Wistarアルビノラットにおける大腿骨骨切り術モデルを開発するためのプロトコル

この大腿骨骨切り術モデルは、研究者が骨折治癒のプロセスを研究し、薬物が骨折治癒にどのように影響するかを評価するのに役立ちます。これは、研究者が薬物に骨治癒特性があるかどうかを特定し、その作用機序を理解するのに役立つ、シンプルでわかりやすいげっ歯類モデルです。主に骨折治癒の観察と分析に焦点を当てていますが、病気の病因についての洞察を与えることもできます。

この方法は、健康と病気における骨治癒に関する将来の研究を導くことができます。潜在的な骨同化薬の効果を評価するために使用できます。適切な破壊線を誘導し、Kワイヤで骨折を固定することは困難です。

いくつかの練習セッションが役立つはずです。この方法のシンプルさと再現性は、その視覚的なデモンストレーションで明らかです 私の研究室のジュニアレジデントであるパワンパガクは、手順のデモンストレーションに役立ちます。はじめに、手術台の上に2.5センチメートルの深さまでワックスを含むワックスブロックを置き、滅菌ドレープでそれを覆います。

右大腿部の外側を1センチ垂直に皮膚切開した後、メッツェンバウムハサミで深部筋膜を分離し、外側広筋を露出させます。大腿骨の軸に達するまで、筋線維に沿って外側広筋を分割します。次に、骨膜エレベーターを使用して、骨に付着している筋肉から骨を解放します。

骨膜内およびその周囲に局所麻酔を注入した後、15番の手術刃を使用して大腿骨のシャフトの中央3分の1にくぼみを作成します。くぼみにノミを置き、ハンマーでノミを軽くたたいて、シャフトの中央3分の1の骨を完全に骨折します。電池式の電動ドリルの助けを借りて保持された1ミリメートルの滅菌Kワイヤーを使用して骨折を内部で固定します。

Kワイヤーを骨折部位を通って遠位断片の髄管に通します。次に、大腿骨の遠位端からKワイヤーをドリルアウトします。骨折を減少させた後、転子領域で購入が得られるまで、Kワイヤを遠位端から近位断片の管に進めます。

ワイヤーカッターを使用して、皮膚から突き出ているKワイヤーの遠位部分を切り取ります。ペンチを使用してKワイヤーの先端を約90度に曲げ、ベタジンに浸したガーゼ包帯を使用してピンサイトのドレッシングを行います。Kワイヤーは、骨折を縮小した位置に保つための髄内スプリントとして機能します。

滅菌ガーゼまたは動脈鉗子を使用して出血領域に圧力をかけ、出血を止めます。4-0ナイロン縫合糸を使用して皮膚を閉じる前に、完全な止血を確認してください。ベタジンで傷をきれいにし、滅菌ガーゼとマイクロポア粘着テープで覆います。

術後のケアのために、ラットをケージに戻し、手順後5日間、標準的な半合成食、抗生物質、鎮痛薬を腹腔内投与し続けます。最後に、骨折部位のX線による骨治癒を週に一度評価します。骨折を誘発する前と手術後1日目のK線NC2によるラット大腿骨のX線写真がここに示されています。

骨折の治癒は、カルス形成を評価するために手術部位の連続した毎週のX線を撮影することによって放射線学的に監視されます。骨折は縮小されたままであり、髄内Kワイヤーで固定されています。所定の時点で屠殺した後、大腿骨をホルマリンで注意深く保存し、続いて骨を脱灰した。

カルスを有する骨は、最適な脱灰後に得られた。無傷のカルス、およびカルスの矢状セクションがここに示されています。カルスは、他の技術を使用して評価する前に、最適な脱灰を確実にするために断続的に評価されます。

骨折部位のヘマトキシリンおよびエオジン染色切片の低倍率および高倍率像を以下に示す。骨折部位の染色された切片は、軟骨および新しい骨の形成を伴う硬いカルスを示す。骨の骨折した端と2番目の皮質領域がここで見ることができます。

骨膜は創傷の最も疼痛感受性の部分であり、骨切り術の前に局所麻酔薬を用いて骨折部位の骨膜に浸潤することが必須である。その後、カルスの免疫組織化学的および放射線学的分析、定量的組織形態測定のためのマイクロCT、血清のカルス分析の生体力学的強度の分析を行うことができます。この技術は、有望な骨同化薬の発生可能性、作用機序、および比較分析を決定するのに役立ちます。