Name: 実験的炎症性腸病気のマウスモデルで使用するため、腸管へのホーミングを増加するヒト間葉系幹細胞の超音波ガイド下心臓内注射 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-01T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: 学ぶ超音波ガイド下心臓内注射法で、ヒト間葉系幹細胞をマウスに投与し炎症性腸疾患モデルでの腸管ホーミング効率を向上させる手法。この技術は高い成功率で最小限の侵襲性を実現し、幹細胞治療の発展に貢献する。

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マニッシュ デイブは、国防総省グラント PR141774 およびクローンの大腸炎財団のアメリカのキャリア開発賞によってサポートされます。ファビオ Cominelli の研究室は、NIH 支え DK042191 ・ (FC)、DK055812 (・ FC)、DK091222 (FC) と DK07948 (・ FC) を付与します。アーノルド ・ キャプランの研究室を一部 L. デイヴィッド ・ e. バージニア州ボールドウィン財団によってサポートされています。資金の機関に研究分析や原稿の執筆での役割はなかった。内容は、著者の責任です。

すべてのマウスの実験と研究の手順は、ケース ウエスタン リザーブ大学によって承認された &#39; s 機関動物ケアおよび使用委員会。評価の協会で手続きを行った、実験動物管理 (AAALAC) 認定認定施設。BM はインフォームド コンセント後ケース ウエスタン リザーブ大学で幹細胞の中核施設が大学病院治験審査委員会承認の議定書の下で吸気だった。
 1 文化伝達ひと骨髄由来間葉系幹細胞 (hMSCs) 注: hMSCs の分離以前の出版物 15 の詳細については 、。 20。
<ol><li>文化分離ダルベッコの hMSCs &#39; 10% 牛胎児血清 (FBS) s ワシの変更中-低血糖 (DMEM LG) 培。37 ° C、湿度 95%、および 5% CO 2 T175 成長培地を 25 mL のフラスコでの細胞を培養します。媒体ごとに 3-4 日を交換します。14 日の hMSCs 主通路を実行します。
	<ol><li>ときセル 80% 合流点に到達、古いメディアを完全に削除、優しく洗浄滅菌リン酸緩衝生理食塩水 5 mL でセル (PBS; 75 cm 培養フラスコ).</li>
		<li>は、フラスコから PBS を削除し、0.25% トリプシン エチレンジアミン四酢酸 (EDTA) の 4 つの mL を追加します。フラスコが 37 ° C で 5 ~ 10 分のためのインキュベーターに戻って配置できるだけ簡潔露出の時間を維持します</li>。
		<li>牛子牛血清トリプシンの半分の体積に等しい量を追加することによって反作用を停止し細胞の大半がバランスのとれたか培養皿から切断したと、</li>。
		<li>は、適切なサイズの遠心チューブに細胞懸濁液を転送します。5 分間 400 x g で細胞を遠心し、上清を慎重に取り外します.</li>
		<li>は、5 mL の培地で細胞を再懸濁します (DMEM LG + 10 %fbs) 診断とセルをカウントと 。
		注: この時点で、細胞継代またはできるトリプル記者増殖型します</li>。
	</ol></li> <li>トリプル記者で hMSCs の伝達を行います。
	<ol><li>シード 1.5 x 10 6 細胞 1 つ T175 フラスコ。成長培地で 37 ° C、95%, 湿度, 5% の CO 2 の 25 の mL の細胞を培養します。24 h を付けるセルを待つ</li>。
		<li>は、参照 18 に従って 15 mL チューブにカクテル ウイルスを作る。
		<ol><li>水で 37 ° C で融解レンチのお風呂。ダルベッコの 5 mg/mL proteamine 硫酸溶液の 160 μ L を追加 &#39; s 修正イーグル培地 (DMEM) 培養液 8 ml (DMEM LG + 10 %fbs) 最終濃度 100 μ g/mL の。3, 追加 5 (MOI) 感染症のウイルスの多様性の渦 (1 回解凍) .</li>
		</ol></li> <li>細胞培養用フラスコ (ステップ 1.2.1) からメディアを削除し、細胞にウイルス カクテルを追加。37 ° C、湿度 95%、および 5% CO 2 で 10 時間インキュベートします</li>。
	</ol></li> <li>100 μ g/mL proteamine 硫酸 4 mL を加えて 4 mL DMEM LG + 10 %fbs し追加 14 h,</li>
	<li>25 ml の培地交換で 24 h 後伝達を停止 (DMEM LG + 10 %fbs).</li>
	<li>流れ cytometry 18 mRFP 式を評価することで伝達効率を確認します 。
	注: ここでは、導入された hMSCs 効率 65% 以上使用した</li>。
	<li>は、25 ml の新鮮な媒体の交換によってセルを展開 (DMEM LG + 10 %fbs) 週に 2 回。37 ° C、95%, 湿度, 5% の CO 2 の細胞を培養します。80% の合流点に達すると、細胞を通過します</li>。
	<li>細胞の必要な数に達すると、実行手順 1.1.2 - 1.1.4 あたり trypsinization</li>。
	<li>セルをカウントし、滅菌 PBS でそれらを中断 (1 x) 1 x 10 の最終的な集中で 6 セル/75 μ L。 細胞維持輸送のため氷の上超音波マシンに。実験用通路番号 2-5 からの hMSCs</li>。
</ol> 2。左心室に超音波ガイド下 hMSCs の心腔内注射 注: 実験のための確立された小腸炎症と年齢と性別一致 AKR/J マウスを使用 SAMP1/YitFc。特定病原体フリーの条件の下でサンプと AKR マウスを維持、餌を標準研究所の食事は、12 時間の明暗サイクルのそれらを保ちます。ここでは、超音波ガイド下心臓注射を消毒剤で消毒し、70% アルコールですすぎ CWRU 動物研究施設にある専用の病原体フリー心臓超音波ルームで行った。研究室研究員は、心腔内注射時にガウン、マスクの目の盾と滅菌手袋を含む個人の保護具を着用する必要があります。プロシージャの持続期間のためマウスの体の熱を維持する必要があります。
<ol><li>は、マウスを麻酔する前に超音波システムを設定します。このプロトコル マウス心エコー検査用超音波検査機を使用します。
	<ol><li>パワーと初期化トランスデューサー (30 MHz) 新しい研究を設定するを有効にします</li>。
	</ol></li> <li>0.2 のレートで 100% 酸素の 3-4% イソフルランを用いた誘導室でマウスを麻酔 - 0.5 L/min と鼻の円錐形によって 100% 酸素の 2% イソフルレン全体の手順のための動物を維持します。イメージングを実行する前に適切な anesthetization を確認、足指をつまんで、ローリング マウスとの動きの有無を観察します 。
	注: 眼科用軟膏は角膜の乾燥を防ぐために麻酔導入を次の目に適用する必要があります。麻酔下のマウスに、麻酔薬イソフルランの維持の線量を受け取る彼らイメージング マシン (すなわち、 生物発光イメージング システムや超音波) を転送します。尾をつまみに反応の欠如を観察することによって麻酔開始時刻および麻酔の深さと足パッド麻酔の全体の持続期間のための 10 分毎を決定します</li>。
	<li>イメージング テーブルと超音波ゲルの温度を 37 に設定 ° C</li>
	<li>完全に脱毛クリームを使って、マウスの麻酔下の胸部領域の上毛皮を削除します</li>。
	<li>は、仰臥位の画像のテーブルの上にマウスを置くし、プロシージャの間に身体の動きを避けるために粘着テープで上肢および下肢を保護します。すべてのマウスのプロシージャの間に心電図モニターを使用します</li>。
	<li>は、70% エタノール綿棒に続いて 10% ポビドン ヨード綿棒を使用して胸部領域の肌をクリーンアップします。マウスの胸部領域にゲルの厚い層を適用します</li>。
	<li>ホルダーに探触子をマウントし、左心室が明らかにビューのフィールドに表示されるまで、その位置を調整します</li>。
	<li>負荷 150 μ L の導入された立体的細胞懸濁液 (150 μ L の滅菌 PBS で 2 x 10 6 hMSCs) 28 G と 1 mL 注射器に針、注射器ホルダーを固定します。脈動の血を視覚化し、注射器で小さな空気柱を維持します。群生していることを避けるため、注射する前にセルを中断します</li>。
	<li>マウス胸部へ注射器を進める超音波ガイド針の軌道を調整し、左心室を入力します</li>。
	<li>肋間スペースとマウスの左心室に注射針を貫通超音波イメージングのガイダンスに従う 。
	注: 注射器の針の先端は超音波画像を左心室にはっきりと見えるにする必要があります。適切な配置は、注射器に新鮮な動脈血液流出によってさらに確認すべき。これらは、成功した挿入の兆候です</li>。
	<li>注入立体的細胞懸濁液かけて非常にゆっくり 2 分、穏やかなプリを適用します。内します</li>。
	<li>以下の浮遊細胞の注入、軽く超音波ゲルをきれい、針を撤回し、テープ拘束からマウス ボタンを離します</li>。
	<li>予熱パッドと新しい、きれいなケージに動物を配置します 。
	注: プロシージャの終了後暖かい環境ありますマウスの回復まで。末梢血管拡張、回復を危険にさらすので、過熱は避けてください。マウスを密接に監視し、完全復旧、胸骨の横臥を維持する能力によって示されるまで他のマウスから隔離する必要があります</li>。
	<li>彼らは、実験の終わりまで毎日麻酔から完全な回復を達成するまで動物を監視します</li>。
</ol> 3。(結合) の生物発光イメージングの hMSCs <ol><li>は、生物発光イメージング システムの心腔内注射後マウス 24 h をイメージします。生体内で イメージ投射ソフトウェアを開始します。イメージング システムを初期化し、新しい研究を開きます。
	<ol><li>コントロール パネルをクリックして撮像パラメーターを設定 &#34; シーケンス セットアップ &#34; イメージング モードで、選択 &#34; 発光 &#34; と &#34; 写真。 &#34; 0.5 から露光時間を設定に 10 分に s、ビニング設定 &#34; 中 &#34; と F。停止/&#34; 1。 &#34; 励起フィルターを設定 &#34; ブロック &#34; とする発光フィルター &#34; 開く。 &#34; にビューのフィールドを設定 &#34; C &#34; 2 つのマウス。画像ウィザードへ取得コントロール パネルをクリックしてシーケンス設定を追加します</li>。
	</ol></li> <li>マシンの内部ノーズコーンと誘導商工会議所では 2.5% 酸素ポンプとセット、イソフルランに切り替える</li>。
	<li>D-ルシフェリン (12.5 mg/mL) の 300 μ L でマウス i. p. を挿入します</li>。
	<li>は、麻酔誘導チャンバーにマウスを配置します。
	<ol><li>2-3 分後、生体内で イメージ投射区域麻酔マニホールド上鼻の円錐形の頭にマウスを移動します。画像の中に、目を保護するために光の軟膏を塗る。複数のマウスを画像に隣接するマウスに光の反射を防ぐために黒の光バッフルを使用します</li>。
	</ol></li> <li>をクリックして、&#34; を取得 &#34; D-ルシフェリン注射後 10 分画像の取得を開始するボタン</li>。
	<li>3.3 3.5 以上のマウスをイメージする手順を繰り返します</li>。
	<li>生体内で 撮影後の死を確認するための頚部転位続いて CO 2 吸入によるマウスを安楽死させます。前のヴィヴォ 解析を実行します。
	<ol><li>繰り返せば; マウスを犠牲にする前にルシフェリン注入 (ステップ 3.3) の 20 分後に 前のヴィヴォ 解析を実行すると、バリの信号がルシフェリン注射後 20 分を低下します</li>。
	</ol></li> <li>全体消化管 (すなわち、 胃から直腸)、腸間膜リンパ節 (MLN)、肺、脾臓と肝臓を削除するマウスを解剖。鉗子、はさみの 2 , 4 を使用してシャーレ内に配置します</li>。
	<li>イメージング室 explanted 器官を含むペトリ皿を置き、ステップ 3.1 3.6 ごとバリ画像を取得します</li>。
	<li>画像取得後 explanted 臓器を最適な切削温度 (OCT) 化合物を含む試験片金型に転送します。Cryofreeze-80 ° c ドライアイスを使用して金型。凍結切片の hMSCs 16 の存在を確認する抗ルシフェラーゼ抗体を用いた免疫組織化学を実行します</li>。
	<li>光強度の定量化, ツール パレット 16 , 19 の利益 (率 ROI) の領域を使用します。投資収益率のフレームを選択し、画像上の関心領域に移動します。クリックして &#34; ROI の測定 &#34; と SEQ ファイル形式でデータを保存します。.Txt ファイルとしてデータをエクスポートし、定量化 16 の基本的な統計的テストを実行する統計ソフトウェアを使用します</li>。
</ol>

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本研究では、実験的 CD の小腸マウスモデルで hMSCs 超音波ガイド下心臓内注射法について説明します。この手法は、針の軌道が超音波によって提供されるマウスの左心室のリアルタイム、高解像度の画像に基づいて調整することができる生存と成功率が非常に高いです。左心室への配信の利点は、hMSCs 気管動脈内投与に分散されて静脈、肺の細胞の凝集を避けるためのバイパスします。以前は、動脈内の配信のため頚動脈カテーテルは、MSCs16,21を注入する使用されました。頸動脈カテーテル検査法には、動脈内カテーテルを配置するために頚動脈を公開するために手術が含まれます。カテーテルは、輸血細胞のため大動脈弓に向かって進んだ。カテーテルが削除されその後、内頚動脈結紮します。この手法頚動脈カテーテルと比較して、左の心室の MSCs の超音波ガイド下注入は低侵襲くらい高速 (約 10 分/マウス 60 分/マウス対) であり以下の罹患率と死亡率 (&#60;10%対30%)。上腸間膜動脈のカテーテルを介して hMSCs 人間臨床...

クローン病 (CD) は小型の一般的な慢性炎症性疾患と大腸と腸内細菌7、8にホストの免疫システムの不適切な応答に起因すると考えられます。最近の研究では、マウスとヒト間葉系幹細胞 (MSCs) することができます腸炎症1,3,4、5のマウス ・ モデルにおける炎症を抑制することを示しています。CD9を含む炎症性腸疾患 (IBD) の患者を治療する骨髄や脂肪組織由来ヒト MSCs を使用して複数の進行中の臨床試験があります。MSC 療法の 2 つのルートは、これらの臨床試験に使用されている: 1 つは全身投与を含む (すなわち、静脈内) 内腔 IBD (CD を含む)、および、その他の MSCs の瘻孔の幹細胞のローカライズされたアプリケーション/注入が含まれます肛門周囲 CD 患者の管。最近メタ分析 MSC IBD、全身療法の (すなわち、静脈内投与) で (CD 含む) 内腔の IBD のための MSC 治療を 40% に有用であった (95 %ci: 7 79%)、患者の有効性は高く、61% で (95 %ci: 36 85%)、MSCs病気にかかった CD 瘻9にローカルを注入しました。最近の段階 III の多施設プラセボ対照無作為同種脂肪幹細胞治癒、肛門周囲瘻の統計的に有意な臨床および放射能の証拠を示した CD 患者の肛門周囲瘻に直接注入されます。10メタ解析の結果を裏付けます。MSC 療法, CD の静脈内投与の効力感が低い理由は不十分な調査されて、しかし、理由の一つは炎症のサイトに MSCs の不十分なホーミングかもしれません。MSCs (1-5%) 静脈内注入のわずかな割合に達する炎症コロンだけに、残りの MSCs が肺 (初回通過効果)1,2 フィルタ リング大腸炎症モデルにおけるマウスの調査は示した ,5,11,12。複数のマウス研究したがって大腸炎4の動物モデルにおける MSC 管理の腹腔内のルート (i. p.) を使用しています。ただし、効果があると細胞のごく一部に到達し、コロンを接がのみ腫瘍壊死因子誘導性遺伝子 6 蛋白質のような水溶性のパラクライン因子の分泌 (TSG-6)2を関連をも示しています。免疫と治癒の MSC 機構を含むパラクリン; を含む多面的なアプローチTSG-6; のような細胞の近さに依存しない因子近接依存の要因のようなセルとプログラム死リガンド 1 (PD L1);またはジャグ 1。したがって、炎症のサイトに MSC 局在効果9,13あります。実際には、最近の研究は、結腸損傷部位に直接注入する MSCs により血管新生促進血管内皮増殖因子 (VEGF) の分泌によって治癒された示した。その一方で、最小限の癒し効果は静脈注射5後指摘されました。炎症 (すなわち、ひき割りトウモロコシ マウスの小腸) のサイトに局在を増加するには、左心室で MSC の管理にこの超音波ガイド下心臓内注射法が開発されました。画像誘導の注入により成功率が高いにつながるし、罹患率と死亡率を減少する正確な注入になります。また、左心室に MSCs の注入は動脈循環、肺の中に閉じ込めになる前に炎症を起こした小腸を達することができるにそれらを提供します。
本研究では、CD14のひき割りトウモロコシ-1/YitFc (SAMP) マウス モデルにおける注射用ひと骨髄由来 Msc (hMSCs) が使用されました。サンプは、ほぼ 100% 浸透度14小腸炎症を開発する慢性炎症のよ特徴付けられた自発的なマウス モデルです。炎症は細菌叢がない場合は任意の化学的、免疫学的、または遺伝的操作への応答で開発し、人間 CD11が近い。セックスと年齢をマッチさせた炎症無料 AKR/J (AKR) マウス、ひき割りトウモロコシのペアレンタル コントロールのマウスは、この研究で使用されました。
HMSCs は分離され、インフォームド コンセントを使用して検証され、プロトコル15,16以前公開されて後に通常、正体不明のドナーから得られた骨髄 (BM) サンプルから研究室で展開します。MSC 機能拡張、分離後の骨、脂肪細胞、軟骨細胞分化研究室で複数のアッセイ15評価したと。皮下免疫不全 CB17 Prkdc SCID マウス17で hMSCs 含有ハイドロキシアパ タイト/リン酸リン酸行列のセラミック キューブをはめ込むことによって骨の機能分析を行った。キューブの試金は骨と軟骨分化の可能性を示し、個々 の MSC 準備17を評価するための究極のテスト。ホタルのルシフェラーゼ (フロリダ州)、単量体の赤色けい光たんぱく質 (mRFP)、単純ヘルペス ウイルスのチミジンのキナーゼ (ttk ファイルで構成される三重レポーター遺伝子コンストラクトで hMSCs を変換に使用されたレンチ ウイルス注入後 hMSCs生体内可視化、)、変更された骨髄肉腫ウイルス (mnd) プロモーター18によって駆動されます。トリプルの記者でホタルのルシフェラーゼは酵素で hMSCs オキシルシフェリンにその隠れ家の注入ルシフェリンと光子/白色光を生成します。これ生体の光イメージング システム、マウスのライブ hMSCs 可視化できる高感度電荷結合素子 (CCD) カメラ (生物発光) によって検出されます。生物発光イメージング (結合) は、連続ex vivo解析、細胞を追跡するために使用できる重要な手法です。国防部の強力なプロモーターの使用はトリプル融合レポーター遺伝子コンストラクトの連続の式をドライブし、16 週間19以上の注入の hMSCs のイメージングのためできます。HMSCs にくい変換低伝達効率を持ちます。最適化されたプロトコルを使用して、hMSCs 伝達効率が改良され、遺伝子発現の強化された18才だった。フローサイトメトリー mRFP 式 (トリプル レポーター遺伝子の 1 つ) を使用して、最大 83% の高効率で hMSCs を変換する機能を示した。分化アッセイおよび生体内でキューブの試金、軟骨細胞、脂肪細胞および骨17に区別するために導入された hMSCs の能力を発揮しました。

<table><tbody><tr><td>DMEM-LG&nbsp;&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>31600-091</td><td></td></tr><tr><td>0.25% トリプシン-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25-200-072</td><td></td></tr><tr><td>硫酸プロテアミン</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4020-1G</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>Goldbio</td><td>luck-500</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bobine Serum</td><td>Gibco</td><td>26140-079</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic-Antimycotic</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>HyClone</td><td>SH30256.01</td><td></td></tr><tr><td>175 cm tissue cutlure flasks</td><td>Corning</td><td>431080</td><td></td></tr><tr><td>75 cm tissue cutlure flasks</td><td>Corning</td><td>430720</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge tubes</td><td>Crysalgen</td><td>23-2265</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Plus O.C.T. compound</td><td>Fisher HealthCare</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>Cryomold Standard</td><td>Tissue-Tek&nbsp;</td><td>4557</td><td></td></tr><tr><td>Lenti-PAC HIV発現パッケージングシステム</td><td>GeneCopoeia</td><td>HPK-LvTR-20&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ポビドンイオニジンスワブ</td><td>Medline</td><td>MDS093901</td><td></td></tr><tr><td>脱毛クリーム</td><td>Nair</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン&nbsp;</td><td>ピラマル・ヘラスケア&nbsp;</td><td>NDC 66794 013 25</td><td></td></tr><tr><td>鉗子&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11200-33</td><td></td></tr><tr><td>解剖はさみ(ワーグナー)</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>ワーグナー14068-12</td><td></td></tr><tr><td>プラルベ獣医軟膏</td><td>プラルベ</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr>アクア<tr><td>ソニック100超音波伝送ゲル</td><td>パーカー研究所</td><td>01.08</td><td></td></tr><tr><td>ペトリ皿</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>FB0875711A</td><td></td></tr><tr><td>SAMPマウス</td><td>Cleveland Digestive Disease Research Core Centre</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AKR mice</td><td>Cleveland Digestive Disease Research Core Centre</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo 770 イメージング システム</td><td>&nbsp;Visual Sonics、カナダ</td><td></td><td></td>、トロント</tr><tr><td>&nbsp;IVISスペクトラムシリーズシステム&nbsp;</td><td>PerkinElmer、ウォルサム、マサチューセッツ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>州リビングイメージソフトウェア&nbsp;</td><td>CaliperLifeSciences, PerkinElmer, Waltham, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>トリプルレポーター</td><td>Kindly provided by Dr. Zheng- Hong Lee, CWRU, (引用 19)</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

実験的炎症性腸病気のマウスモデルで使用するため、腸管へのホーミングを増加するヒト間葉系幹細胞の超音波ガイド下心臓内注射

Ultrasound-guided Intracardiac Injection of Human Mesenchymal Stem Cells to Increase Homing to the Intestine for Use in Murine Models of Experimental Inflammatory Bowel Diseases

クローン病 (CD) は、中小企業の一般的な慢性炎症性疾患と大腸です。マウスとヒト間葉系幹細胞 (MSCs) 免疫抑制の可能性があるし、腸管炎症のマウス ・ モデルにおける炎症を抑制する示されているにもかかわらず、彼らのホーミングと有効性1投与経路を制限できます。,3,4,5. 大腸損傷モデルに MSCs のローカル アプリケーションは、大腸の炎症の改善に大きな効果を示しています。しかし、小腸、実験 Crohn 病のひき割りトウモロコシ-1/YitFc (SAMP) モデルにおける炎症のサイトにひと骨髄由来 Msc (hMSCs) のローカリゼーション技術に関するデータの不足があります。この作品では、サンプ マウスで hMSCs 慢性炎症性腸のよ特徴付けられた自発的なモデルの超音波ガイド下心臓内注射用手法について説明します。セックスと年齢-一致炎症無料 AKR/J (AKR) マウスは、コントロールとして使用されました。生体内分布と局在を解析するには、hMSCs いたトリプル レポーターを含むレンチ ウイルスで導入しました。生物発光イメージング; ホタルのルシフェラーゼ (フロリダ州)、成っていたトリプル記者セルの並べ替え; 単量体赤い蛍光蛋白質 (mrfp)切り捨てられた単純ヘルペス ウイルス チミジンのキナーゼ (ttk)、陽電子放出断層撮影 (PET) 画像。本研究の結果は、炎症無料 AKR マウスではなくサンプ マウスの小腸で hMSCs をローカライズする心腔内投与後 24 h を表示します。この小説は、ひき割りトウモロコシ マウスの左心室の hMSCs 超音波ガイド下注入マウスの急速な回復のため最小限の罹患率と死亡率を可能にする携帯配信の高い成功率を保証します。この手法は、小腸の炎症、TNFΔRE6などの他のモデルの MSCs の強化されたローカリゼーションの有用な方法で可能性があります。将来の研究は、動脈内配信で hMSCs の増加のローカリゼーション治療効果の増加する可能性が決定されます。

図 1は、自分の幹細胞の性質を保存する高効率でトリプル記者増殖型 hMSCs ことができますを示しています。バリ (図 1図 3) で、導入された hMSCs をリアルタイムで視覚化できます。この小説は、ひき割りトウモロコシ マウスの左心室への hMSCs の超音波ガイド下注入注入、最小限の罹患率と死亡率 (図 2) マウスの高速リカバリを可能にする、非常に高い成功率を保証します。HMSCs と 1 つのマウスを注入するための平均時間は約 10 分と未満 8-9% の罹患率と死亡率はこの手法で観察されました。死亡率の主な理由は、脳卒中と出血性心嚢から心タンポナーデです。前のヴィヴォ解析 24 h 立体的の心内 (動脈) 管理、確認後管理結果のこのルートで行う無料の炎症ではなく、サンプ マウス炎症小腸 hMSCs のホー...

間葉系幹細胞 (MSC) の小さい割合 (1-5%) が静脈注射または腹腔内炎症コロン1,2ホーム大腸炎症モデルにおけるマウスの調査は示した。本研究は、MSCs の超音波ガイド下心臓内注射が腸への増加のローカリゼーションの結果することを示しています。

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have ...

本手順の全般的な目的は、実験的クローン病マウスモデルにおいて、超音波ガイド下心腔内ヒト骨髄由来間葉系幹細胞（HMSC）注入を行い、腸管へのHMSCホーミングを観察することです。この手法は、炎症時の小腸へのHMSC局在化を高める必要性についてという、炎症性腸疾患分野における重要な疑問への答えを得るのに役立ちます。この技術の主な利点は、マウスの可動性と死亡率を最小限に抑えつつ、高いHMSC導入成功率を実現できることです。一般的に、この手法に不慣れな方は、複数の変数が手順の結果に影響を及ぼすため、困難を伴う場合があります。そのため、トレーニングを受ける方には、ヒト間葉系幹細胞の生物学に関する深い理解が求められます。本手順のデモンストレーションは、当研究室のポストドクターであるPaola Menghiniが行います。特定病原体未感染（SPF）施設において、マウス心エコー超音波イメージングシステムのプロトコルを設定し、30 megahertzのトランスデューサーを初期化します。次に、足指へのピンチテストで適切な鎮静レベルを確認し、動物の眼に軟膏を塗布します。除毛クリームを使用して胸部の被毛を除去し、動物を37 degree celsiusのイメージングテーブルの上に仰臥位で配置します。処置中の動きを防ぐために四肢をテープで固定し、胸部の露出した皮膚を10%ポビドンヨードおよび70%エタノールで消毒します。皮膚に37 °Cの超音波ジェルの厚い層を塗布し、トランスデューサーをホルダーに装着させ、左心室が視野に明確に見えるまでトランスデューサーの位置を調整します。次に、2 x 10⁶ 個の導入済みヒト間葉系幹細胞を150 µLの滅菌PBSに緩やかに再懸濁して均質な細胞懸濁液を作成し、28G針を装着した1 mLシリンジに細胞を充填します。容量過多による死亡を避けるため、マウス1匹あたりの細胞懸濁液の注入量は150 microliters未満としてください。シリンジをシリンジホルダーに固定します。次に、超音波ガイドを用いて必要に応じて針の軌道を調整しながら、シリンジをマウスの胸部に向かって進め、肋間隙を通って左心室に針先を刺入します。超音波画像上で針を適切に可視化することは、左心室への正確な進路と穿刺、確実な注入を実現し、心機能低下や死亡を回避するために極めて重要です。針先が左心室内に明確に視認される必要があり、シリンジ内に新鮮な動脈血が流入することで、適切な配置をさらに確認できます。プランジャーを緩やかに押し、2分間かけてHMSC懸濁液をゆっくりと注入します。すべての細胞の注入が完了したら、ゆっくりと針を引き抜き、動物を予熱されたパッドのある清潔なケージに入れ、完全に回復するまで観察します。注入の24時間後に生物発光イメージングシステムを起動し、in-vivoイメージングソフ

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Research

JoVE Journal

Medicine

医学

例えば、高血圧または心筋梗塞などの心血管疾患のマウスモデルにおける心筋細胞送達は、回生広く研究において、異なる細胞型の治療可能性を試験するために使用される。そのため、詳細な説明およびこの外科処置の明確な可視化は、小型げっ歯類の心血管細胞治療の分析の限界と利点を定義するのに役立ちます。...

心筋内細胞送達：マウスハーツの観測

心エコーガイド下経皮的心筋内注入は、マウスの心臓への遺伝子導入剤又は細胞の送達のための、効率的で信頼性が高く、標的可能なモダリティを表しています。このプロトコルで説明されている手順に続いて、オペレータは、すぐにこの汎用性、低侵襲性技術で有能になることができます。...

マウスにおける超音波ガイド下経胸壁心筋内注射

心臓再生医療の新規治療戦略人間の使用を考慮することができます彼ら前に大規模な前臨床動物モデルで広範かつ詳細な研究が必要です。ここでは、このような新規薬剤の有効性の仮説のために貴重であるウサギでは、経皮的コントラスト心エコー法誘導心筋注入法を示す.

経皮的造影エコー ガイド心筋と大規模な前臨床モデルで携帯配信

左屈折性動脈閉塞と急速なペーシングによって引き起こされる心不全の豚モデルを確立し、細胞ベースの治療法に対する幹細胞の筋膜内投与の効果と安全性をテストすることを目的とした。...

幹細胞治療のための心筋梗塞後心不全の豚モデルの確立

幹細胞は、心筋損傷を有する個人の潜在的な治療法として継続的に調査されるが、損傷した組織内での生存率および保持率の低下は、長期的な有効性に影響を与える可能性がある。本稿では虚血再灌流傷害のマウスモデルにおける幹細胞送達の代替方法を述べる。...

マウスモデルにおける虚血再灌流損傷後の幹細胞の筋内内出産の遅延

幹細胞ベースの治療は、心筋梗塞後に負傷した心臓組織を修復するための効率的な戦略として浮上している。酵素的に架橋できるゼラチンハイドロゲルを用いた幹細胞移植に最適なインビボアプリケーションを提供します。...

マウスモデルにおける心筋梗塞後のMSC負荷注入性ヒドロゲルの筋内移植

マウスの心筋梗塞部位周辺の超音波ガイド下細胞送達は、安全で効果的で便利な細胞移植方法です。...

心筋梗塞マウスにおける超音波ガイド下多能性幹細胞由来心筋細胞移植術

大腿骨内注射は、少数の造血幹細胞および前駆細胞(HSPC)を骨髄腔に直接配置することにより、生着を可能にします。ここでは、免疫不全マウスへのヒトHSPCの大腿内注射の実験プロトコルについて説明します。...

免疫不全マウスへのヒト造血幹細胞および前駆細胞の大腿内注射 

この論文は、血管幹細胞の大動脈血管壁への正確な超音波ガイド下送達のためのプロトコルを提示します。この技術は、血管壁を効果的に標的とし、大動脈瘤や解剖における血管修復を促進します。...

大動脈疾患における血管修復のための精密超音波ガイド下幹細胞送達

この記事では、29 G x 88 mm の針を使用した心筋梗塞のラット モデルにおける心エコー検査ガイド下心筋内注射の最適化されたプロトコルについて詳しく説明します。この技術により、堅牢で正確かつ再現性のある治療薬が梗塞周囲ゾーンに直接送達されることが保証されます。...

心筋梗塞のラットモデルにおける標的で信頼性の高い心筋内幹細胞送達のための心エコーガイド下注射

学ぶ超音波ガイド下心臓内注射法で、ヒト間葉系幹細胞をマウスに投与し炎症性腸疾患モデルでの腸管ホーミング効率を向上させる手法。この技術は高い成功率で最小限の侵襲性を実現し、幹細胞治療の発展に貢献する。

実験的炎症性腸病気のマウスモデルで使用するため、腸管へのホーミングを増加するヒト間葉系幹細胞の超音波ガイド下心臓内注射

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