Name: エンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞中大脳動脈を可視化するために頭蓋窓を利用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: 学ぶ 頭蓋窓法によるラット中大脳動脈の可視化技術。側頭骨開窓術で血管反応性を観察し、エンドセリン-1誘発性閉塞モデルで虚血性脳卒中の動態解析に応用する方法を解説します。

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この作品は、アメリカ心臓協会グレーター東南アジアアフィリエイト（09GRNT2060421）、米国医師会からとフロリダ臨床およびトランスレーショナル科学研究所の大学からの補助金によって支えられている。アダムメッカは、NIH / NINDS、NRSA博士号を取得する前の仲間（F30 NS-060335）です。ロバートRegenhardtは高血圧でフロリダ大学学際的なトレーニング·プログラム（T32 HL-083810）から博士号を取得する前のフェローシップの支援を受けた。

このプロトコルは、インスティテューショナルアニマルケアによって承認され、使用フロリダ大学の委員会（動物実験委員会）及び &quot;実験動物の管理と使用に関する指針&quot;（第8版、全米科学アカデミー、2011）に準拠していました。 材料<ol><li>動物：8週齢、雄、手術時に250〜300グラムの重量を量るのSprague Dawleyラット（Charles River農場、ウィルミントン、MA、USA）。 </li><li>麻酔<ol class="lalpha"><li>吸入麻酔システム（VetEquip社、プレザントン、カリフォルニア州、米国） </li><li>イソフルラン麻酔（バクスター薬学、ディアフィールド、イリノイ州、アメリカ） </li></ol></li><li>定位システム（デヴィッド·インスツルメンツKopfは、タハンガ、CA、USA）を<ol class="lalpha"><li>小動物の定位システム</li><li>ラットの非破裂耳バー</li><li>ラット用ガス麻酔ヘッドホルダー</li></ol></li><li>温度調節<ol class="lalpha"><li> BAT-12マイクロプローブ温度計（世界精密機器株式会社、サラソタ、フロリダ州、米国） </li><li> T /ポンプ、TP600サーマルブランケット（Gaymarインダストリーズ社、Orchard Park、ニューヨーク、アメリカ） </li></ol></li><li>手術器具<ol class="lalpha"><li> Metzenbaumはさみ、アイリス鉗子、ブルドッグクランプリトラクター、26ゲージ針ベベル、ボビー焼灼キット（世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、米国）と10μLシリンジ</li><li>マイクロモータードリル（Stoelting、ウッドデール、イリノイ、米国） </li><li> 0.8ミリメートルラウンドドリルいが（Roboz手術器具株式会社、ゲーサーズバーグ、メリーランド州、米国） </li><li>ストルツボン縫合鉗子（ボシュロム社、ロチェスター、NY、米国） </li></ol></li><li>外科用品<ol class="lalpha"><li> 3.0ナイロン縫合糸（オアシス、メタワ、イリノイ、米国） </li><li>綿棒、Puralube眼軟膏（フィッシャー·サイエンティフィック、ピッツバーグ、PA、USA） </li><li>手術のポイントとストリップ（メドトロニックXomed株式会社、ジャクソンビル、フロリダ州、米国） </li><li>電気バリカン（オスター、プロビデンス、ロードアイランド州、米国） </li></ol></lI&gt; <li>化学品<ol class="lalpha"><li>エンドセリン-1（アメリカンペプチド、サニーベール、カリフォルニア州、米国） </li><li>クロルヘキシジン2％（Agrilabs、セントジョセフ、ミズーリ州、米国） </li></ol></li><li>可視化装置<ol class="lalpha"><li>手術用顕微鏡（ザイラー音源と製造、セントルイス、ミズーリ州、米国） </li><li>ソニーハンディカムHDR-SR11（ソニー、港区、東京、日本） </li><li>光ファイバ照明装置（TechniQuip社、リヴァーモア、カリフォルニア州、米国） </li></ol></li><li>血管径の測定<ol class="lalpha"><li> VLCメディアプレーヤー（パリ、フランス） </li><li>画像Jソフトウェア（ImageJの1.42qソフトウェア、米国国立衛生研究所、ベセスダ、MA、USA） </li></ol></li></ol> 1。手術前のステップ<ol><li>手術に先立ち、ラットを水とげっ歯類への無料アクセスを12：12明/暗サイクルで飼育されています。 </li><li>麻酔が誘導室では100％O 2ガスの混合物中のイソフルラン4％で誘導される。 </li><li>カラス<html>頭のnは、電気バリカンで剃毛されています。 </li><li>ラットは、温度制御された操作面の上に横たわって吸収パッド（サーマルブランケット）に発生しやすい位置に配置されており、ヘッドはガス麻酔フェイスマスクの配置で始まる定位装置内に配置されています。 </li><li>次に、耳の棒を挿入して締められている。 </li><li>プロシージャ麻酔中に100％O 2ガス混合物中のイソフルラン2％で維持されます。 </li><li>眼科用潤滑剤軟膏を両眼に適用され、まぶたが外科手術中に目の乾燥を防ぐために閉鎖されています。 </li><li>プローブは、37の定数動物のコア温度を維持するために挿入され直腸温度±0.5℃ </li><li>定位固定装置にしっかりと保持された麻酔したラットの頭で手術領域はクロルヘキシジンと生理食塩水3回を交互に清めです。 </li></ol> 2。プリ頭蓋窓の準備ontent &quot;&gt;前頭蓋ウィンドウを作成するには、ラットは、他の必要なハードウェアの注入によって、任意の実験のために準備されるべきであるし、必要な外科的処置を受ける必要があります。このプロトコルのために、我々が以前にエンドセリン-1（ET-用のガイドカニューレを移植しました1）誘起MCAO、表題の関連資料に示すように、 &quot;ラットにおけるレーザードップラー血流計の指針と虚血性脳卒中のエンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞モデル。&quot; 3。頭蓋窓の作成ガイドカニューレや実験に必要な機器を配置した後、頭蓋窓は直接ストローク手順の間に、中大脳動脈の近位部分を可視化するために作成されます。 <ol><li>まず、はさみ内側開始および横方向に働く側頭筋を覆う皮膚を切開するために使用されます。 </li><li>側頭筋は、電気メスを使用して二等分してから、映像設備に3.0ナイロン縫合糸を使用して退避させる<html>側頭部を安定させ、。 </li><li>それは側頭骨に反射して約3〜4mmの正方形が軌道に尾と頬骨突起の根元に上側頭骨の扁平部分に描かれています。 </li><li>ドリルは、徐々に側頭骨から無料骨の輪郭の一部を切り取るために使用されます。それは硬膜や脳の皮質に損傷を与えることができるため注意がドリルにあまり圧力をかけることを避けるために注意するべきです。 </li><li>滅菌生理食塩水との頻繁なリンスは、手術野の可視化を向上させ、頭蓋骨の過熱を防ぐために行われます。 </li><li>硬膜に関連付けられている血管を破らないようにしながら緩い角から開始し、temoporal骨片を慎重に微ラット歯鉗子を用いて除去する。 </li><li>硬膜はそのまま残されており、残骸は、滅菌生理食塩水を用いて洗い流しています。 </li></ol> 4。大脳動脈狭窄の記録リアルタイム、ET-1誘発MCAOを受けているラットの画像をキャプチャする方法を示すために、10トン &quot;&gt;は、このプロトコルで使用されます。 <ol><li>血管作動性化合物を適用する前に、ベースラインのビデオは、少なくとも1分間記録されなければならない。針が脳実質内に下ろされた後、ET-1誘発MCAOについては、基準値の記録が行われますが、ET-1の注射前に。 </li><li>シリンジポンプは注入のために開始され、1時間または所望のエンドポイントまで記録されます。針は焦点面の乱れを防ぐために録画中の場所に残されます。 </li><li>ラットは、この手順に従って承認されたプロトコルに従って深く麻酔し、安楽死させなければなりません。 </li></ol> 5。画像解析血管径は可視MCAのどの部分を決定することができる。一例として、我々は、ET-1注射前と後の時点で血管径を測定するMCAの1分岐を使用します。 STIビデオからLLフレームはVLCメディアプレーヤー（VideoLANの）を使用して、1分間隔でキャプチャされます。 <ol><li> VLCプレーヤーをインストールして開かれます。 </li><li>ツールは、[設定]を選択して、設定は下の &quot;すべて&quot;に変更され、 &quot;設定の表示。&quot; </li><li> &quot;映像メニュー&quot;が左側のサイドバーに展開され、 &quot;出力モジュール&quot;がその後に展開されます。 &quot;シーン·フィルタは&quot;シーンのビデオフィルタメニューを表示するために選択される。 </li><li> &quot;シーン&quot;は、ファイル名の接頭語のためのボックスに入力されています。 </li><li>ディレクトリパスの接頭辞が定義されています。それでもフレームが保存される場所です。 </li><li>記録比率は依然としてフレームキャプチャの所望の速度に基づいて選択されます。映像は毎秒29フレームでキャプチャされた場合、 &quot;1749&quot;（29フレーム/秒×60秒/分）は1つがまだ1分ごとにフレーム保存するボックスに入力する必要があります。すべての変更が保存されています。 </li><li>目的のビデオは自動的に1分ごとに一度静止フレームを保存するためにVLCプレーヤーで開かれます。 </li><li>血管径は、これらを使用して測定され画像。最初はImageJソフト（NIH）が開かれます。 </li><li>次に、測定することは依然としてフレームはImageJので開かれます。 </li><li> &quot;分析&quot;メニューを選択することによって、 &quot;測定値を設定&quot;から開かれており、すべてのボックスがオフになっています。 </li><li>次に、直線ツールが選択されています。 </li><li>キーボードショートカットの &quot;Ctrl +&quot;は、必要に応じて、回線が血管径を測定する血管経路に垂直に配置されてズームインするために使用されます。 </li><li>最後に、血管の長さは、血管の長さを得るために &quot;分析&quot;メニュー、次に &quot;測定&quot;（Ctrl + M）を選択することによって得られる。 </li><li>このプロセスは、少なくとも3回繰り返し、それぞれの静止フレームで測定された各測定容器で平均化されます。 </li><li>比較は、複数のラットを用いて作製することができるように、各時点での血管径は、ベースラインの血管径に正規化されます。これを行うには、各容器の％ベースラインの直径を計算するために×100％式現在の直径/直径ベースラインを使用しています。 </li></ol>

<ol><li>Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+description+of+a+cranial+window+technique+for+acute+and+chronic+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments.</a> Stroke. 6, 308-317 (1975).</li>
<li>Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+of+cerebral+arterioles+in+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats.</a> Circ. Res. 62, 56-64 (1988).</li>
<li>Regrigny, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+melatonin+on+rat+pial+arteriolar+diameter+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo.</a> Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).</li>
<li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).</li>
</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

それはマイナーな修正4,5で多くの実験のニーズを満たすように変更することができるように要約すると、この頭蓋窓調製技術は、非常に汎用性があります。例えば、我々は正常に頭蓋窓（メッカ、AP、2009年から2011年）を通じて可視化さ大脳動脈に直接焦点を当てるレーザードップラーフローメトリーを使用して、特定のMCAの分岐で脳血流を監視しています。また、硬膜切開と同様の調製は 、in vivo血管反応槽3 内に作成する血管作動性化合物の局所投与で使用することができます。この技法のために故障率を下げるために頭蓋のウィンドウを作成する際、いくつかの要因を考慮する必要がある。これらの要因の多くは、脳動脈の良好な可視を得ることに関連しています。それを覆う硬膜や血管がドリルビットで破壊されないように頭蓋骨切除術を最初に作成するとき、注意しなければなりません。これは最高の達成され滅菌生理食塩水で頻繁に洗浄することにより破片をクリアして、頭蓋骨を冷却する。それが削除されたときに第二に、骨片を静かに持ち上げなければならない。断片は容易に引き離していない場合は、ドリルビットは、より多...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（オプション） </td></tr><tr><td>吸入麻酔システム</td><td> VetEquip株式会社プレザントン、カリフォルニア州、米国</td><td> 901806 </td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン麻酔</td><td>バクスター薬学、ディアフィールド、イリノイ州、アメリカ合衆国</td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td>小動物の定位システム</td><td>デビッド·インスツルメンツKopfは、タハンガ、CA、USA </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td>非破裂耳バー、ラット</td><td>デビッド·インスツルメンツKopfは、タハンガ、CA、USA </td><td> 957 </td><td></td></tr><tr><td>ラットガス麻酔ヘッドホルダー</td><td>デビッド·インスツルメンツKopfは、タハンガ、CA、USA </td><td> 1929 </td><td></td></tr><tr><td> BAT-12マイクロプローブ温度計</td><td>世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国</td><td> BAT-12 </td><tD&gt; </td></tr><tr><td> T /ポンプ、サーマルブランケット</td><td> Gaymarインダストリーズ、オーチャードパーク、ニューヨーク州、米国</td><td> T /ポンプ、TP600 </td><td></td></tr><tr><td> Metzenbaumはさみ</td><td>世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国</td><td> 501254 </td><td></td></tr><tr><td>アイリス鉗子</td><td>世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国</td><td> 15915 </td><td></td></tr><tr><td>ブルドッグクランプリトラクター</td><td>世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国</td><td> 14119-G </td><td></td></tr><tr><td> 10μLシリンジ26-gaugue </td><td>世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国</td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td>ボビー、高温焼灼キット</td><td>世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、アメリカ合衆国</td><td> 500392 </td><td></td></tr><tr><td>ラット歯鉗子0.12 </td><td> Stotz </td><td> E1811 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロモーターのドリル</td><td> Stoelting、ウッドデール、イリノイ、米国</td><td> 51449 </td><td></td></tr><tr><td> 0.8ミリメートルラウンドドリルいが</td><td> Roboz手術器具株式会社、ゲーサーズバーグ、メリーランド州、アメリカ合衆国</td><td> RS-6280C-1 </td><td></td></tr><tr><td>ストルツボン縫合鉗子</td><td>ボシュロム社、ロチェスター、NY、アメリカ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ナイロン縫合糸、サイズ3.0 </td><td>オアシス、メタワ、イリノイ、米国</td><td> MV-663 </td><td></td></tr><tr><td>綿棒</td><td>フィッシャーサイエンティフィック、ピッツバーグ、PA、アメリカ合衆国</td><td> 22-029-488 </td><td></td></tr><tr><td> Puralubeの眼軟膏</td><td>フィッシャーサイエンティフィック、ピッツバーグ、PA、アメリカ合衆国</td><td> NC0138063 </td><td></td></tr><tr><td>電動バリカン</td><td>オスター、米ロードアイランド州プロビデンス、 </td><td> 78005-301 </td><td></td></tr><tr><td> PBS中80μMの濃度に希釈し、ET-1 </td><td>アメリカンペプチド、サニーベール、カリフォルニア州、米国</td><td> 88から1-10A </td><td></td></tr><tr><td>クロルヘキシジン、2％ </td&gt; <td> Agrilabs、セントジョセフ、ミズーリ州、米国</td><td> 1040年、牧師6月6日、NAC番号：10580322 </td><td></td></tr><tr><td>外科用顕微鏡</td><td>ザイラー音源と製造、セントルイス、ミズーリ州、米国</td><td>進化xR6 </td><td></td></tr><tr><td>ソニーハンディカム</td><td>ソニー、港区、東京都</td><td> HDR-SR11 </td><td></td></tr><tr><td>光ファイバー照明</td><td> TechniQuip社、リヴァーモア、カリフォルニア州、アメリカ合衆国</td><td> FO1-150 </td><td></td></tr><tr><td> VLCメディアプレイヤー</td><td> （パリ、フランス） </td><td></td><td></td></tr><tr><td>画像Jソフトウェア</td><td>健康、ベセスダの米国国立衛生研究所、米国マサチューセッツ州</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

エンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞中大脳動脈を可視化するために頭蓋窓を利用

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

頭蓋ウィンドウの作成 ​​は1-3脳の皮質表面上の構造の直接可視化を可能にする方法です。このテクニックは、ラット大脳を覆う多くの場所で行うことができますが、最も簡単に容易にアクセス可能な正面または頭頂骨上クレイニエクトミを作成することにより行われる。最も頻繁に、私たちは近MCAに隣接する脳実質にエンドセリン-1の注入で発生する中大脳動脈血管径の変化を定量化する虚血性脳卒中のエンドセリン-1中大脳動脈閉塞モデルとの組み合わせでこのテクニックを使用している4、5。エンドセリン-1誘発MCAO中にMCAの近位部分を可視化するために、我々は、ラットの頭蓋骨の外側面（ 図1）上の側頭骨を通して頭蓋窓を作成するための技法を使用しています。脳動脈硬無傷または硬膜切開とretraとのいずれかで可視化することができますCTED。最も一般的に、我々は、脳実質への血管収縮ペプチドの送達を伴うエンドセリン-1誘発MCAOので、可視化時に硬膜をそのままにしておく。これは、薬物送達のための可視化容器の真上に硬膜を切開する必要を回避します。このプロトコルは、同様にこの方法に関連する潜在的な落とし穴の多くを回避する方法として、段階的に脳動脈を可視化する頭蓋ウィンドウを作成する方法について説明します。

まだキャプチャされたビデオ·ショーから撮影した画像その後大脳動脈径の変化、ET-1注入が容易にこの頭蓋窓技術（ 図2）を使用して理解することができる。 ET-1を注射後数分以内に、容器が収縮し始めます。最終的には血管が視覚化することが困難になり、脳組織は蒼白になるでしょう。約20分後、ET-1の効果が減少すると血管が徐々に約45分後にベースラインの直径に戻って、拡張するために開始されます。発生し、より明白な血管収縮に加えて、皮質表面は、ET-1投与後青白くなります。必要に応じて校正された顕微鏡レチクルと血管径の絶対変化を計算することが可能である。複数のラットとの間の比較のために、我々は手順中に発生した血管径の相対的な変化を計算します。これらの測定は、ImageJのソフトウェア（NIH）を使用して実行されます。次にRELを表すグラフ時間をかけて血管径でative変化します（ 図3）を構築することができる。 <img src="/files/f...

この記事では、中大脳動脈の近位部分を表示するために時間的な頭蓋骨切除術を使用して頭蓋窓を通してラット大脳動脈を可視化するための方法を説明します（<strong&gt;図1</strong&gt;）。この汎用性の高い方法は、脳動脈の反応性を測定するために、薬物送達の様々な技術と組み合わせることができます<em生体内で&gt;</em&gt;。

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

このビデオプロトコルでは、エンドセリン1誘発性中大脳動脈閉塞中の中大脳動脈を可視化するために、頭蓋窓を利用する方法を実演します。この頭蓋窓の作製では、中大脳動脈の近位部を観察するために側頭部開頭術を行います。頭蓋窓の作製は、脳の皮質表面にある構造を直接可視化できる手法です。この手法はラット脳上の多くの部位で実施可能ですが、アクセスしやすい前頭骨または頭頂骨にC字型の開頭術を行うことで最も容易に実施できます。私たちは多くの場合、この手法を内皮細胞誘発性中大脳動脈閉塞（ET one誘発性MCAO）モデルによる虚血性脳卒中研究と組み合わせて使用してきました。頭蓋窓作成術は、中大脳動脈（MCA）近位部に隣接する脳実質内にET oneを注入した後に生じる血管径の変化を定量化するために行われます。具体的には、ラット頭蓋骨の外側にある側頭骨を通して頭蓋窓を作成する手法を用います。これにより、硬膜を維持したまま、あるいは硬膜を切開・牽引して、脳動脈を可視化することができます。可視化の際は、通常、硬膜を維持したままにします。ET oneを用いたMCAO誘発は、脳実質への血管収縮ペプチドの投与を伴うため、薬剤投与のために可視化された血管の直上の硬膜を切開する必要がありません。このビデオでは、大脳動脈を可視化するための頭蓋窓を段階的に作成する方法と、この手法における一般的な潜在的ピットフォールを回避する方法について説明します。前述のようにガイドカニューレを設置した後、脳卒中処置中に中大脳動脈の近位部を直接可視化するための頭蓋窓を作成できます。まず、図に示すように、はさみを用いて頭皮を切開し、皮膚を牽引して側頭筋を露出させます。電気焼灼器を用いて側頭筋を二分し、側頭骨の鱗状部を可視化するために牽引します。本手順において、側頭骨を十分に露出させることは極めて重要です。焼灼の際は、眼窩を傷つけないよう注意してください。視認性を向上させるため、縫合糸を用いて二分した側頭筋を牽引します。眼窩に隣接し、側頭骨から反転する頬骨突起基部の上の、側頭骨鱗状部に3〜4 mm四方の正方形を描きます。ドリルビットを使用して、この骨部分を切り出します。脳にまでドリルで穴を開けてしまう可能性があるため、圧力をかけすぎないよう注意してください。術野の視認性を高め、頭蓋骨の過熱を防ぐため、滅菌生理食塩水で頻繁に洗浄してください。緩んでいる角の部分から、細いラット歯鉗子を用いて側頭骨の破片を慎重に除去し、硬膜に関連する血管を損傷させないようにしてください。ここでは、endothelial.Oneを注入する前のベースラインにおける中大脳動脈の分枝を確認できます。endothelial.Oneを注入してから数分以内に、中大脳動脈が収縮し始めます。最終的に、分枝の可視化が困難になり、脳組織は蒼白になります。約20分後、内皮由来の作用が減弱し、血管が徐々に拡張し始めます。約45分後にベースラインの直径に戻ります。血管直径を測定するために、内皮由来物質の注入前後の異なる時点において、ビデオから1分間隔で静止画をキャプチャします。VLCメディアプレーヤーを使用し、「ツール」から「設定」を選択し、「設定の表示」を「すべて」に変更します。左側のサイドバーにあるビデオメニューを展開し、出力モジュールを展開します。ファイル名のプレフィックスとして、シーンフィルタータイプに「scene」を選択します。次に、ディレクトリパスを追加してください。次に、記述プロトコルで説明されている通り、ビデオのフレームレートに基づいて静止画キャプチャの記録比率を設定します。最後に、[Save open]をクリックします。これにより、血管径を測定するために、目的のビデオとVLCプレーヤーが1分ごとに静止画を自動的に保存します。まずこれらの画像を使用して、Image Jソフトウェアを開き、測定対象の静止フレームを開きます。「analyze（解析）」から「set measurements（測定項目の設定）」を選択し、すべてのチェックボックスを解除します。直線ツールを選択し、必要に応じて拡大してください。血管径を測定するために、血管の走行に対して垂直にラインを引きます。「analyze」に移動し、「measure」をクリックして血管径を算出します。この操作を、必要とされるすべての画像に対して繰り返します。複数のラットを用いて比較を行うため、各時点における血管径をベースラインの血管径で正規化する必要があります。この操作には、ここに示す計算式を使用してください。要約すると、この頭蓋窓作製法は、軽微な変更を加えることで多くの実験上のニーズに対応できるため、非常に汎用性が高い手法です。例えば、頭蓋窓を通して可視化した脳動脈に直接焦点を当てるレーザードップラー血流画像法を用いることで、中大脳動脈（MCA）の特定の分枝における脳血流のモニタリングに成功しています。さらに、硬膜をそのままにした同様の処置を施し、血管活性化化合物を局所投与することで、in vivo血管反応性バスとして利用することも可能です。この手法の失敗率を下げるためには、頭蓋窓を作成する際にいくつかの要因を考慮する必要があります。これらの要因の多くは、脳動脈の良好な可視化を得ることに関連しています。例えば、C側頭窓の開頭を行う際は、ドリルベッドによって硬膜やその上の血管を損傷させないよう注意が必要です。これは、滅菌生理食塩水で頻繁に洗浄し、破片を除去して頭蓋骨を冷却することで最適に達成されます。このビデオが、頭蓋窓を利用した実験の計画に役立ち、また本手技において起こりうる一般的な失敗を避ける一助となることを願っています。

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Medicine

医学

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ラット中大脳動脈の血管縫合閉塞による局所脳虚血モデル

我々はビデオで腔内モノフィラメントを使用して成体マウスの中大脳動脈閉塞を製造する方法を示しています。我々はまた、2,3,5 -...

中大脳動脈閉塞のマウスモデル

このビデオは、高齢ラットの総頸動脈またはCCA結紮を使用して、虚血性脳卒中をモデル化するために、永久遠位中大脳動脈閉塞術(MCAO)を実行する手順を示しています。これにより、脳への血流が遮断され、ニューロン死につながり、脳卒中のメカニズムと潜在的な治療法を研究するためのモデルが生成されます。...

ラットモデルにおける中大脳および総頸動脈閉塞による虚血の誘導

脳虚血の動物モデルは、ストロークの人間の状態をシミュレートするために開発されてきた。このプロトコルは、ラットの虚血性脳卒中のエンドセリン-1（ET-1）誘発中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルについて説明します。加えて、重要な考慮事項、利点、およびこのモデルの欠点が議論されている。...

ラットにおけるレーザードップラー血流計の指針と虚血性脳卒中のエンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞モデル

脳血流モニタリングは虚血性脳梗塞モデルの精度を向上することが実証されている。技術的な問題は、多くの場合、脳血管研究のためのこの必要不可欠なツールの使用を制限します。このビデオでは、最適化されたシステムは、ラットにおいて腔内中大脳動脈閉塞時の単一またはマルチサイトの血行動態モニタリングを得ることが示されている。...

腔内中大脳動脈閉塞のラット脳卒中モデルにおける脳血流モニタリングのための最適化されたシステム

私たちは、齧歯類の主要脳血管の閉塞のための永久的な再現性の高い方法を記述します。この技術は、非常に少ない周損傷、最小限の血液損失、長期生存率が高いと、ヒト臨床人口に見合った一貫性梗塞体積を達成することができる。...

永久的な脳血管閉塞<em&gt;経由</em&gt;ダブルリガチャーと離断

脳卒中の病態生理学を理解するためには、信頼性のあるモデルを使用することが重要です。この論文は、マウスにおいて最も頻繁に使用される脳卒中モデルのいずれかを説明する、中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルと呼ばれる再潅流と（また腔内フィラメントまたは縫合モデルと呼ばれます）。...

マウスの中大脳動脈閉塞再灌流誘発性の脳卒中のための外科的アプローチ

遠位中大脳動脈の分岐（MCAO）の外科的閉塞は実験的ストローク研究で頻繁に使用されるモデルです。この原稿は、マウスの縦生体顕微鏡検査のための機会を提供しています横頭蓋窓の挿入と組み合わせて永久にMCAoの基本的な手法について説明します。...

横慢性頭蓋窓の準備を有効インビボマウスの遠位中大脳動脈閉塞後に観測

このプロトコルは、中型の梗塞と優れた生存率を持つユニークなマウスストロークモデルを示しています。このモデルにより、脳卒中前臨床研究者は虚血期間を延長し、高齢マウスを使用し、長期的な機能的転帰を評価することができます。...

高齢マウスの脳卒中転帰を研究するための修正経頭蓋中大脳動脈閉塞モデル

このプロトコルは中間の大脳の動脈のintraluminal閉塞によってマウスの一時的な焦点の大脳の虚血のモデルを記述する。さらに、磁気共鳴画像法と行動テストを使用した結果評価の例が示されています。...

脳卒中の一過性中大脳動脈閉塞モデル

本研究の目的は、ラットにおける頭蓋切除術と選択的中大脳動脈閉塞を恒久的かつ選択的に行う再現可能な方法を確立し、運動記憶および空間記憶障害の実験研究に応用することでした。...

ラットにおける中脳動脈の選択的かつ永久的な閉塞:運動記憶および空間記憶障害の研究における実験的アプローチ

学ぶ 頭蓋窓法によるラット中大脳動脈の可視化技術。側頭骨開窓術で血管反応性を観察し、エンドセリン-1誘発性閉塞モデルで虚血性脳卒中の動態解析に応用する方法を解説します。

エンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞中大脳動脈を可視化するために頭蓋窓を利用

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