Name: 加水分解性架橋剤を介してアデノウイルスベクターテザーを使用した金属ステント表面からの血管の遺伝子導入 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 30 s
Description: 学ぶラットの総頸動脈への遺伝子放出ステント移植とバイオルミネセンスイメージングによる血管組織のトランスジェン発現評価法。加水分解性架橋剤を用いたアデノウイルスベクターの効率的な遺伝子導入技術を習得できます。

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</ol>

この論文で提示されたプロトコルの開発と研究は、米国心臓協会の科学者開発助成金(IF 0735110NおよびMC 10SDG4020003)、米国国立心肺血液研究所の助成金HL 72108(RJL)、および米国国立心肺血液研究所T32 007915(SPF)によって部分的に支援されました。血管形成術カテーテルは、NuMED (ニューヨーク州ホプキントン) から寄贈されました。著者らは、スーザン・カーンズ女史の秘書支援に感謝したいと思います。

<html>提示されたプロトコルは、ステンレス鋼表面をコートレスするアデノウイルスベクターの可逆的結合によって達成基板を介した遺伝子送達のための運用方法について説明します。血管再狭窄のステントベースの遺伝子治療の特定の目的のために開発されているが、この技術は、生体材料、生物医学的インプラントおよび遺伝子治療の領域ではるかに広い用途を有する。 提示の研究はもっぱら原型金属基材としてステンレス鋼を利用しているが、PABTは、同等の親和性を有するコバルト/クロムおよびニチノールなどの他の金属合金と結合する（公開されていない）。金属とPABTの無差別相互作用が大きく、この技術31の可能性の生物医学アプリケーションの数を拡大する。また、HC-テザー遺伝子ベクターの使用は、材料表面上にチオールインストールする他の方法を必要とするにもかかわらず、生体材料の他のタイプの実行可能である。 ontent広告遺伝子ベクターは、多くのヒト細胞型および組織中で堅牢な伝達を実現する一方で&quot;&gt;、その臨床的意義は、 アデノウイルス 4</s...

治療法として、遺伝子治療の有効性は、遺伝子治療ベクター1,2の乏しいターゲティング能力によって妨げられる。標的位置におけるトランスジーン発現の準治療レベルの適切なターゲティングの結果の欠如とは、ベクトルおよび符号化された治療用生成物4の両方に対する免疫応答をマウントするための担当者を含む非標的器官3へのベクターの広範な普及につながる5。一つの可能​​性は、形質導入の混乱を相殺し、標的化血液やリンパ液を介してそれらの自由普及を妨げる形で所望の位置に遺伝子ベクターを導入することで促進することを意味する。典型的には、このような努力は、物理的に目を捕捉することによって注射部位に一過性に維持遺伝子ベクターが可能であるフィブリン、コラーゲンまたはヒアルロン酸ハイドロゲルマトリックス6-10と混合したウイルスまたは非ウイルスベクターのいずれかを含む、局所的に注射可能な送達システムに依存しているポリマーネットワーク内のem。 ローカライズされた遺伝子治療のための別の一般的に受け入れられているパラダイムは、移植された補綴装置11,12の表面に遺伝子ベクターの固定化を利用する。常設医療用インプラント（血管、気管支、泌尿器及び胃腸ステント、ペースメーカー、人工関節、外科や婦人科のメッシュなどが 。）の患者13数千万で毎年使用されている。一般的に有効であるが、これらのデバイスは、不十分な現在の医療行為のために14〜17によって制御される合併症を起こしやすい。移植可能な人工デバイスは、ローカライズされた遺伝子治療の治療のためのプロキシ·プラットフォームとして機能するユニークな機会を提示する。薬物動態学的見地、インプラント/組織界面に遺伝子ベクターの高い局所濃度を両立し、theiの動態を遅らせる遺伝子ベクターの結果、比較的低い入力用量の医療用インプラントの表面誘導体からこの場所からのR撤廃する。長引く住宅目標とされた細胞集団による強化された取り込みの結果として、ベクトル·固定化は、遺伝子ベクターの拡散を最小限に抑えることができます。したがって非標的組織の不慮の接種が低減される。 （また、基板を介した遺伝子送達または固相遺伝子送達と呼ぶ）移植可能な生体材料上の遺伝子ベクターの表面テザリングは、両方の特定の（抗原-抗体18-20、アビジン-ビオチン21,22）を用いた細胞培養や動物実験で実装されました非特異的な23〜26（電荷、ファンデルワールス）相互作用。表面に過度に強い結合が標的細胞によりベクター内在化を排除するので、移植された装置の表面へのベクターの共有結合は、以前に非機能として考えられてきた。最近、この制限は、tetオペレーターとして使用自発的に加水分解性架橋剤の使用によって克服することができることが実証されたアデノウイルスベクター27,28のステントおよびキャプシドタンパク質の修飾された金属表面との間に彼女。さらに、 インビトロおよびインビボでの導入遺伝子発現のベクター放出速度および時間経過は、加水分解28の異なる動態を示す加水分解性架橋剤を用いて調節することができる。 本研究は、活性化金属表面にアデノウイルスベクターの可逆的共有結合のための詳細なプロトコルを提供し、ステント血管形成のラット頸動脈モデルにおいて培養平滑筋細胞および内皮細胞およびin vivoでのin vitroでのその後の伝達事象を研究するための有用な実験設定を導入。

<table><tbody><tr><td>316ステンレス鋼メッシュディスク</td><td>Electon Microscopy Sciences</td><td>E200-SS</td><td></td></tr><tr><td>汎用 304グレードのステンレス鋼ステント</td><td>レーザーカスタム</td><td>オーダー</td><td></td></tr><tr><td>AdeGFP</td><td>University of Pennsylvania ベクターコア</td><td>AD-5-PV0504</td><td></td></tr><tr><td>AdLuc</td><td>University of Pennsylvania ベクターコア</td><td>AD-5-PV1028</td><td></td></tr><tr><td>広告<サブ>EMPTY</サブ></td><td>ペンシルベニア大学ベクターコア</td><td>A858</td><td></td></tr><tr><td>Cy3(NHS)2</td><td>GEヘルスケア</td><td>PA23000</td><td></td></tr><tr><td>セファロース6B</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>6B100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>UV96ウェルプレート</td><td>Costar</td><td>3635</td><td></td></tr><tr><td>蛍光測定96ウェルプレート</td><td>Costar</td><td>3915</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養 96ウェルプレート</td><td>Falcon</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP)</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>20490</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>20290</td><td></td></tr><tr><td>sulfo-LC-SPDP</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>21650</td><td></td></tr><tr><td>Spectrophotometer</td><td>Molecular Devices&nbsp;</td><td>SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>分光蛍光光度計</td><td>分子デバイス</td><td>SpectraMax Gemini EM</td><td></td></tr><tr><td>オービタルシェーカーインキュベーター</td><td>VWR</td><td>1575R</td><td></td></tr><tr><td>水平エアフローオーブン</td><td>シェルラボ</td><td>1350 FM</td><td></td></tr><tr><td>Centra-CL2 遠心分離機&nbsp;</td><td>International Equipment Company</td><td>426</td><td></td></tr><tr><td>デジタルボルテックスミキサー</td><td>Fisher Thermo Scientific</td><td>02-215-370</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse TE300 蛍光顕微鏡</td><td>ニコン&nbsp;</td><td>TE300</td><td></td></tr><tr><td>DC 500 CCDカメラ</td><td>ライカ</td><td>DC-500</td><td></td></tr><tr><td>7500 リアルタイムPCRシステム</td><td>応用バイオシステム</td><td>利用不可</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum生物発光ステーション</td><td>パーキンス・エルマー</td><td>利用不可</td><td></td></tr><tr><td>EDTA二カリウム塩</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>ED2P</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン画分V (BSA)</td><td>Fisher Thermo Scientific</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>デュモン鉗子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>A10細胞株&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1476</td><td></td></tr><tr><td>ウシ大動脈内皮細胞</td><td>ロンザ</td><td>BW-6002</td><td></td></tr><tr><td>ルシフェリン、カリウム塩</td><td>ゴールドバイオテクノロジー</td><td>LUCK-1Ge</td><td></td></tr><tr><td>プルロニック F-127</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>P2443-250G</td><td></td></tr><tr><td>PBS カルシウムとマグネシウムなし</td><td>Gibco</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>ジェミニバイオプロダクツ</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン溶液</td><td>Gibco</td><td>11540-122</td><td></td></tr><tr><td>DMEM、高グルコース</td><td>Corning cellgro</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>0.25% トリプシン/EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA マイクロキット</td><td>Qiagen</td><td>56304</td><td></td></tr><tr><td>Power Sybr Green PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4367659</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optical 96-well Reaction Plate</td><td>Applied Biosystems</td><td>N8010560</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td><td>Applied Biosystems</td><td>4360954</td><td></td></tr><tr><td>Cephazolin&nbsp;</td><td>アポテック</td><td>スが利用できない</td><td></td></tr><tr><td>ロキシコム(メロキシカム)</td><td>ノーブルック</td><td>が利用</td><td></td>できない</tr><tr><td>ヘパリンナトリウム APP</td><td>医薬品</td><td>が利用できない</td><td></td></tr><tr><td>ケタベット(ケタミン)</td><td>VEDCO</td><td>が利用できない</td><td></td></tr><tr><td>アナセド(キシラジン)&nbsp;</td><td>Lloid</td><td>利用不可</td><td></td></tr><tr><td>Forane (Isoflurane)&nbsp;</td><td>バクスター</td><td>は利用できません</td><td></td></tr><tr><td>湾曲したモリア虹彩鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11370-31</td><td></td></tr><tr><td>湾曲した超微細グレーフ鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>デュモン #5 鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>バンナス スプリングハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>ファインハサミ - ToughCut</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>外科用ハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14101-14</td><td></td></tr><tr><td>ビクリル縫合糸(5-0)</td><td>エチコン</td><td>J385</td><td></td></tr><tr><td>縫合糸(4/0シルク)&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18020-40</td><td></td></tr><tr><td>ミシェル縫合糸クリップ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>12040-02</td><td></td></tr><tr><td>創傷拡張器(ランカスターアイスペキュラ)</td><td>KLS マーティン</td><td>34-149-07</td><td></td></tr><tr><td>ホットビーズ滅菌器</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>ミシェル縫合糸クリップアプリケーター</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>112028-12</td><td></td></tr><tr><td>インサイトオートガード 24 G IVカテーテル</td><td>ベックトン・ディキンソン</td><td>381412</td><td></td></tr><tr><td>2F フォガティカテーテル</td><td>エドワーズライフサイエンス</td><td>120602F</td><td></td></tr><tr><td>テフロンチューブ</td><td>ベンション</td><td>041100BST</td><td></td></tr><tr><td>PTAカテーテル</td><td></td><td>NuMed カスタムオーダー</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼパッド</td><td>ケンドールヘルスケア</td><td>9024</td><td></td></tr><tr><td>コットンアプリケーター</td><td>ソロン マニュファクチャリング</td><td>WOD1003</td><td></td></tr><tr><td>生理食塩水</td><td>バクスター</td><td>281321</td><td></td></tr><tr><td>10mlシリンジ(ルアーロック)</td><td>ベクトン・ディキンソン</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>1mlシリンジ(ルアーロック)</td><td>ベクトン・ディキンソン</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>クリッパーズ#40ブレード</td><td>オスター&nbsp;</td><td>78005-314</td><td></td></tr><tr><td>Transpore surgical tape</td><td>3M</td><td>MM 15271</td><td></td></tr><tr><td>Puralube 獣医軟膏</td><td>Pharmaderm</td><td>利用不可</td><td></td></tr></tbody></table>

加水分解性架橋剤を介してアデノウイルスベクターテザーを使用した金属ステント表面からの血管の遺伝子導入

Vascular Gene Transfer from Metallic Stent Surfaces Using Adenoviral Vectors Tethered through Hydrolysable Cross-linkers

ステント内再狭窄は、広く冠動脈および末梢動脈の批判的に狭めセグメントを通じて再確立血流に使用されるステントベースの血管再生手順の主要な合併症を提示します。抗再狭窄性の活性を有する遺伝子の調節可能な放出が可能な血管内ステントは、現在、薬剤溶出ステントを使用するための代替戦略を提示することができる。典型的には、ベクターの物理的捕捉のために使用されるポリマーコーティングに関連付けられた過剰な炎症性応答を回避しながら、臨床翻訳を達成するために、遺伝子溶出ステントは、ステント固定化遺伝子ベクターの放出及び血管系の部位特異的な形質導入の予測可能な速度論を示さなければならない。本論文では、ビスフォスフォネート（PABT）が加水分解性架橋剤（HC）を介してステンレス鋼表面 - 修飾ポリアリルアミンするアデノウイルス粒子の可逆的結合に基づくステントとアデノウイルス遺伝子ベクターのコートレステザリングするための詳細な方法論を説明しています。の家族5〜50日の範囲内の鎖エステル加水分解の平均のt 1/2と二官能性（アミンおよびチオール反応性）HCは、ステントとベクターを連結するために使用した。ベクトル固定化手順は、一般的に9時間以内に行われ、いくつかのステップで構成されています。PABTの水溶液中の金属試料の1）インキュベーション（4時間）;トリス（2 - カルボキシエチル）ホスフィン（20分）でPABTに設置チオール基の2）の脱保護;ピリジルジチオ（PDT）グループ（2時間）で誘導体化ポリエチレンの試料を反応させて金属表面のチオール反応容量の3）拡張;ジチオスレイトール（10分）とのチオールへのPDT群の4）変換; HC（1時間）とアデノウイルスの5）の修正;サイズ排除カラムクロマトグラフィー（15分）、チオール化鋼表面上のチオール反応性アデノウイルス粒子（1時間）の7）の固定化によって修飾されたアデノウイルス粒子の6）精製。この技術は、ステントを越えて広い適用可能性を有している注入された異物をインターフェース細胞に対する基質媒介遺伝子送達を通じてそれらの生体適合性を強化するために、生体プロテーゼデバイスの表面工学を促進することによって。

ベクター放出実験 そのような血管内ステントなどの介入装置を含む、インプラントの表面へのアデノウイルスベクターのテザリングは、部分的にベクトル &#39;物理的なターゲティングの欠如をなくす、疾患部位へのベクトルを近似する。しかし、標的組織の形質導入を介して治療効果を達成することができるように、ベクターは、（ 図2）表面から放出されなければならない。加水分解性架橋剤の使用は、架橋剤の加水分解によって媒介さ1のベクトルの有効な付着は変性polybisphosphonateする）、チオール設置金属インプラントと、2）持続放出を可能にするために仮定された。 誘導体化手順の終わりまでに、メッシュディスクに関連付けられた広告のeGFPベクターのゲノムコピー数のeGFP特異的プライマー（ 図3）でウイルスDNAのPCRにより決定される。に応じて、具体的な架橋剤に用い、結合したAdベクターの量は、9 10×9...

これらの研究は、アデノウイルス遺伝子ベクターのステントおよびモデルメッシュディスクのコートレス金属表面への可逆的な付着について報告しています。ベクター固定化に使用される架橋剤の加水分解を条件として、形質導入にコンピテントなウイルス粒子が持続的に放出されるため、血管細胞やステント留置動脈において、部位特異的な導入遺伝子の持続的な発現が得られます。

In-stent restenosis presents a major complication of stent-based revascularization procedures widely used to re-establish blood flow through critically ...

本手順の総合的な目的は、実験用ラットの総頸動脈に遺伝子放出ステントを留置し、その後の導入遺伝子の発現範囲と部位を経時的に決定することである。このため、外頸動脈枝に動脈切開を行い、総頸動脈への血管アクセスを確保する。拡張させた2 FrenchのFogartyカテーテルを総頸動脈に通し、内皮を剥離させ、中膜層に損傷を与える。次に、バルーン損傷させた総頸動脈の中間部に血管形成カテーテルを用いて遺伝子放出ステントを留置し、最終的に展開して動脈内のルシフェラーゼ発現を評価します。ルシフェリンを配合したオン・ゲル（onic gel）を血管周囲領域に塗布し、バイオルミネッセンスイメージングを行います。これにより、最終的に、血管組織への導入範囲および持続期間に関して、異なる遺伝子放出ステント製剤の比較が可能な結果を得ることができます。遺伝子治療を用いて即時の再狭窄およびステント血栓症を予防することの利点は、バイアルベクターからステント留置動脈への外来遺伝子発現をモニタリングする最も直接的な方法であることです。アデノウイルスベクターをステントに繋ぎ止める我々の戦略は完全に理解されており、ラットにおけるステント留置の手術手順のテキスト上のニュアンスは明確です。実演時に、付属の書面に従って、ルーク（Luke）を用いてステントを準備し、追加してください。ウイルス誘導ステントは、使用前24時間以内に、滅菌済みPBS中4°Cで保存してください。雄のSprague Dawleyラットを麻酔し、足指へのピンチ刺激による反応および筋緊張によって麻酔深度を確認した後、頸部および上胸部を剃毛します。強膜の乾燥を防ぐために眼科用獣医軟膏を塗布し、抗生物質、鎮痛剤、および生理食塩水を投与します。次に、24ゲージのカテーテルで尾静脈に留置し、無菌的にヘパリンを投与します。ポビドンとエタノールを用いて、頸部および上胸部を準備します。その後、動物を仰臥位にし、頭部を術者側に向けて配置します。次に、メスを用いて滅菌ドレープを配置します。皮膚および頸筋膜に沿って正中切開を行います。鈍的剥離法を用いて左外頸動脈を単離します。この手順で最も重要な点は、切除に向けた動脈の準備です。そのためには、外頸動脈を単離し、周囲の組織をすべて除去して清浄にします。その後、外頸動脈の到達可能な最も遠位の部位を結紮します。次に、内頚動脈の起始部に4-0シルクでスライディングの一時結紮を施します。続いて、スプリング鋏を用いて、切開創から左外頚動脈に2 mmの動脈切開を加えます。総頚動脈に2 FrenchのFogartyカテーテルを挿入します。カテーテルの先端を生理食塩水で膨張させます。次に、内皮を剥離させるため、膨張させたバルーンを大動脈弓から総頸動脈分岐部まで3回通過させます。フォガティカテーテルの上にチューブの一部をスライドさせ、総頸動脈内へと挿入します。Fogartyカテーテルのマウントとクリンプを外し、直径1.5 mmの血管拡張用カテーテルのバルーン上にLuke Derivateステントを装着します。テフロンチューブを通してステントを挿入し、総頸動脈の中段まで進めます。この際、ステントがチューブや血管壁に擦れないように注意してください。ステントを展開するには、血管形成カテーテルをデフレーター圧力計に接続し、12 atmospheresの圧力を30秒間加えます。血管形成カテーテルを抜去します。次に、動脈切開部位の近位側で外頸動脈を結紮し、内頸動脈の一時的な結紮を解除します。4-0 Vicryl縫合糸による連続縫合で手術部位を層状に閉鎖し、皮膚をステープラーで固定します。動物を保温パッドの上に置き、歩行可能になるまで回復させます。その後、個別のケージに戻します。術後12時間が経過すると、通常、動物に痛みや不快感の兆候は見られなくなりますが、ステント留置後1日から3週間までの期間において、メロキシカムによる治療を72時間まで延長することを検討してください。ivus spectrum装置用のLiving Imageバージョン4.2以上のソフトウェアを起動し、バイオルミネッセンスイメージングの準備を行います。イメージングハードウェアの初期化には約10分かかります。次に、PBSで調製した50 mg/mLのルシフェリンと、PBSで調製した25%onic F1 27を1:4（容量比）で混合し、氷上で保存します。この溶液は粘性を帯びている必要があります。イソフルランでラットを麻酔し、麻酔深度を確認した後、無菌的に外科用ステープルを除去します。処置部位を準備し、手術創を再開きます。メロキシカム 3 mg/kg を皮下投与し、鈍的剥離を用いて左総頸動脈に再度到達し、迷走神経および隣接する結合組織から分離します。ピペットを使用して、冷却したルシフェラーゼ混合液 200 µLを総頸動脈の露出部位に直接塗布します。37 °Cの組織に接触すると、溶液がゲル化します。次に、動物をivus spectrum装置のイメージングチャンバー内で背臥位にし、イソフルラン麻酔を維持するためにフェイスマスクを装着させます。次に、ソフトウェアの撮影コントロールパネルウィンドウの視野ドロップダウンメニューから、カメラと物体の距離が6.6 centimeterに対応するポジションBを選択し、ビニングを選択して、ビニング係数をmediumに設定します。続いて、被写体高さのボックスに2.5 centimetersと入力し、露光時間のボックスで時間の単位としてminutesを選択し、数値に2を指定します。ラットの首と上胸部がチャンバー底面の正方形内に完全に収まるように、チャンバー内の動物の位置を調整します。ルシフェリアン・オニック・ゲルの塗布から3分後、画面上のacquireボタンをクリックして画像取得を開始します。取得時間は、想定される信号強度に応じて1分から6分まで変動します。画像を取得した後、シリンジを用いて生理食塩水でゲルを洗い流し、動脈周囲腔を滅菌ガーゼと綿棒で軽く押さえて拭き取ります。Vicryl縫合糸で創部を閉鎖し、皮膚をステープラーで固定します。その後、動物を回復させ、ケージに戻します。以前と同様に、後刻にイメージング手順を繰り返します。これにより、全身投与されたステント固定化アデノウイルスベクターによってもたらされる動脈発現の時間経過を検討します。動物を麻酔し、準備を整えた後、PBSで50 mg/mLのLucifer溶液を調製します。前述と同様に、24ゲージのカテーテルで尾静脈に留置し、尾とカテーテルの間に外科用テープを貼って固定します。次に、テープの端を上に折り、尾の周囲に数回巻き付けます。投与の1分後に、カテーテルを通じて1 mLの溶液を10秒間かけて注入します。画像取得を開始します。前述の通り、注入速度が10秒より速い場合は、発作活動や呼吸停止を誘発する可能性があることに注意してください。これは、異なる加水分解済み架橋剤の使用に関連する潜在的な影響を調べるためです。動脈伝達において、動物にLuke逃避ステントを植え込み、ステント留置の1日後および8日後にイメージングを行いました。ステント留置から1日後のここで確認できるように、迅速に加水分解される架橋剤で調製されたadd, Lukeステントで処理した動物は、通常、最も高いルミネッセンス信号を示します。中程度の速度で加水分解される架橋剤を用いたラットが次に高いルミネッセンス信号を示し、続いて緩慢に加水分解される架橋剤で調製したステントが続きました。加水分解されていない架橋剤でテザリングされたadd Lukeを用いて調製したステントを留置したラットの群では、知覚可能な信号は観察されませんでした。このことは、血管組織を効率的に形質導入するためには、ステントからベクターが妨げなく放出されることが重要であることを強調しています。8日目までに、RHC処方ステントによるルシフェラーゼ発現の平均強度は数倍低下しました。1日目と8日目の強度をそれぞれ対数スケールでプロットしたところ、中速分解性架橋剤処方ステントでは1.4倍、低速分解性架橋剤処方ステントでは1.8倍の増加が見られました。この結果は、ステント表面からのベクター放出速度が遅い遺伝子放出ステントの方が、より持続的な血管導入が可能であるという仮説と一致しています。このビデオを視聴することで、頸動脈へのADL-stentの植え込み方法と、ステント留置後のルシフェラーゼによる血管発現のイメージング手法について深く理解することができます。留置手術には20〜25分、イメージングの手順には10〜15分かかります。本手法を用いて動脈閉塞の程度を測定することで、遺伝子治療製剤や非遺伝子薬の抗血栓効果を検討することが可能です。ステント留置から2週間後。

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Medicine

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カフ法 による マウス頸動脈への組織改変血管移植片の移植

学ぶラットの総頸動脈への遺伝子放出ステント移植とバイオルミネセンスイメージングによる血管組織のトランスジェン発現評価法。加水分解性架橋剤を用いたアデノウイルスベクターの効率的な遺伝子導入技術を習得できます。

加水分解性架橋剤を介してアデノウイルスベクターテザーを使用した金属ステント表面からの血管の遺伝子導入

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