細胞懸濁液をリン酸で調製される緩衝生理食塩水と氷上で保存。 </li></ol> II。腫瘍の準備<ol><li>以前に確立された皮下大腸の腫瘍を持つマウスを安楽死されている。 </li><li>皮下腫瘍は​​無菌操作を用いて除去し、2〜3mmの部分に分かれています。 </li><li>腫瘍部分は氷の上にリン酸緩衝生理食塩水に保存されています。 </li></ol> III。マウスの準備 注：私たちのラボでは、マウスを麻酔イソフルラン吸入使用し、別の方法として、同じ効果を達成するために注射麻酔薬を使用することができます<ol><li>麻酔の深さはつま先のピンチを利用して評価されます。つま先のピンチと反射撤退はないはずです。 </li><li>抗生物質はこの時点で与えることができる。 </li><li>以前に剃毛された麻酔マウスは、、適切に配置されている。 </li><li>腹部はbetadine液で整形処理されています。 </li><li>腹部と手術部位を無菌的に覆われている。 </li></ol> IV。開腹術<ol><li>小さなニックネームは、皮膚で作られています</li><li>腹壁の筋肉組織が把握して持ち上げられる</li><li>腹腔が入力され、はさみの単一のブレードは、離れて、腹腔内のコンテンツをプッシュするために使用され</li><li>切開は2〜3 cmに拡張されています</li></ol>盲腸のV.露出<ol><li>その盲目のエンディングのポーチと盲腸を同定し、体外され</li><li>盲腸は、プレカット、滅菌ガーゼを使用してマウスの残りの部分から絶縁されています</li><li>温かい生理食塩水は、盲腸の潤いを保つために使用されます。 </li></ol> VI。盲腸壁への細胞の注入<ol><li> 27 Gまたは細かい針は、盲腸壁に細胞の50μLボリュームをインジェクトするために使用されます</li><li>針は削除されます</li><li>注射部位は、漏れのないことを確認するために検査され</li><li>盲腸を腹腔内に返されます。 </li></ol> VII。盲腸上腫瘍の移植 注：盲腸壁に細胞を注入することに加えて、別のアプローチは、盲腸に腫瘍を移植することです。 <ol><li> 8ステッチの数字は6から0または7から0サイズの縫合糸を使用して盲腸に配置されます</li><li>盲腸壁は軽く損傷している</li><li>その後、腫瘍の一部が配置されている</li><li>ステッチは縛られている</li><li>盲腸を腹腔内に返されます。 </li></ol> VIII。マウス腹壁閉鎖と回復<ol><li>マウス腹壁は、次の3つの3-0で使用して、中断されたステッチや4から0サイズの縫合糸を使用してクローズされ</li><li>別の方法として、単純なランニングステッチを使用することができます</li><li>術後鎮痛薬と流体のボーラスは、この時点で与えることができる</li><li>マウスは、麻酔から回復するために許可されます。 </li></ol> 注：吸入麻酔薬で、これは一般的に30秒かかる IX。結果 - 原発巣と肝転移<img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_8/A.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_9/B.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_10/C.png" alt="" /> 原発腫瘍は - その場で示すように（）と血管新生の証拠（B）と、H＆E染色で、腫瘍は局所浸潤性があります（C） <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_11/D.png" alt="" /> 肝転移 - 示されてex vivoで（D）

<ol><li>Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Surg%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Dig Surg. 22, 16-25 (2005).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+colorectal+cancer+and+its+metastases+in+rodent+models%3A+comparative+aspects+with+those+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans.</a> Comp Med. 50, 16-26 (2000).</li>
<li>Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+ectopic+organ+environments+differentially+influence+the+sensitivity+of+murine+colon+carcinoma+cells+to+doxorubicin+and+5-fluorouracil%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil.</a> Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).</li>
<li>Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-rectal+injection+of+tumor+cells%3A+a+novel+animal+model+of+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer.</a> Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).</li>
</ol>

マウス皮下腫瘍モデルを確立し、監視も簡単ですが、それはこのモデルは、大腸癌の元解剖学的部位を複製できないことは明らかである。微小環境の違いにより、皮膚の下に成長している大腸癌細胞は、それらの表現型を変更し、ほとんどの場合1,2の進行と転移に失敗することが示されている。実際には、治療に対する腫瘍の反応は、がん細胞が異所性（皮下）対同所場所3に注入されているかどうかに応じて劇的に異なることがあります。彼らの自然な場所で成長してがん細胞を特徴と大腸癌の同所性マウスモデルは、、高忠実度で人間の病気を複製する。このモデルを確立する2つの手法は、ユニークな長所と短所があります。盲腸壁に細胞懸濁液の注入は、以前にin vitroでの環境中で成長している大腸癌細胞を導入し、おそらく均一である。細胞は培養中のいくつかの継代後の侵襲または転移の可能性を縮小した可能性があります。皮下腫瘍の部分の移植は、生体内で確立されている癌細胞の多くの異種集団を紹介します。しかし、腫瘍は間質細胞が含まれており、頻繁にこのモデル（個人的なコミュニケーション、I.フィドラー、MDアンダーソン）の一貫性に影響を与える可能性壊死部分を持っている。技術的な観点から、私たちの研究室...

<table><tbody><tr><td>細胞培養培地およびコンポーネント</td><td></td><td></td><td>使用する細胞株によって異なる</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水</td><td>BioWhittaker</td><td>17-512F</td><td>他の多くのベンダーからも販売されている</td></tr><tr><td>15 mL遠心チューブ、ポリプロピレン製</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>6ウェルプレート（蓋付き）</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>アイリス鉗子、直型、ギザ付きチップ</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>この器具を1ペア用意することを推奨</td></tr><tr><td>アイリス解剖用鋏、直型、鋭視</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>持針器（レギュラー）</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14109</td><td></td></tr><tr><td>持針器（カストロヴィエホ型）</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14137</td><td></td></tr><tr><td>Cidex Plus</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>7364</td><td>器具は定期的にオートクレーブ滅菌すべきだが、Cidexへの浸漬による滅菌も可能</td></tr><tr><td>6-0 または 7-0 縫合糸</td><td></td><td></td><td>盲腸用。UCSF外科学教室より提供</td></tr><tr><td>3-0 または 4-0 縫合糸</td><td></td><td></td><td>腹壁用。UCSF外科学教室より提供</td></tr><tr><td>麻酔機 / アイソフルラン</td><td>J.A. Baulch and Associates</td><td>3206</td><td>他の多くのベンダーからも販売されている</td></tr><tr><td>ヒートパッド、使い捨て、6&quot; x 6&quot;</td><td>Prism Technologies</td><td>20419</td><td></td></tr><tr><td>テープ、オレンジ色、13 mm x 13 m</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901F</td><td>麻酔下マウスの固定用</td></tr><tr><td>Pro-Cord/コードレスバリカン</td><td>Oster Professional Products</td><td>78997-010</td><td>マウスの被毛の剃毛用</td></tr><tr><td>ベタジン</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>医療用品店でも購入可能</td></tr><tr><td>2 x 2 ガーゼ、3層</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>7635</td><td>医療用品店でも購入可能</td></tr><tr><td>滅菌フィールド、バリア、16&quot; x 29&quot;</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>0905</td><td>医療用品店でも購入可能</td></tr><tr><td>綿棒、6&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-960-3Q</td><td>医療用品店でも購入可能</td></tr><tr><td>注射器、10 cc、ルアーロックチップ</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>注射器、1 cc、結核用、スリップチップ</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>27 1/2 G 針</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>30 G 針</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

大腸癌の同所性マウスモデル

Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

従来の皮下腫瘍モデルでは、大腸癌を研究するための理想的とは言えません。彼らの自然な場所で成長してがん細胞を特徴と大腸癌の同所性マウスモデルは、、高忠実度で人間の病気を複製する。 2つの手法は、このモデルを確立するために使用することができます。両方の手法は類似しており、盲腸の露出のためのマウスの麻酔や開腹を必要とする。一つの技術は盲腸壁に大腸癌の細胞懸濁液の注入を含む。がん細胞が最初に、培養で増殖するときにサブコン収穫し、単一の細胞懸濁液として調製されています。細胞の小音量は漏れを避けるためにゆっくりと注入されます。他のテクニックは、盲腸に皮下腫瘍の一部の移植を含む。以前に確立された皮下大腸の腫瘍を持つマウスを安楽死され、腫瘍は無菌操作を用いて除去される。腫瘍部分は、別のマウスへの移植のための小さな断片に分割されています。移植前に、盲腸壁は軽く腫瘍細胞の浸潤を促進するために破損している。原発腫瘍と肝転移を開発する時間はテクニック、細胞株、および使用されるマウスの種によって異なります。この同所マウスモデルでは、大腸癌の自然な進行を勉強し、大腸癌に対する新しい治療薬をテストするのに便利です。

盲腸に皮下腫瘍の一部の盲腸壁や移植に癌の細胞懸濁液の注入：2つのテクニックは、このモデルを確立するために使用することができます。このモデルでは、大腸癌の自然な進行を勉強し、大腸癌に対する新しい治療薬をテストするのに便利です。

従来の皮下腫瘍モデルは、大腸がんの研究において最適とは言えません。大腸がんのマウス正位移植モデルは、……を特徴としており、

こんにちは。William Sangです。私はスタンフォード大学病理学部のDr.Edgar Engelmanの研究室に所属しています。また、カリフォルニア大学サンフランシスコ校の外科レジデントでもあります。本日は、大腸がんのマウス同所性モデルの作製方法について解説します。このモデルは、大腸がんの自然な進行過程の研究や、大腸がんに対する新規治療薬の検討に有用です。これは、従来皮下に腫瘍を形成させる皮下腫瘍モデルとは対照的な手法です。皮下腫瘍モデルは、皮膚の下で成長する腫瘍細胞の表現型が変化し、進行や転移に至らないことが多いという点で、理想的とは言えません。実際、腫瘍細胞を皮下に植え込むか、あるいは正位（オルソトピック）に植え込むかによって、治療に対する腫瘍の反応は大きく異なる可能性があります。大腸がんの正位マウスモデルを構築するには、2つの手法を用いることができます。一つの手法は、大腸がん細胞懸濁液をSQL壁に注入する方法です。もう一つの手法は、皮下腫瘍の一部を盲腸に移植する方法です。どちらの手法も同様であり、以下の手順を含みます。まず、細胞または腫瘍の調製を行います。2つ目はマウスの準備、開腹術および盲腸の露出。3つ目は細胞の注入または腫瘍の移植、そして4つ目はマウスの腹壁閉鎖と回復についてです。それでは始めていきましょう。本日の処置では、いくつかの異なる器具を使用します。これらは、鉗子、剪刀、通常の持針器、およびCastro Viejo針持針器です。そして、本処置において重要な、あらかじめカットされた滅菌ガーゼを用意しています。大腸がん細胞を培養し、サブコンフルエントの状態になったところで回収します。リン酸緩衝生理食塩水を用いて単一細胞懸濁液を調製し、氷上で保持します。あらかじめ皮下に大腸腫瘍を形成させたマウスを安楽死させます。無菌操作を用いて皮下腫瘍を取り出し、2〜3 mmの断片に分割します。腫瘍片は氷上のリン酸緩衝生理食塩水（PBS）中に保持します。当研究室では、吸入麻酔薬としてイソフルランを使用しています。また、同様の効果を得るために、注射用麻酔薬を使用することも可能です。足指へのピンチ刺激によって麻酔深度を確認します。足指をピンチした際に、逃避反射が認められないことを確認してください。この時点で抗生物質を投与しても構いません。あらかじめ除毛し、麻酔をかけたマウスを適切に配置します。腹部をベタジン溶液で3回清浄し、腹部および手術部位を滅菌的にドレーピングします。皮膚に小さな切開を加えます。腹壁筋を移植し、持ち上げます。腹腔を切開し、ハサミの片方の刃を用いて腹腔内コンテンツを押し除けます。切開線を2～3 cmまで延長します。盲端にある嚢状の盲腸を特定し、体外に露出させます。盲腸をマウスの他の部位から分離します。あらかじめカットした滅菌ガーゼに温 sal

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、非肥満の糖尿病/重症複合免疫不全症(NOD/SCID)マウスにおける結腸直腸癌細胞の進行を研究するために、患者由来の同所異種移植片結腸直腸癌マウスモデルを生成するためのプロトコルについて説明しています。このマウスモデルは、原発腫瘍の成長と転移パターンを理解するのに役立ちます。...

大腸癌のPDOXマウスモデルの生成:マウスモデルにおける大腸癌の進行の研究

このビデオでは、蛍光イメージングを可能にするために、GFPレンチウイルス粒子によって形質導入されたCRCオルガノイドを生成する技術について説明しています。これらのGFP標識オルガノイドを動物モデルに添加すると、腫瘍の浸潤と転移の研究に役立ちます。...

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このビデオでは、大腸がん患者由来異種移植片またはPDXの自然転移マウスモデルを確立するためのプロトコルについて説明しています。これらの異種移植モデルは、ヒトのがんの特徴を部分的に模倣し、浸潤や転移など、ヒトの悪性腫瘍の重要な側面を理解しています。...

自然転移マウスモデル:同所注射された結腸直腸癌細胞の転移能を研究するためのプラットフォーム

このビデオでは、腫瘍が非常に均一である同所性マウスモデルを開発するために、癌細胞のイントレースカル注射の技術について説明しています。したがって、同所性マウスモデルは転移の現実的なシミュレーションを可能にし、腫瘍の成長と播種中の表現型の変化を研究するための貴重なツールを提供します。...

Intracecal腫瘍細胞注射:同所性結腸直腸癌マウスモデルを確立するための癌細胞送達技術

このプロトコルの目標は、マウスの同所性膵臓腫瘍異種移植片に対して動的コントラスト増強磁気共鳴画像法(DCE-MRI)を適用することです。DCE-MRIは、標的組織の微小血管系を非侵襲的に解析する方法であり、新規治療後の腫瘍の血管反応を評価するのに役立ちます。...

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肝臓における大腸転移の高度な動物モデル：イメージング技術および転移性クローンのプロパティ

本発明者らは、腫瘍細胞またはオルガノイドをマウスの盲腸に注入することによる同所性結腸直腸腫瘍の確立およびこのモデルからの循環腫瘍細胞（CTC）のその後の単離について記載する。...

結腸直腸癌モデルマウスにおける循環腫瘍細胞の単離

分節型アデノクロス感染による結腸直腸癌の遺伝子操作されたマウスモデルの確立および高解像度大腸内視鏡によるその監視が提示されている。...

散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル

このプロトコルは、高品位の尿細胞癌細胞または非肥満糖尿病/重度の組み合わせに大腸癌細胞を直腸内注入することにより、患者由来のオルソトピック異種移植片モデルの生成を記述する。ヒト転移性疾患の進行を模倣するリンパ節間質細胞の影響下で原発性腫瘍増殖および自発的転移のための免疫不全(NOD/SCID)マウス。...

ヒト尿路上皮細胞癌および大腸癌腫瘍増殖および自発性転移に対する患者由来の眼科医異所性Xenograft移植片モデル

このプロトコルは免疫不全のマウスの盲腸壁の患者得られた癌細胞の同所性移植を記述する。このモデルは、進行した大腸がんの転移性疾患を再現し、肺および肝臓転移の臨床的に関連するシナリオにおける新しい治療薬の評価を可能にします。...

進行性大腸癌を再現するマウスへの患者由来癌細胞の同所性移植

本研究では、マウスモデルにおける発光性大腸がん細胞の in vivo...

抗腫瘍効果を評価するためのアチミックヌードマウスにおけるヒト結腸直腸癌細胞の皮下注射

学ぶ大腸癌の同所性マウスモデル構築法。盲腸壁への細胞懸濁液注入または皮下腫瘍移植により、自然な進行と転移を再現し、新規治療薬の効果評価に有用なモデルを確立する方法です。

大腸癌の同所性マウスモデル

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