同所膵臓癌マウスモデルのダイナミックコントラスト強化磁気共鳴画像

このプロトコルの目標は、マウスの同所性膵臓腫瘍異種移植片に対して動的コントラスト増強磁気共鳴画像法(DCE-MRI)を適用することです。DCE-MRIは、標的組織の微小血管系を非侵襲的に解析する方法であり、新規治療後の腫瘍の血管反応を評価するのに役立ちます。

この手順の全体的な目標は、動的コントラスト増強磁気共鳴画像法または D-C-E-M-R-I をマウスの ORTHOTOPIC 膵臓腫瘍異種移植片に適用することです。これは、最初に腹部から膵臓を切除し、次にヒトの膵臓がん細胞を膵臓の尾部にゆっくりと注入することによって達成されます。その後、膵臓は腹部に戻り、腫瘍の直径が5〜7ミリメートルになると、プラスチックボードと表面コイルが組織塊ヒューマの上に置かれます。

最終的に、腫瘍異種移植片の微小血管は、D-C-E-M-R-I によって視覚化できます。皮下腫瘍異種移植片のD-C-M-R-Iのような従来の方法に対するこの手法の主な利点は、同所性膵臓腫瘍モデルにより、血管新生の血液供給や腫瘍細胞浸潤などの原発腫瘍微小環境を評価できることです。この手順は、私たちの研究室の研究担当者であるシャロン・サミュエルと研究技術者のマリー・ウォーレンによってデモンストレーションされます。

つま先をつまんで適切な鎮静レベルを確認した後、麻酔をかけた8週齢のメスのスキッドバルブシーマウスを加熱パッドに置くことから始めます。次に、動物の腹部の左上腹部から毛を取り除き、虹彩ストレートハサミを使用して鎮痛薬を皮膚に投与します。皮膚と腹膜に1センチの切開を行い、切開部を通して膵臓をそっと持ち上げます。

次に、28ゲージの針を備えた0.5ミリリットルのインスリン注射器を使用して、30マイクロリットルのDMEMに含まれる250万個のヒト膵臓がん細胞を膵臓の尾部にゆっくりと注入します。溶液によって膵臓の頭に小さなブレブが作成されることを確認します。次に、膵臓を腹部にそっと戻し、2つの中断された5つのゼロプロリン縫合糸で皮膚の腹膜を1つの層で閉じます。

手術部位の2本の指触診で腫瘍のサイズを毎日チェックします。腫瘍は通常、周囲の組織や臓器よりも密度が高く、でこぼこしているように感じます。病気の兆候がないか動物を毎日監視してください。

腫瘍の直径が5〜7ミリメートルに達したら、鋭利な30ゲージの針をマイクロポリエチレンチューブの一方の端に挿入し、鈍い30ゲージの針先をもう一方の端に挿入します。調製したばかりのMRI造影剤が入った1ミリリットルのシリンジを鈍い針先に接続し、プランジャーをゆっくりと押し下げてチューブ全体を充填します。次に、ヒートランプの下で動物の尾静脈を拡張し、ケリー鉗子を使用して鋭い30ゲージの針のシャフトをつかみます。

拡張した尾静脈の1つに針を慎重に挿入し、尾とチューブの両方を10 x 100ミリメートルのプラスチック片にテープで固定して、尾をまっすぐに保ちます。次に、マウスを仰臥位にして、循環する温水を備えた動物用ベッドに置き、イメージング中に動物の体温を調節します。このとき、直腸温プローブも挿入します。

動物が所定の位置にあるとき、腫瘍がボードの上端の後ろに位置していることを確認して、腹部領域に直交的に曲げられたプラスチックボードを適用し、次に腫瘍がしっかりと引っ掛かることを確実にするためにボードを約2ミリメートル引き下げます。次に、呼吸パッドトランスデューサーを胸部にテープで固定して、イメージング中の動物の呼吸を監視します。次に、表面コイルを腫瘍領域の上部に置き、動物のベッドにしっかりとテープで固定します。

次に、腫瘍領域がボリュームコイルの中心に来るまで、動物用ベッドをMRスキャナーに押し込みます。T 2 加重 MRI を適用して腫瘍を特定し、続いて T one マッピングに対してさまざまなフリップ角度の T 1 加重 MRI を適用します。次に、D-C-E-M-R-I イメージングでは、ガドリニウム ベースの MRI コントラストの注入前、注入中、注入後に、固定フリップ角度で T one 重み付け MRI を連続的に適用します。

イメージングの最後に、イメージング中に動物の呼吸と体温を継続的に監視し、針と他のプローブを取り外し、動物をヒートランプの下に置きます。動物が定量的に目覚めるまで。D-C-E-M-R-Iは、同所性膵臓腫瘍異種移植片にうまく適用できます。

例えば、参照領域モデルを用いて、これらの造影マップは、MRの注入の1分前における腫瘍領域をカラースケールで示しています。造影剤。そして、5分後と40分後には、グレースケールで2枚のMR画像をT重ね合わせた。この実験のマウスは、同所性のヒト膵臓腫瘍異種移植片を産んでいました。

これらの造影曲線は、腫瘍領域と傍脊椎筋領域から平均化されました。腫瘍のこれらのktsおよびKEPマップは、Mr.Contrast剤のウォッシュインおよびウォッシュアウト率を示していますこのTCMI手順を試行する際には、腫瘍がボードの上端の後ろに位置していることを確認することが重要です。