マウスにおける連続局所キメラ抗原受容体(CAR)T細胞注入のための頭蓋内カニューレ移植

このプロトコルは、中枢神経系腫瘍を対象としたCAR-T細胞療法の局所局所送達をテストするために進行中の臨床試験で使用される脳室内カテーテルシステムを複製します。この技術の主な利点は、複数の侵襲的外科的処置を行うことなく、局所局所CAR T細胞療法の複数回反復投与を提供できることです。このシステムは、異なる送達部位の異なる治療法を調査するために使用でき、したがって、神経科学の無数の研究分野への洞察を提供する可能性があります。

まず、頭を坊主した麻酔をかけたマウスを手術台に置き、ヘラを使って定位アームの底をそっと開きます。カニューレを鉗子で挿入し、白いプラスチック部分の半分から3分の2、カニューレの5ミリメートルが開口部の底から突き出るまでアームのネジを締めて固定します。マウスの上歯を脳定位固定装置のバイトバーに挿入して固定します。

ノーズコーンを前方に引いて締め、マウスがイソフルランを吸入することを確認します。次に、過度の圧力を避けて、イヤーカフまたはイヤーバーを使用して、温められた定位固定装置にマウスを取り付けます。手術部位を消毒し、原稿に記載されているように頭蓋骨と平行に切り込みを入れます。

綿先綿棒を使用して筋膜を押しのけます。頭蓋板が出会う前部と後部のマークに対応する頭蓋骨のランドマーク、ブレグマとラムダを特定します。アクリルを取り付けるための表面を作成するには、メスを使用して頭蓋骨全体にいくつかのスリットをそっと作成します。

定位固定アームを使用して、カニューレを目的のランドマークにローカライズします。カニューレの先端を頭蓋骨の表面から1〜2ミリメートル上に上げ、目的の座標に移動します。18ゲージの針または外科用ドリルを使用して、カニューレが入る場所から離れた露出した頭蓋骨に2つのネジ穴を開け、カニューレ用の十分なスペースを確保します。

頭蓋骨に取り付けられるまでドリルをネジ穴にねじります。マイナスドライバーを使用して、2本のネジを穴に挿入して固定します。次に、ネジをそっと引き上げて、ネジが固定されていることを確認します。

カニューレを挿入するには、18ゲージの針または外科用ドリルを使用して、識別された座標で頭蓋骨に穴を開けます。定位アームを使用して、カニューレを目的のDV座標まで下げます。磁器の12ウェルプレートに約0.3グラムのアクリル樹脂粉末と10〜15滴の液体を入れて、調製した粘性のある白色材料を1ミリリットルのシリンジに入れます。

頭蓋骨をコーティングし、カニューレとネジの周りのスペースを埋めます。セメントが柔軟である間に定位アームのネジを緩めます。スパチュラをそっと使用して、下部開口部のホルダーからカニューレを解放し、定位アームをマウスから引き離します。

セメントが乾いたら、ダミーのカニューレをガイドカニューレに挿入し、時計回りに回転させてしっかりと固定します。手順が完了したら、マウスを温めたホームケージに戻して回復させます。治療用カニューレを準備するには、その上部をPKGチューブに挿入します。

次に、治療用シリンジにCAR T細胞懸濁液を満たし、治療用カニューレの上部を覆うPKGチューブのもう一方の端に挿入します。マウスを麻酔した後、鉗子を使用してガイドカニューレを基部に固定します。ダミーカニューレを緩めて取り外し、ガイドカニューレにアクセスできるようにします。

CAR T細胞を1分間注入し、治療用カニューレをさらに1分間所定の位置に保持します。治療用カニューレを取り外した後、ダミーのカニューレをしっかりとねじ込みます。次に、疼痛管理のためにメロキシカムを皮下投与する。

GPC2指向性CAR T細胞療法は、髄芽腫において有意な腫瘍退縮を誘導し、視床びまん性正中線神経膠腫モデルにおいて有意に生存期間を延長した。ガイドカニューレを腫瘍内の場所に挿入する場合、ダミーおよび治療用カニューレの突起長を説明するために、背側と腹側の座標が腫瘍注射よりも表面的である可能性があることを理解することが重要です。