Capillary Electrophoresis-based Hydrogen/Deuterium Exchange for Conformational Characterization of Proteins with Top-down Mass Spectrometry

Lingxiao Chaihu; Xiaopeng Yao; Xiang Xu; Zhongqin Zhu; David D. Y. Chen; Guanbo Wang

doi:10.3791/62672

トップダウン質量分析によるタンパク質の立体構造特性評価のためのキャピラリー電気泳動ベースの水素/重...

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Chemistry

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Capillary Electrophoresis-based Hydrogen/Deuterium Exchange for Conformational Characterization of Proteins with Top-down Mass Spectrometry

トップダウン質量分析によるタンパク質の立体構造特性評価のためのキャピラリー電気泳動ベースの水素/重水素交換

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05:45 min

June 8, 2021

DOI: 10.3791/62672-v

Lingxiao Chaihu^1,2, Xiaopeng Yao¹, Xiang Xu^1,2, Zhongqin Zhu¹, David D. Y. Chen³, Guanbo Wang¹

¹School of Chemistry and Materials Science,Nanjing Normal University, ²Institute for Cell Analysis,Shenzhen Bay Laboratory, ³Department of Chemistry,University of British Columbia

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ここでは、キャピラリー電気泳動ベースの水素/重水素交換(HDX)アプローチとトップダウン質量分析を組み合わせたプロトコルを紹介します。このアプローチは、同時差動HDXおよび電気泳動分離を行うことによって、異なる状態および異なるプロテオ形態のタンパク質を含む、異なるタンパク質種間の高次構造の違いを特徴付ける。

この方法により、異なるコンフォーマーまたはバリアントを含む共存するタンパク質種の分離と、それらの高次構造の違いのオンライン特性評価を単一のCEMS測定で完了することができます。電気泳動効果を利用して、HDX反応のためのほぼ100%の持続時間環境を提供し、トップダウンMS分析のためのHDX中の共存タンパク質種の直交分離を提供します。キャピラリー電気泳動の事前調整、水素交換、またはCE HDXセットアップから始めます。

50%メタノール、49%水および1%ギ酸の混合物中で超音波処理を使用して、室温で少なくとも30分間、マイクロバイアルCE-MS界面を通る流れをきれいにする。HPC修正キャピラリーをキャピラリー電気フェレーシスまたはCE装置に取り付けます。オートサンプラーを使用して、キャピラリーをバックグラウンド電解質溶液またはBGEで10分間すすぎ、BGEで満たしたままにします。

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