Name: ファージディスプレイされた合成抗体ライブラリーから、スケーラブルな高スループットの選択 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 55 s
Description: 学ぶファージディスプレイを用いた高スループット抗体選択法。多数の抗原に対して並列で高親和性Fabフラグメントを単離し、免疫学的研究やタンパク質解析に有用な抗体を効率的に生成するスケーラブルな手法です。

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組換え抗体ネットワーク抗体選択および特性パイプラインとロボットの選択プラットフォームの資金調達購入のためのイノベーションのためのカナダの財団の開発に資金を提供するためのタンパク質捕獲試薬のプログラム-私たちは、NIHの共通基金を承認したいと思います。

<ol><li>Winter, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Man-made+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Man-made antibodies.</a> Nature. 349, 293-299 (1991).</li>
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著者らは、開示することは何もない。

体外抗体の選択で行う場合、選択成功の二つの主要な決定の際、選択するための、よく折り畳まれた抗原標的の1）分離と高機能の多様化抗体ライブラリの2）利用可能である。多くの場合、十分に折り畳まれた、全長タンパク質の十分な量の利用可能性を制限することができる。この制限を克服する1つのアプローチは、適切な親和性タグを細菌発現ベクターへの挿入のための生物情報分析部22から識別され、合成されたドメインを使用することである。 、溶解度を増加させる精製を容易にし、不安定なドメインを安定化させるためのバイオテクノロジー用途に用いられているタグには様々なものがある。11、任意の所望の挿入配列は、汎用性の高い抗原生成プラットフォームを可能に仮想的に合成する能力が。 GSTタグ付き形式が一般的ですが、成功した結果が、以前にされているヘキサヒスチジンは、Fc、ハロ、マルトース結合タンパク質との部位特異的ビオチン化タグを使用して得られ、それは無数の他のアフィニティータグは、同様のプラットフォームで使用するために最適化することがで...

ポストゲノム時代の開始と、特徴づけるおよびタンパク質を調節する高品質の結合試薬の利用可能性は、新たな研究および治療の道を開くことが不可欠である。抗体は、基礎研究および診断ツールおよび潜在的な治療薬として、学術および産業研究者の両方に重要であり続ける。当然のことながら、カスタム抗体を生成するために、従来のハイブリドーマ技術に依存してそのほとんどが契約抗体開発企業の印象的な成長があった。それにもかかわらず、ファージディスプレイ抗体ライブラリーを用いたin vitroの選択は、従来の技術では限界が1、2に直面することができますユニークな利点と成功を提供することができる強力な代替技術になりつつある。 研究ツールとして、高品質の抗体についてのかなりの需要に照らして、再生可能な抗体を生成するための2つの主要な課題は、1）選択スループットおよび2）抗原avはあるailability。グループの数は、現在のスループットおよび抗体認識の速度を増加させることを目的とインビトロ選択パイプに記載されている。これらの説明は、詳細完全長ビーズベース6,8-またはプレートベース3,4抗原固定化スキームのいずれかを使用して、3,4、または構造的に関連するドメイン5,6,7を標的とするいずれかの際に選択することを含む実行可能な種々のアプローチを。さらに、遺伝子合成技術9の成長採用が合理的に費用効果と潜在的に精製された、完全長の抗原の十分な量を得ることが困難を緩和することができ、特に、単離されたドメインから、体系的抗原の生成を行った。タンデムに二つの技術を用いて、自己完結型のスケーラブルな抗原生成および抗体選択パイプラインは、発現される抗原ドメインの大きなセットのための抗体の並列単離を可能にし、茶のための試薬の開発を容易にするよう考案された構造的または機能的に関連するタンパク質の全体のクラスをracterizing。 この目的、表現可能な抗原ドメイン、遺伝子合成のインシリコ同定カップル統合されたパイプラインに向けて、抗原と拡張性のファージディスプレイされた抗体の選択のハイスループット細菌発現が開発されている。このパイプラインは、（ライセンスまたは材料移転契約を通じて、ますます利用できる抗体ライブラリを含む）は、ほとんどの生命科学研究室が利用できる唯一の​​基本的なインフラを必要としますが、工業規模での使用のためにも、自動化に適している。このプロトコルを使用して、親和性タグ化抗原ドメインの数百を生成することが可能であり、日常的には、これらの抗原の多くに非常に特異的な抗体断片を単離する。 ファージディスプレイ技術は、Fab、scFvは、自律のFvドメインであり、aを含む組換えアフィニティ試薬のさまざまな形式で実証互換性を示している小さ ​​な「代替フレームワーク」（設計されたアンキリンリピートタンパク質（ダルピン）、フィブロネクチン（FN）、リポカリンドメインと10以上）の成長配列。それは、これらの方法は、ライブラリーの他のタイプに適合させることができると推測されるが、議論は、Fab抗体フラグメントの単離この実施例では制限されている。この技術を用い、小さな低ナノモル親和性を有するFabを、全長タンパク質に結合し、そのような免疫蛍光法などのイムノアッセイにおいて機能的である多くはRNA結合タンパク質などが正常に選択された転写因子ドメイン、SH2ドメイン、を含むタンパク質ドメインをタグ付け、免疫沈降および免疫組織化学。重要なのは細菌の生産の提供を通じて、組換え結合クローンは、完全に再生可能であると表現構築から再生成することができ、したがって、厳密なクローンの検証の費用を正当化、一貫性、再現性と費用対効果を増加させた。 このPROTでocol及び添付ビデオは、固定化抗原ドメインを使用してファージディスプレイライブラリーからの抗体選択のための基本的な方法が実証されている。この特定の方法はまた、首尾よく使用されてきた13,14,2他のタグ11,12,13および選択フォーマットが、マイクロウェルプレートに受動的吸着により固定化されたGSTタグ付きタンパク質ドメインを使用する。特定と検証のために特別に濃縮されたクローン性抗体を単離することを目的とした選択パラメータの並列モニタリングと選択の設定や行動のための重要な考慮事項が詳述されている。

<table><tbody><tr><td>材料</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ニューブランズウィック Innova44 スタッカブルインキュベーターシェーカー</td><td>エッペンドルフ</td><td>M1282-0004</td><td></td></tr><tr><td>リクビデーター 96チャンネル 手動ベンチトップピペッティングシステム</td><td>アナケム株式会社</td><td>LIQ-96-200</td><td></td></tr><tr><td>マイクロプレートシェーカー</td><td>VWR</td><td>12620-926</td><td></td></tr><tr><td>サーモサイエンティフィック ソルバル ST-40 ベンチトップ遠心分離機</td><td>サーモ製品</td><td></td><td></td>75004525</tr><tr><td>ELx405 セレクト ディープウェル マイクロプレート ウォッシャー</td><td>Biotek</td><td>ELX405USD</td><td></td></tr><tr><td>カスタム ハイスループット自動ファージ選択ロボット</td><td>S&P Robotics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>プラスチック円錐形ファルコンチューブ:50 ml</td><td>VWR</td><td>21008-178</td><td></td></tr><tr><td>プラスチック円錐形ファルコンチューブ:15 ml</td><td>VWR</td><td>89039-668</td><td></td></tr><tr><td>Axygen 1.7 ml 微量遠心チューブ</td><td>コーニング</td><td>MCT-175-L-C</td><td></td></tr><tr><td>96ウェル/384ウェル マキシソーププレート</td><td>シグマ</td><td>M9410-1CS</td><td></td></tr><tr><td>コーニング 96ウェル V-ボトムディープウェルブロック</td><td>コーニング</td><td>3960</td><td></td></tr><tr><td>Axygenミニチューブ96ウェル滅菌マイクロプレートブルーボックス</td><td>コーニング</td><td>AXY-MTS-06-C-R-S</td><td></td></tr><tr><td>通気性粘着プレートシーリングフィルム</td><td>VWR</td><td>60941-084</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>試薬 <tr><td></td><td>会社名 カタログ</td><td>番号</td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレングリコール</td><td>バイオショップ</td><td>PEG800.1</td><td></td></tr><tr><td>酵母エキス</td><td>Bioshop</td><td>YEX401.1</td><td></td></tr><tr><td>バイオトリプトン</td><td>Bioshop</td><td>TRP402.1</td><td></td></tr><tr><td>N-Zアミン</td><td>Σ</td><td>C7290</td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td>Σ</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>ラクトース</td><td>Bioshop</td><td>LAC234</td><td></td></tr><tr><td>グリセロール</td><td>Bioshop</td><td>GLY001.500</td><td></td></tr><tr><td>カルベニシリン&nbsp;</td><td>Bioshop</td><td>CAR544.10</td><td></td></tr><tr><td>kanamycin</td><td>Bioshop</td><td>KAN201.25</td><td></td></tr><tr><td>テトラサイクリン&nbsp;</td><td>Bioshop</td><td>TET701.25</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Bioshop</td><td>TWN510.500</td><td></td></tr><tr><td>一塩基性リン酸カリウム</td><td>Bioshop</td><td>PPM302.1</td><td></td></tr><tr><td>二塩基性リン酸ナトリウム</td><td>Anachemia</td><td>84486-440</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>Bioshop</td><td>SOD001.10</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td></td><td>Bioshop POC308.1</td><td></td></tr><tr><td>塩化カルシウム</td><td>Bioshop</td><td>CCL302.500</td><td></td></tr><tr><td>マグネシウム硫酸塩</td><td>EMD</td><td>MX0070-1</td><td></td></tr><tr><td>塩化マグネシウム</td><td>Bioshop</td><td>MAG510.500</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>Amresco</td><td>0621-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Na2SO4</td><td>Bioshop</td><td>SOS513.500</td><td></td></tr><tr><td>寒天</td><td>Bioshop</td><td>AGR001.500</td><td></td></tr><tr><td>SybrSafe DNAゲル染色</td><td>Invitrogen</td><td>S33102</td><td></td></tr><tr><td>リン酸</td><td>Acros Organics 201140010</td><td></td><td></td></tr><tr><td>リゾチーム</td><td>Bioshop</td><td>LYS702.25</td><td></td></tr><tr><td>ベンゾナーゼ</td><td>Novagen</td><td>71205</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td></td><td>Bioshop</td><td>TRX506.500</td></tr><tr><td>プロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤</td><td>ロシュ</td><td>11 836 170 001</td><td></td></tr><tr><td>Ni-NTA樹脂&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>1018240</td><td></td></tr><tr><td>1,000倍ヘルパーファージ (M13K07) ストック (1013 ファージ/ml)</td><td>NEB</td><td>N0315S</td><td></td></tr><tr><td>HRP 標識 M13 特異的抗体 (抗 M13-HRP)。</td><td>GE Healthcare</td><td>27-9241-01</td><td></td></tr><tr><td>TMB基質:等量のTMBとH2O2ペルオキシダーゼ基質を混合します&nbsp;</td><td>KPL</td><td>50-76-00</td><td></td></tr><tr><td>dNTPs</td><td>Biobasic</td><td>DD0056</td><td></td></tr><tr><td>Taq ポリメラーゼ</td><td>Genscript</td><td>E00007</td><td></td></tr><tr><td>Exonuclease</td><td>GE Healthcare&nbsp;</td><td>EZ0073X-EZ</td><td></td></tr><tr><td>エビアルカリホスファターゼ</td><td>GE ヘルスケア</td><td>E70092Z-EZ</td><td></td></tr></tbody></table>

ファージディスプレイされた合成抗体ライブラリーから、スケーラブルな高スループットの選択

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

両方の基礎および臨床研究用途のニーズを満たす抗体に対する要求が高く、劇的に、将来的に増加する。しかし、伝統的なモノクローナル技術は、このタスクまでだけではないことは明らかである。これは、プロテオームのアクセス可能なすべての要素を、高品質で再生可能な親和性試薬の需要を満たすために別の方法が開発された。そのために、ファージディスプレイされた合成抗体ライブラリーからの選択を行うためのハイスループット法は、多様な抗原を伴う用途のために考案されており、迅速なスループットと成功のために最適化された。ここで、プロトコルは、ビデオデモを手動96チャンネル液体ハンドラーまたは自動ロボットシステムのいずれかを使用してターゲットの数百に対して高い多様性ライブラリからのFabファージクローンの並列選択を示して詳細に説明する。このプロトコルを使用して、1人のユーザーが抗原の数百を生成することができ、並行して、それらに対する抗体を選択して、6〜8週間以内に結合する抗体を検証する。強調表示は、i）生存抗原フォーマット、ii）の事前選択抗原の特徴付け、iii）の特異的かつ高親和性クローンの選択に影響を与える重要なステップが、監視の選択の有効性および早期の抗体クローンの特徴付けのiv）の方法。このアプローチでは、我々は、シングルパス膜受容体を含む多くのターゲットクラスに分泌されるタンパク質ホルモン、及びマルチドメイン細胞内タンパク質を合成抗体断片（Fabを）取得している。これらの断片は、容易に完全長抗体に変換され、高い親和性および特異性を示すことが確認されている。さらに、それらは、ウエスタンブロッティング、ELISA、細胞の免疫蛍光、免疫沈降、および関連アッセイを含む標準的な免疫アッセイの様々な機能的であることが実証されている。この方法は、抗体の発見を加速し、最終的に目標Oの実現に近づく私たちをもたらすでしょうfのプロテオームの再生、高品質な抗体を生成する。

本明細書中に記載されるプロトコルは、並行して、コンビナトリアルファージディスプレイされたFabライブラリーからstructurally-と機能的に関連する抗原ドメインの両方の様々な抗体断片を単離するために使用されている。抗原の可用性に関連する問題は、抗体の選択23に適している発現可能な抗原ドメインのインシリコ同定によって、多くの場合、回避することができる。 （ 図1）は、同じ実験室内抗体選択に抗原発現を結合することにより、選択に重要な抗原パラメータをより容易に制御することができる統合されたパイプラインを構築することが可能となる。ほとんどの場合、ドメインの境界を注意深く決定は、抗体選択における使用の成功のために96または24ウェルディープウェルプレート（ 図2）において、ハイスループット表現から十分に純粋な抗原の十分量の発現および単離を可能にする。相次ぐ中、選択プロセスのラウンドは、抗原に特異的に結合溶出したファージの濃度およびファージの濃縮は、ELISAアッセイのいずれかにおいて、ファージ滴定（ 図3）またはファー...

この方法は、同時に、抗原の何百に対するファージディスプレイコンビナトリアル合成抗体ライブラリーから、スケーラブルで高スループットの選択を行うための視覚的な伴奏して説明する。このパラレルアプローチを使用して、我々は、標準的な免疫アッセイにおいて機能的に多様な抗原に対する高い親和性および特異性を示す抗体断片を単離した。

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

このスケールアップ可能な手順の目的は、数百の抗原標的ドメインに対する並行的な選択を可能にするハイスループットアプローチを用いて、ファージディスプレイライブラリーから特異的かつ高親和性のfabファージクローンを単離することです。これはまず、精製した抗原ドメインをマイクロウェルプレートに固定化することで達成されます。次のステップでは、連続的な選択ラウンドを通じて、プレートに固定化された抗原に特異的に結合するfabファージクローンを、曝露、捕捉、遊離、および増幅させます。このプロセスにおいて、選択の有効性は各ステップでプール法を用いてモニタリングされます。最終ステップでは、単離されたFabクローンの特異性、親和性、および/または活性を評価します。最終的に、多数の抗原に対する特異性の高い高親和性Fabフラグメントが並行して単離されるため、構造的または機能的に関連するタンパク質クラス全体の解析に有用な抗体を生成することが可能になります。本法の重要性は、アカデミアおよび産業界のいずれの研究室においても、従来の抗体作製技術の限界を克服し、その速度を加速させることができる代替案を提示している点にあります。ハイブリドーマ法などの従来の抗体作製技術に対する本手法の主な利点は、動物を使用する必要がないことです。毒性を持つタンパク質や非免疫原性タンパク質を含む、事実上あらゆるタンパク質に適用可能です。後述するように、この手法は容易に並列化でき、最終的に、特定の抗原に特異的な高親和性抗体をコードする再生可能な組換えDNAを、わずか6〜8週間で得ることができ、機能的で標準的な免疫測定法を確立できます。生物医学研究における抗体の重要性を鑑み、我々は、規模や利用可能なリソースが異なるあらゆる研究室にとってのアクセシビリティを維持しつつ、抗原生成および抗体の選抜・同定を高スループットなアプローチに適応およびスケールアップさせる機会を見出しました。ファージ選抜を実施する日の朝に、T1ファージ耐性大腸菌のシングルコロニーをピックアップします。テトラサイクリン（50 µg/mL）を含む2 YT培地 1 mLに添加します。2.5 cmのオービタルシェーカーを用い、200 RPMで振盪しながらコロニーを培養します。培養液の増殖が視認できたら、細胞をテトラサイクリンを補充した必要量の培地に移します。選択ウェル1つあたり100 µL、または96ウェルプレート1枚あたり約10 mLの量を用意する必要があります。培養液を分注し、カーボン、ペニシリン、カナマイシンを添加した培地で増殖させます。これらの培養により、増幅に使用する細胞への事前感染を防ぎます。培養液の595ナノメートルにおける光学的吸光度が0.4から0.8に達したとき。5時間から7時間後、細胞を抗原プレートに適用できる状態になります。本プロトコルにおいてライブラリの目的のカバレッジを確保するためには、十分な数の複製抗原プレートおよび非特異的コントロールタンパク質プレートを準備してください。表示されている計算の詳細については、テキストプロトコルに記載されています。標的タンパク質および非特異的コントロールタンパク質を一夜浸漬して固定した後、プレートからタンパク質溶液を除去します。200 µLのブロッキングバッファーを加え、振盪させながら1時間ブロッキングを行い、細胞の培養が進んでいる間に、ファージライブラリーを添加する前にプレートを4回洗浄します。ファージ選別当日、非特異的またはタグ特異的に結合するライブラリ提示FABクローンファージを事前に除去するため、100 µLのファージライブラリをネガティブセレクションプレートに移し、追加のネガティブセレクションを行います。可溶性アフィニティータグを過剰に添加して、タグ結合ファージを除去します。具体的には、それぞれに最終濃度10 µMとなる可溶性GSTを添加します。その後、プレートを室温のシェーカーで1〜2時間インキュベートします。標的タンパク質プレートを調製するには、プレートからタンパク質溶液を吸引し、200 µLのブロッキングバッファーを加えて、振盪しながら1時間ブロッキングを行い、ファージライブラリーを加える前に4回洗浄します。インキュベーション後、プレートからファージ上清を回収します。96チャンネル液体ハンドリングシステムを用いて、ファージ上清を抗原コーティング済みプレートに分注します。次に、プレートを室温のシェーカーで1〜2時間インキュベートします。インキュベート後、PTバッファーを用いてウェルを8〜15回洗浄し、未結合のファージを除去します。これは手動または自動プレートウォッシャーを用いて行うことができます。その後、細胞と抗原プレートの準備が整った時点で、細胞を添加する直前に余分な洗浄バッファーをすべて取り除きます。各ウェルに100 µLの増殖細胞を添加してファージを溶出させ、プレートを37 °Cで30分間インキュベートします。最初の数回のセレクションでは、有意な濃縮は得られないと考えられますが、出力ファージタイターを定量することで、セレクションを成功させるために必要な最低限のファージ濃度が確保されているかを確認できます。これを行うには、ヘルパーファージを添加する前に細胞の一部を分取し、細胞の段階希釈液を調製して抗生物質添加アガープレートにプレートすることで、ファージ出力をより正確に算出できます。30分間インキュベートした後、各ウェルにM 13 K oh sevenヘルパーファージを添加し、濃度を10 billion colony forming units per milliliterにします。プレートを、今度は200 RPMで振盪しながらさらに45分間インキュベートします。次に、細胞を、1ウェルあたり1.2 mLの補完済み2YT培地を含むV底の96ウェルディープウェルブロックに転移させます。ディープウェルプレートを37 °Cで、200 RPMで振盪しながら翌日まで一晩インキュベートします。プレートを4,000 ×gで15分間、4 °Cで遠心分離し、細菌をペレット化します。次に、各リプリケートプレートから、ファージを含む同量の超上清をミニチューブに移します。次回の選択ラウンドのインプットとして使用する96ウェルマイクロプレート（ブルーボックス）のプールされたファージに、10 × PBTを1/10量加え、混合して中和します。次に、ライブラリーからの選別プロセスを繰り返します。前回の選別ラウンドで増幅させたファージを用い、プレクリアランスおよび抗原ファージのインキュベーションを3〜4回行います。これを、前述のライブラリープレクリアランスおよび抗原ファージインキュベーションの手順に従い、2 µg/mLの抗原またはコントロールタンパク質でコーティングしたELISAマイクロウェルプレートを用いて、非特異的コントロールタンパク質の結合と比較して標的結合の濃縮が観察されるまで繰り返します。その後、抗原およびコントロールタンパク質でコーティングしたプレートを前述と同様にブロッキングおよび洗浄します。希釈したファージ上清100 µLをウェルに添加し、室温で15分間振とうしながらインキュベートします。インキュベーション後、PTバッファーでプレートを8回洗浄します。洗浄後、1:5,000にPBTで希釈したanti M 13 HRP抗体を各ウェルに100 µLずつ添加し、抗体が抗原結合ファージに結合するまで30分間インキュベートします。次に、プレートをPTバッファーで6回、さらにPBSで2回洗浄します。1:1に混合したTMB基質を調製し、各ウェルに100 µLずつ適用します。これを5～15分間反応させ、著しい色調変化が見られた時点で反応を停止させます。1 M リン酸を100 µL添加して反応を停止させます。次に、ウェルの吸光度を450 nmで測定し、濃縮後の標的結合シグナルをコントロールタンパク質の結合シグナルと比較します。個々のクローンは、ファージのシーケンシング、遊離Fabに結合したファージのDNA変換、およびプロトコルの本文で説明されているクローナルFabuLisaを用いた標的への直接結合の評価により、単離および特性解析が可能です。より高いスループットが求められる研究室向けに、本手法はスケールアップおよび自動化が可能です。この目的を達成するため、ブロッキング、ファージの結合、および溶出などの手順のあらゆる側面を自動化し、選別能力を拡大できるカスタムロボティクスが開発されています。抗体選別に使用する抗原を得るための一つのアプローチとして、合成遺伝子技術を用いて単離タンパク質ドメインの発現用コンストラクトを取得する方法があります。ほとんどの場合、これにより、選択に十分な純度と量を持つ精製抗原の高スループットな発現および単離が可能になります。選択プロセスの連続的なラウンドにおいて、溶出されたファージ濃度および抗原に特異的に結合したファージの濃縮度は、前述のようなファージタイトレーションまたはファージプールを用いてモニタリングされました。ELAアッセイにおいて、結合比が2を超えている場合は、一般に特異的結合クローンの存在を示します。逆に、比率が低い場合は、セレクション失敗の原因を特定するのに役立ちます。比色アミノ酸アッセイを用いてクローンの結合性を評価することで、固定化抗原に対するfabファージまたはfabの結合を、陰性対照タンパク質への結合と比較することができ、これにより、ロボット液体ハンドリングユニットを用いてセレクションのスケールアップや自動化を行う際の特異性の指標を得ることが可能です。吸光クロモフォアを使用することで、流路内の特定のチャネルの詰まりやシールの破損による分注量の不足を検知でき、洗浄手順の最適化におけるトラブルシューティングに役立ちます。また、結合することが分かっているクローンを使用することで、洗浄中にバックグラウンドの結合を除去しつつ、標的への結合が維持されていることを確認できます。さらに、効果的な除染プロトコルを遵守することで、連続した選択ラウンド間や異なる選択手順間でのクロスコンタミネーションを防ぐことができます。推奨される追加のトラブルシューティング・パラメータについては、テキストプロトコルで確認してください。この手法を工業的に応用できるようスケールアップすることで、高親和性の再生可能な抗体の選択と同定を加速させ、最終的に最大限のプロテオームカバレッジを達成し、構造的または機能的に関連するタンパク質の全クラスを研究者が探索できるようになることを期待しています。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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学ぶファージディスプレイを用いた高スループット抗体選択法。多数の抗原に対して並列で高親和性Fabフラグメントを単離し、免疫学的研究やタンパク質解析に有用な抗体を効率的に生成するスケーラブルな手法です。

ファージディスプレイされた合成抗体ライブラリーから、スケーラブルな高スループットの選択

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