Name: 誘発電位録画ドライの非侵襲的なマルチ チャネルを使用してマウスの頭皮脳波センサー (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: 学ぶマウス頭皮からの非侵襲的な視覚誘発電位測定法。16チャネルのドライ型EEGセンサーを用いて、前臨床研究における動物の脳活動を安全かつ効率的に記録する手法を解説します。

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この作品は、GIST の研究所 (GRI) 2017 年に GIST の定める助成金を GIST カリフォルニア工科大学研究連携プロジェクトによる部分で支えられました。また研究助成 (NRF-2016R1A2B4015381) (MEST)、韓国政府と韓国脳研究所科学省、ICT、未来によって資金を供給 KBRI 基礎研究プログラムによって資金を供給された国立研究財団 (NRF) の支え(17-BR-04) を計画します。

アニマル ・ ケアおよび処理光州科学および技術 (GIST) の制度上の指針に続いた。
注: マウス体内視覚誘発電位信号を取得するための手順の 4 つのステップで構成されています: (1) センサー アセンブリ、(2) 動物の準備、(3) 視覚誘発電位測定、(4) 信号処理。
1. センサーのアセンブリ
<ol><li>1 つの非侵襲的な電極の 16 ピンを準備します。 注: 各ピン型電極の 3 つの部分で構成されています: プローブ ヘッド プランジャー、内部の春、図 1 aに示すように、バレル。各ピンの長さは 13 mm、および調節可能なばねの予荷重長さは 1 mm。</li>
	<li>ガラス繊維の 2 つの部分をカット (厚さ: 1.5 mm) 15 × 17 mm (幅 × 高さ) のサイズ。 注: 複数の信号を隔てる絶縁体として非伝導性ファイバーグラス基板機能はマウスの頭皮から同時に取得。</li>
	<li>直径 1.2 mm の 16 穴は精密彫刻機を使用して図 1 cに示すように。<ol>
<li>フラット基板上に 2 mm の間隔で均等にプローブ調整広がる: +7/0, +2/-2、+2/0, +2/+2、0/4, 0/-2, 0/0 (前) 0/+2 0/+4,-2/-3,-2/-1、-2/+1、-2/+3、-4/-2、-4/0、-4/+2 (mm で、前のベースにした前後/横)24,25,26。</li>
	</ol>
</li>
	<li>2 枚の基板をスタックし、即効信号集録中に 16 の安定と平行電極をサポート 3 mm 厚さの二重層を生産基板層間接着剤の一滴を適用します。</li>
	<li>手動で 1 つの基板上に 16 個の電極を組み立てます。 注: 小さい穴径は同じ長さで各電極を停止します。各穴の直径は、ゆるめることがなく電極のタイトな固定を可能にする単一のピン (1.3 mm) 内のバレルの厚い直径よりわずかに小さい。</li>
	<li>はんだ付けし、各電極のはんだカップ エンディングをタッチ防水コネクタにリンクします。</li>
	<li>カバーし、電気絶縁用熱収縮チューブと裸の接合を隠します。</li>
</ol>2. 動物の準備
<ol><li>Ketamine:xylazine 100:10 の腹腔投与でマウスの麻酔 (100 mg/mL:10 mg/mL) 体重の 10 μ L/g の量との混合物。 メモ: 確認して動物の麻酔は 1 本の足を引っ張るか、または準備を開始する前に、尻尾を調整で十分です。</li>
	<li>マウスの角膜を綿棒で湿った保つために眼軟膏を適用します。</li>
	<li>頭と肩、バリカンを周りの毛を削除し、市販の脱毛クリームを広げる 3 〜 4 分のこの領域でそれを維持します。</li>
	<li>へらで、応用の脱毛を削除、ウェット ワイプ数回水を適用することで残りの部分を拭き取ります。</li>
</ol>3. 視覚誘発電位測定
注: 測定プロセス全体の VEP に起こった暗いファラデーケージ (幅 × 奥行 × 高さ: 61 × 61 × 60 cm)。
<ol><li>脳定位固定装置のフレーム上にマウスの頭をマウントするには、マウスの耳の三半規管に耳バーを配置し、場所に正確に合っていること。</li>
	<li>特注電極ホルダー (図 1 b) にセンサーをマウントし、図 1 の dのように、固定枠にセンサー ホルダーを修正します。</li>
	<li>参照電極位置と前の位置の27の両方を考慮した柔軟な脳波センサーを探します。その後、アレイ電極プランジャー接触曲面の余白に均等にマウスの頭皮非常に慎重に垂直方向にセンサーを下げます。 注: 低下の距離はプランジャーの長さ調節は、1 mm よりも小さいです。</li>
	<li>インピー ダンスが 2 MΩ 100 kΩ から適切な範囲内にあることを確認します。ピンの任意のインピー ダンス値が28の範囲外の場合、電極の位置を変更します。</li>
	<li>写真刺激マウスの目から 20 cm の位置します。</li>
	<li>実験を始める前に暗いビジュアル アダプテーション用暗い檻の中で 10 分間マウスを合わせます。<ol>
<li>実験装置のパラメーターを次のように設定: サンプリング周波数: 500 Hzノッチ フィルター: 60 Hz刺激間間隔: 10 s;閃光時間: 10 ms。フラッシュ刺激の数: 100 試験/主題。 注: フラッシュ ライトは白色 LED 照明 20 cm の距離が 550 ± 20 %lx を持っています。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 誘発応答信号処理手順
<ol><li>
Epoching
	<ol>
<li>連続測定、シリアル ・ データ、セグメントを作成する単一試行誘発前刺激期間 (-300 ms) から後刺激期間 (600 ミリ秒) にフラッシュ刺激発症に基づく各エポックを抽出できます。 注: 我々 は繰り返し、以上 100 試験各科目のフラッシュ刺激を提供するので、各マウスの 100 の VEP 新紀元の合計はこの手順で抽出されます。脳波 epoching は、特定のタイム ウィンドウを連続的に測定された脳波信号のデータから抽出しプロセスです。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
(平均参照) の再参照します。
	<ol>
<li>時に各チャンネルがポイントし、各チャンネルから平均値を減算し、すべての 14 電極間で脳波信号の平均値を計算します。すべての VEP 新紀元のためには、この手順を繰り返します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>帯域通過を実行 1 〜 100 からの信号のフィルタ リング Hz 有限インパルス応答 (FIR) フィルターを適用します。</li>
	<li>
ベースライン補正
	<ol>
<li>前刺激期間における脳波信号の平均値を計算 (基準期間、-300 ~ 0 ms) 各チャンネルの波形の各ポイントからこの平均を引きます (-300 ~ 600 ms)。これは刺激後の脳波変化の観察を容易にする視覚誘発電位応答の振幅軸を調整します。VEP 新紀元のすべてに対してこの手順を繰り返します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
グランド誘発反応
	<ol>
<li>平均一つの主題を作成する単一試行 VEP 時代は各チャネルの視覚誘発電位波形を平均しました。すべての科目について各チャネルの視覚誘発電位応答のグランド アンサンブル平均を計算します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

著者が明らかに何もありません。

まず、複雑な手術を最小限にして実用性を優先順位付け、センサーの設計に着目。変形可能な脳波センサーは、16 ピンで構成されています: 14 記録、地面の 1 つの最後の 1 つは電極を参照します。各電極は、電極の接触面に変形を適用されるので、彼らは曲線で柔らかいマウスの頭皮から均一で安定した信号の獲得を促進するプランジャー スプリング バレル構造を持ちます。動物の福祉を考慮した29皮膚電極界面の接触面積を広げることによって、皮膚に適用される圧力を軽減することによってスプリングの力によって発生した痛みを最小限に抑えることを試みた。
全体マルチ チャネル電極から成る個々 のピンは、厚さ、長さ、プランジャーの種類、さまざまな仕様を持っているし、春の強度できます。これらのさまざまなオプションは、対象者の苦しみを和らげるために電極を設計する意図する必要があります。さらに、マップのピン配列と電極数は、実験の目的に応じて変更できます。電極ホルダーとガラス基板は、他の方法論や 3 D 印刷法30...

老人性退行性脳疾患患者の数としてよう認知症、アルツハイマー、パーキンソン症候群、脳卒中は高齢者人口と平均寿命、増加しているこれらの疾患の長期的な社会的負担が1,2,3を増やしました。さらに、統合失調症や自閉症など、ほとんどの神経発達の病気は患者の人生2,3,4に影響を与える認知・行動障害が添付されます。このため、研究者は診断や予防、病理学的理解、長期的な観察、脳疾患の治療を改善するために苦労しています。ただし、問題が残っている脳の複雑さと個性の疾患病態に由来。トランスレーショナルリサーチ神経科学分野5 で高い成功率と低コストで短い時間の枠内で臨床応用への基礎研究の転送を可能にするために、ソリューションを識別するための有望な用具であるかもしれない、6,7。トランスレーショナルリサーチの別の目標は、人間のための同じメソッドを比較ができる動物の非侵襲的な実験的アプローチを必要とする、人間の適用性を調べることです。これらの条件は、非侵襲的動物作製法を開発するためのいくつかの重要なニーズにつながっています。1 つの方法は、脳波 (EEG) 皮質頭脳の結合性と時間分解能が高いと二次元の活動を明らかに、非侵襲的なプロトコルからの利点です。事象関連電位計測 (ERP) は、脳波を利用する典型的な実験パラダイムのひとつです。
多数前研究採用非侵襲的脳波方法侵襲的方法など、インプラントのネジと極型電極に対し人間の被験者を対象に使用されている動物研究8,9,10,11,12. 信号品質とこれらの方法の特性は大幅センサー配置の侵襲性に依存しています。成功したトランスレーショナルリサーチ、ガーナー人間研究13に使用されるものとして動物実験のための同じ条件を使用して強調しました。しかし、動物を用いた基礎研究は非侵襲的な脳波の方法論は普及しているありません。実験用マウスに着目した非侵襲的な頭皮脳波センサー システムを用いた斬新なアプローチには、人間は、同様の非侵襲的なパラダイムを適用ことができますトランスレーショナルリサーチの信頼性と効率的なツールとなります。
プリント基板の製品化で数多くのマウス脳波研究を先導 (プリント回路基板) によるマルチ チャネル電極14,,1516。彼らは侵襲的な方法が採用される、大規模な脳ダイナミクスを観察しにくくしたチャンネル (3-8) の限られた数を有した。さらに、アプリケーションは、その侵襲性と高コストで制限できます。別の調査で KIST (韓国科学と技術) 40 チャンネル ポリイミド ベースの薄膜電極を開発し、マウスの頭蓋骨17,18,19,20 に接続.この作業は、マウス脳波チャンネルの最大数を取得しました。それは、しかし、機械的に弱く、簡単に再利用。したがって、それは免疫反応によって生じた、弱体化した信号につながる長期的な観測に適したでした。一方、Troncoso、Mégevand で取得した感覚誘発電位 (SEP) 齧歯動物の頭蓋骨に穴あき Poly(methyl methacrylate) (PMMA、アクリル ガラス) グリッド21,22担保 30-2 ステンレス鋼電極,23. にもかかわらず、高い信号品質電極が機械的に柔軟で柔らかい。したがって、複数の実験に適用される難しさを有した。さらに、この方法はまだ低侵襲であった。これらのメソッドは、良好な信号品質を提供する、マウスの頭蓋骨の表面の面積が限られている、したがって電極の数はステンレス ポール型電極を使用して制限。マウスの前の脳波研究の数は、いくつかの制限を示した。本研究では、非侵襲的なドライ型マルチ チャネル センサーを用いた前臨床の橋渡し研究に適用可能な脳波を測定するための新しい方法を紹介します。
動物の準備、侵襲、高コスト、無駄と機械的強度が弱いに固有の複雑さを含まれて、以前動物脳波手法の限界を克服するために我々 は表わす新しい電極を開発しよう柔軟性、乾式状態、マルチ チャネル機能、非侵襲、再利用性。次のプロトコルでは、乾燥、非侵襲的、多チャンネル脳波センサーを用いたマウス頭皮に誘発電位 (VEP) 録音を計測するプロセスについて説明します。このメソッドは、簡単に利用可能なリソース、したがって生体医工学分野における動物実験への参入障壁を下げることを利用しています。

<table><tbody><tr><td>ケタミン 50 インチ(バイアル)</td><td>ユハン</td><td>ケ</td><td>タミン HCl 57.68 mg</td></tr><tr><td>ゾレチル 50 インチ。</td><td>Virbac-Tiletamina</td><td></td> <td>125 mg/ゾラゼパム125 mg</td></tr><tr><td>Rompun 2% Inj.</td><td>バイエル</td><td>-</td><td>キシラジン塩酸塩23.32mg / mL</td></tr>ハイ<tr><td>セル溶液2%</td><td>サミル</td><td>-</td><td>ヒドロキシプロピルメチルセルロース20mgPuralube</td></tr><tr><td>獣医軟膏3.5mg</td><td>ファーマダー</td><td>ム</td>-<td></td></tr><tr><td>生理食塩水注射。</td><td>&nbsp;JWファーマシューティカル&nbsp;</td><td>-</td><td>NaCl 9 g/1000 mL</td></tr><tr><td>Veet Hair Removal Cream &ndash;レッグ&ボディ - 敏感肌</td><td>レキット ベンキーザー</td><td></td> <td>脱毛</td></tr><tr><td>用スキン - サージカルスキンマーカー</td><td>Surgmed</td><td>S-3000</td><td>STERILE - 定規とラベルセット付きマルチチップファインマーカー</td></tr><tr><td>ステンレス製マイクロスパチュラ</td><td>ヒースロー空港 SCIENTIFIC</td><td>HS15907</td><td>&nbsp;1つのラウンドフラットエンド、2L x 5 / 16W "</td></tr><tr><td>コットンスワップ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>定位固定、デスクトップDigi</td>シングル<td>RWDライフサイエンス</td><td>68025</td><td></td></tr><tr><td>マウスアダプターRWD</td><td>ライフサイエンス</td><td>68010</td><td></td></tr><tr><td>マウス非破裂</td><td>RWDライフサイエンス</td><td>68306</td><td></td></tr>ミ<tr><td>サーEEG202-24&nbsp;</td><td>MITSAR</td><td></td><td>増幅器</td></tr><tr><td>EEGStudio EEG取得ソフトウェア</td><td>MITSAR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ホワイトフラッシュ刺激装置&nbsp;</td><td>MITSAR</td><td>MITSARフラッシュ刺激装置</td><td></td></tr><tr><td>BCI2000ソフトウェア</td><td>Schalk lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>g.USBamp</td><td>g.tec</td><td>0216</td><td></td></tr><tr><td>g.Power-g.USBamp</td><td>g.tec</td><td>0247</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;441様式のまっすぐなボディ接触証拠の</td><td>コネクターPlasticsOne</td><td>441000PSW080001</td><td>441 - 000 PSW 80 " (黒)</td></tr><tr><td>標準調査</td><td>LEENO</td><td>のSK100CSW</td><td>http://www.globalinterpark.com/detail/detail?prdNo=2114277241&dispNo=001851006012</td></tr><tr><td>精密彫版工作機械</td><td>TINYROBO</td><td>TinyCNC-6060C</td><td></td></tr><tr><td>熱shireink</td><td>3M</td><td>FP301</td><td></td></tr></tbody></table>

誘発電位録画ドライの非侵襲的なマルチ チャネルを使用してマウスの頭皮脳波センサー

Visual Evoked Potential Recordings in Mice Using a Dry Non-invasive Multi-channel Scalp EEG Sensor

実験用マウスの頭皮脳波研究環境では非侵襲的な変形、および再利用可能なプランジャー スプリング バレル構造ファセットおよび金属に起因する機械的強度のためドライ型 16 チャンネル脳波センサーを設計しました材料。視覚誘発電位応答、 vivo でマウスから取得するための全体のプロセスは 4 つのステップで構成されています: (1) センサー アセンブリ、(2) 動物の準備、(3) 視覚誘発電位測定、(4) 信号処理。サブミクロン電圧信号の解像度を持つ複数のマウスから誘発反応の代表的な測定とサブ百ミリ秒時間分解能について述べる。提案手法と比較されるがより安全より便利なその他以前動物脳波取得方法の報告、信号対雑音比を向上させる方法、自由に動物の移動にこの手法を適用する方法などの問題が残っています。この手法は、簡単に利用可能なリソースを利用し、十分な信号品質の反復的な視覚誘発電位応答を示しています。したがって、このメソッドは、縦の実験的研究、非侵襲的なパラダイムを利用した信頼性の高いトランスレーショナルリサーチに利用できます。

図 2に示すように 11 のマウスから視覚誘発電位応答のアンサンブル平均を計算しました。この結果は、時間 0 秒で刺激が与えられると後刺激周期 (600 ミリ秒) に前刺激周期 (-300 ms) からこの実験を通して得られる視覚誘発電位応答を示しています。それはしばらくの間だけ信号が変動すること顕著 (300 ms 以下) 信号は後刺激期間中に時間をかけて着実に安定しながら、刺激後。さらに、14 個のチャンネルは、明らかに類似した形態とパターン29VEP の応答に基づいていくつかのグループに分類できます。このメソッドでは、脳波の時間的・空間的資質を尊重してダイナミクスの理解への洞察を提供します。
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非侵襲的な変形、かつ再利用可能なドライ型 16 チャンネル脳波センサーを考案しました。本稿では、乾燥非侵襲的な多チャンネル脳波センサーを用いたマウス頭皮上で測定信号の視覚誘発電位 (VEP) の信号処理を提案された脳波電極の製造から全体のプロセスについて説明します。

For scalp EEG research environments with laboratory mice, we designed a dry-type 16 channel EEG sensor which is non-invasive, deformable, and re-usable ...

この手順の全体的な目標は、乾燥した非侵襲的なマルチチャネルEEGセンサーを使用して、マウスの頭皮の視覚誘発電位を測定することです。この方法は、前臨床トランスレーショナル研究分野での迅速な質問に答え、ヒトと実験動物との間の非侵襲的EEG研究のシグナルギャップを埋めるのに役立ちます。この技術の主な利点は、非侵襲性であり、動物の脳波の理解を高めることです。さらに、安全で便利な実験環境を提供します。まず、1つの非侵襲的電極に対して16本のピンを準備します。15mm×17mmの大きさのガラス繊維基板を2枚カットします。次に、精密彫刻機で直径1.2mmの穴を16個開けます。次に、プローブの調整に従って、2ミリメートルの間隔で均等に平らな基板に16個の穴を開けます。2つの基板を積み重ね、基板層の間に速効性の接着剤を1滴塗布して、厚さ3mmの二重層を作成し、信号取得中に16個の安定した平行電極をサポートします。次に、16個の電極を1つずつ手動で基板に組み立てます。はんだ付けし、各電極の終端はんだキャップ部分をタッチプルーフコネクタにリンクします。最後に、露出した接合部を電気絶縁用の熱収縮チューブで覆って隠します。麻酔をかけたマウスに、角膜を湿らせておくために綿棒で眼軟膏を塗布することから始めます。バリカンで頭と肩の周りの毛を取り除きます。次に、市販の脱毛クリームを広げ、この領域に3〜4分間置いておきます。最後に、適用された脱毛剤をへらで取り除き、次にウェットワイプで残りを拭き取り、水を数回適用します。まず、マウスの頭を定位固定装置フレームに取り付けます。まず、マウスの耳道にイヤーバーを配置し、所定の位置に締めます。センサーをカスタムメイドの電極ホルダーに取り付けます。次に、センサーホルダーを脳定位固定装置フレームに固定します。柔軟な脳波計(EEGセンサー)は、参照電極とブレグマの位置を考慮して配置します。次に、センサーを垂直方向に慎重に下げて、配列された電極プランジャーがマウスの頭皮を湾曲したマージンに均等に接触させます。インピーダンスが100キロオームから2メガオームまでの適切な範囲内にあることを確認します。インピーダンス値が範囲外の場合は、電極を再配置します。次に、フォトティミュレーターをマウスの目から20センチ離して配置します。サンプリング周波数が500ヘルツ、ノッチフィルタリングが60ヘルツ、刺激間間隔が10秒、フラッシュ持続時間が10ミリ秒、および被験者あたり100回の試行でフラッシュ刺激の数になるように、実験デバイスのパラメータを設定します。最後に、EEG記録を開始する前に、マウスを暗いケージ内で10分間適応させて、暗い視覚適応を行います。平均視覚誘発電位反応は、刺激後の信号変動が最小限で、持続時間が300ミリ秒未満であることを示しています。シグナルは、刺激後の期間中、時間の経過とともに着実に安定します。さらに、14のチャネルは、VEP応答に基づいていくつかのグループに分類でき、同様の形態とパターンが明らかになります。このテクニックは、一度マスターすれば1時間で完成させることができます。この手順を試みるときは、動物の麻酔状態を確認することを忘れないでください。この手順を脳刺激療法や表面深部電気生理学的記録などの他の方法と組み合わせることで、脳刺激パラメータの最適化や発生源のローカリゼーションなどの追加の質問に答えることができます。その開発後、この技術は、トランスレーショナルリサーチ分野の研究者が、侵襲的な外科的準備なしで、基礎科学研究を人間の脳研究に匹敵する信頼性と効率的な研究に結びつける道を開きました。このビデオを見れば、柔軟性、ドライタイプステータス、マルチチャネル機能、非侵襲性、再利用性などの利点を持つ新しい電極を使用して、マウスの頭皮の視覚誘発電位を測定する方法について十分に理解できるはずです。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

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学ぶマウス頭皮からの非侵襲的な視覚誘発電位測定法。16チャネルのドライ型EEGセンサーを用いて、前臨床研究における動物の脳活動を安全かつ効率的に記録する手法を解説します。

誘発電位録画ドライの非侵襲的なマルチチャネルを使用してマウスの頭皮脳波センサー

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