Name: マウスにおける腹腔組織常在マクロ ファージの 効率的な遺伝子およびマイクロRNA調節のためのレンチウイルスベクター調製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: 学ぶレンチウイルスベクター調製法を用いたマウス腹腔組織常在マクロファージの遺伝子機能解析。この手法は免疫代謝と疾患予防研究に応用可能です。

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<meta charset="utf8"></head><body>In vivo遺伝子調節のためのレンチウイルスベクター調製

<ol><li>Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+biology+in+development%2C+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Macrophage biology in development, homeostasis and disease.</a> Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).</li>
<li>Jantsch, J., Binger, K. J., Muller, D. N., Titze, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+homeostatic+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in homeostatic immune function.</a> Front Physiol. 5, 146(2014).</li>
<li>Wynn, T. A., Vannella, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+tissue+repair%2C+regeneration%2C+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages in tissue repair, regeneration, and fibrosis.</a> Immunity. 44 (3), 450-462 (2016).</li>
<li>Ginhoux, F., Guilliams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+ontogeny+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage ontogeny and homeostasis.</a> Immunity. 44 (3), 439-449 (2016).</li>
<li>Epelman, S., Lavine, K. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+functions+of+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Origin and functions of tissue macrophages.</a> Immunity. 41 (1), 21-35 (2014).</li>
<li>Amit, I., Winter, D. R., Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+local+environment+and+epigenetics+in+shaping+macrophage+identity+and+their+effect+on+tissue+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the local environment and epigenetics in shaping macrophage identity and their effect on tissue homeostasis.</a> Nat Immunol. 17 (1), 18-25 (2016).</li>
<li>Gosselin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+drives+selection+and+function+of+enhancers+controlling+tissue-specific+macrophage+identities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Environment drives selection and function of enhancers controlling tissue-specific macrophage identities.</a> Cell. 159 (6), 1327-1340 (2014).</li>
<li>Lavin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+enhancer+landscapes+are+shaped+by+the+local+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage enhancer landscapes are shaped by the local microenvironment.</a> Cell. 159 (6), 1312-1326 (2014).</li>
<li>Davies, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+tissue-resident+macrophages+are+metabolically+poised+to+engage+microbes+using+tissue-niche+fuels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Peritoneal tissue-resident macrophages are metabolically poised to engage microbes using tissue-niche fuels.</a> Nat Commun. 8 (1), 2047(2017).</li>
<li>Shi, J., Hua, L., Harmer, D., Li, P., Ren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre+driver+mice+targeting+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cre driver mice targeting macrophages.</a> Methods Mol Biol. 1784, 263-275 (2018).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+lentiviral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Recent advances in lentiviral vectors for gene therapy.</a> Sci China Life Sci. 64 (11), 1842-1857 (2021).</li>
<li>Kosaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus-based+gene+delivery+in+mouse+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Lentivirus-based gene delivery in mouse embryonic stem cells.</a> Artif Organs. 28 (3), 271-277 (2004).</li>
<li>Naldini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+gene+delivery+and+stable+transduction+of+nondividing+cells+by+a+lentiviral+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector.</a> Science. 272 (5259), 263-267 (1996).</li>
<li>Yamashita, M., Emerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsid+is+a+dominant+determinant+of+retrovirus+infectivity+in+nondividing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Capsid is a dominant determinant of retrovirus infectivity in nondividing cells.</a> J Virol. 78 (11), 5670-5678 (2004).</li>
<li>Wilson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+delivery+of+RNAi+for+in+vivo+lineage-specific+modulation+of+gene+expression+in+mouse+lung+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Lentiviral delivery of RNAi for in vivo lineage-specific modulation of gene expression in mouse lung macrophages.</a> Mol Ther. 21 (4), 825-833 (2013).</li>
<li>Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicular+stomatitis+virus+G+glycoprotein+pseudotyped+retroviral+vectors%3A+concentration+to+very+high+titer+and+efficient+gene+transfer+into+mammalian+and+nonmammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 90 (17), 8033-8037 (1993).</li>
<li>Finkelshtein, D., Werman, A., Novick, D., Barak, S., Rubinstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDL+receptor+and+its+family+members+serve+as+the+cellular+receptors+for+vesicular+stomatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">LDL receptor and its family members serve as the cellular receptors for vesicular stomatitis virus.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (18), 7306-7311 (2013).</li>
<li>Ipseiz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+in+vivo+gene+modification+in+mouse+tissue-resident+peritoneal+macrophages+by+intraperitoneal+delivery+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Methods+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">Effective in vivo gene modification in mouse tissue-resident peritoneal macrophages by intraperitoneal delivery of lentiviral vectors.</a> Mol Ther Methods Clin Dev. 16, 21-31 (2020).</li>
<li>Rosas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+Gata6+links+tissue+macrophage+phenotype+and+proliferative+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The transcription factor Gata6 links tissue macrophage phenotype and proliferative renewal.</a> Science. 344 (6184), 645-648 (2014).</li>
<li>BeckmanCoulter. , https://www.mybeckman.uk/resources/technologies/centrifugation/principles/rotor-balancing (2023).</li>
<li>JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Rodent+Handling+and+Restraint+Techniques%22">Rodent Handling and Restraint Techniques</a>. , JoVE, Cambridge, MA. (2023).</li>
<li>Zufferey, R., Nagy, D., Mandel, R. J., Naldini, L., Trono, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiply+attenuated+lentiviral+vector+achieves+efficient+gene+delivery+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiply attenuated lentiviral vector achieves efficient gene delivery in vivo.</a> Nat Biotechnol. 15 (9), 871-875 (1997).</li>
<li>Nasri, M., Karimi, A., Allahbakhshian Farsani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+purification+and+titration+of+a+lentivirus-based+vector+for+gene+delivery+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Production, purification and titration of a lentivirus-based vector for gene delivery purposes.</a> Cytotechnology. 66 (6), 1031-1038 (2014).</li>
<li>Optimized production and concentration of lentiviral vectors containing large inserts. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22J+Gene+Med%22">J Gene Med</a>. al Yacoub, N., Romanowska, M., Haritonova, N., Foerster, J. 9 (7), 579-584 (2007).</li>
<li>Malim, M. H., Bieniasz, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+restriction+factors+and+mechanisms+of+evasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">HIV restriction factors and mechanisms of evasion.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (5), a006940(2012).</li>
<li>Sonza, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+human+monocytes+to+HIV+type+1+infection+in+vitro+is+not+dependent+on+their+level+of+CD4+expression%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Res+Hum+Retroviruses%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of human monocytes to HIV type 1 infection in vitro is not dependent on their level of CD4 expression.</a> AIDS Res Hum Retroviruses. 11 (7), 769-776 (1995).</li>
<li>Kingston, R. E., Chen, C. A., Rose, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+phosphate+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Calcium phosphate transfection.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter 9, Unit 9.1(2003).</li>
<li>Brown, L. Y., Dong, W., Kantor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Improved+protocol+for+the+production+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">An Improved protocol for the production of lentiviral vectors.</a> STAR Protoc. 1 (3), 100152(2020).</li>
<li>Moce-Llivina, L., Jofre, J., Muniesa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+polyvinylidene+fluoride+and+polyether+sulfone+membranes+in+filtering+viral+suspensions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of polyvinylidene fluoride and polyether sulfone membranes in filtering viral suspensions.</a> J Virol Methods. 109 (1), 99-101 (2003).</li>
<li>Jiang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+method+for+high-titer+lentivirus+preparations+without+ultracentrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">An optimized method for high-titer lentivirus preparations without ultracentrifugation.</a> Sci Rep. 5, 13875(2015).</li>
<li>Czubala, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGFbeta+induces+a+SAMHD1-independent+post-entry+restriction+to+HIV-1+infection+of+human+epithelial+langerhans+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">TGFbeta induces a SAMHD1-independent post-entry restriction to HIV-1 infection of human epithelial langerhans cells.</a> J Invest Dermatol. 136 (10), 1981-1989 (2016).</li>
<li>Bouabe, H., Okkenhaug, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+targeting+in+mice%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene targeting in mice: a review.</a> Methods Mol Biol. 1064, 315-336 (2013).</li>
<li>Kim, J. M., Rasmussen, J. P., Rudensky, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+prevent+catastrophic+autoimmunity+throughout+the+lifespan+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells prevent catastrophic autoimmunity throughout the lifespan of mice.</a> Nat Immunol. 8 (2), 191-197 (2007).</li>
<li>Decalf, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensing+of+HIV-1+entry+triggers+a+Type+I+Interferon+response+in+human+primary+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Sensing of HIV-1 entry triggers a Type I Interferon response in human primary macrophages.</a> J Virol. 91 (15), e00147-e00217 (2017).</li>
<li>Wilson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amelioration+of+emphysema+in+mice+through+lentiviral+transduction+of+long-lived+pulmonary+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Amelioration of emphysema in mice through lentiviral transduction of long-lived pulmonary alveolar macrophages.</a> J Clin Invest. 120 (1), 379-389 (2010).</li>
<li>Markusic, D. M., van Til, N. P., Hiralall, J. K., Elferink, R. P., Seppen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+liver+macrophage+transduction+by+pseudotyping+lentiviral+vectors+with+a+fusion+envelope+from+Autographa+californica+GP64+and+Sendai+virus+F2+domain%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Reduction of liver macrophage transduction by pseudotyping lentiviral vectors with a fusion envelope from Autographa californica GP64 and Sendai virus F2 domain.</a> BMC Biotechnol. 9, 85(2009).</li>
<li>Burke, B., Sumner, S., Maitland, N., Lewis, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+gene+therapy%3A+cellular+delivery+vehicles+and+in+vivo+targets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in gene therapy: cellular delivery vehicles and in vivo targets.</a> J Leukoc Biol. 72 (3), 417-428 (2002).</li>
<li>Bain, C. C., Jenkins, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+serous+cavity+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">The biology of serous cavity macrophages.</a> Cell Immunol. 330, 126-135 (2018).</li>
<li>Milone, M. C., O'Doherty, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+use+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Clinical use of lentiviral vectors.</a> Leukemia. 32 (7), 1529-1541 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.05% トリプシン-EDTA (1x) (トリプシン 500 mg/L または 0.02 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &mu;m 滅菌 ミリックス GPフィルター</td><td>メルク</td><td>SLGS033SS</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &mu;m 滅菌 millex GP フィルター</td><td>Merck</td><td>SLHP033RS</td><td></td></tr><tr><td>0.5 mL U-100 インスリン注射器 針付き, 0.33 mm x 12.7 mm (29 G)</td><td>BD</td><td>324892</td><td></td></tr><tr><td>1 Litre Sharps Container</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>2.4G2 抗体 (TruStain FcX anti-mouse CD16/32)</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu;m ストレーナー</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>AimV 培地 (研究グレード)、AlbuMax Supplement</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>31035025</td><td></td></tr><tr><td>ブロッキングバッファー</td><td>社内</td><td></td><td></td>で調製</tr><tr><td>Brewer チオグリコール酸培地</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2551</td><td>4% ストック溶液を水中で調製し、オートクレーブ滅菌して冷凍保存。</td></tr><tr><td>CD11b</td><td>Biolegend</td><td>101222</td> CD11b BDの<td>希釈および濃度については表1を参照</td></tr><tr><td></td><td></td><td>550993</td><td></td></tr><tr><td>CD11c</td><td>Biolegend</td>の希釈<td>および濃度については表1を参照</td><td>117317</td></tr><tr><td>CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117333</td> CD19 <td>BDの希釈および濃度については表1を参照</td></tr><tr><td></td><td></td><td>560375</td><td>CD19</td></tr><tr><td>Biolegend</td><td>152410</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD226</td><td>Biolegend</td><td>128808</td> CD3e BD の希釈<td>と濃縮については表1</td></tr>を参照 560527 CD3e Biolegend の<tr><td></td><td></td><td></td><td>希釈と濃縮については表1を参照</td></tr><tr><td></td><td></td><td>152313</td><td>希釈と濃縮については表1を参照してください</td></tr><tr><td>CD4</td><td>バイオレジェンド</td><td>100412</td><td>希釈と濃縮については表1を参照してください</td></tr><tr><td>CD73</td><td>eBioscience</td><td>16-0731-82</td><td>希釈と濃縮については表1を参照してください</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>eBioscience</td><td>48-0081-82</td><td>希釈と濃縮については表1を参照してください</td></tr><tr><td>細胞培養フラスコ(T175 fask、175 cm2、 550 mL)</td><td>Greiner Bio One</td><td>658175</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離チューブ、円錐底チューブ 25 mm x 89 mm</td><td>ベックマン・コールター</td><td>358126</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>ベックマン・コールター</td><td></td><td>超遠心分離機およびTC遠心分離機</td></tr><tr><td>コラゲナーゼIV型</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>円錐形遠心チューブ(15 mLおよび50 mL)</td><td>Greiner Bio One</td><td>11512303 & 11849650</td><td></td></tr><tr><td>クライオチューブ</td><td>Greiner Bio One</td><td>123277</td><td>または クライオチューブ</td></tr><tr><td>DMEM ミディアム (1x) + 4.5g/L D-グルコース、400 & マイクロ;M L-グルタミン</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>41965-062</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>エフェフェクテントランスフェクション試薬</td><td>Qiagen</td><td>301425</td><td></td></tr><tr><td>F4/80</td><td>バイオレジェン</td>ド <td>123123</td><td>希釈と濃度については表1を参照</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>バイオレジェン</td>ド <td></td><td>123133 希釈と濃度については表1を参照</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>バイオレジェンド</td><td>123147</td><td>希釈と濃度については表1を参照</td></tr><tr><td>FceR1</td><td>eBioscience</td><td>48-5898-80</td><td>希釈と濃度については表1を参照</td></tr><tr><td>子牛胎児血清(FCS)&nbsp;</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>10270-106</td>は<td>、56°Cで30分間不活性化されます。Cおよび滅菌済み0.22 &mu;mフィルター</td></tr><tr><td>フローサイトメーター</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp;Attune NxT</td><td></td></tr><tr><td>フローサイトメトリー(FACS)バッファー</td><td>社内</td><td></td><td></td>で調製</tr><tr><td>蛍光組織培養顕微鏡</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>EVOS FL</td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A ユーザーの好み</td></tr><tr><td>ハンクの平衡塩溶液 (HBSS)</td> <td>Gibco, Life Technologies</td><td>14175-053</td><td></td></tr><tr><td>HEK293T細胞株</td><td></td><td></td><td>トランスフェクション前に少なくとも1週間成長しました。マイコプラズマフリー</td></tr><tr><td>HIV-1 コア抗原</td><td>ベックマン・コールター</td><td>6604667</td><td></td></tr><tr><td>ヒアルロニダーゼ</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>ハイドレックス サージカルスクラブ、クロルヘキシディング グルコン酸 4% w/v スキンクレンザー</td><td>エコラボ</td><td>3037170</td><td></td></tr><tr><td>I-A/I-E</td><td>バイオレジェンド</td><td>107625</td><td>希釈と濃度については表1を参照してください</td></tr><tr><td>ICAM1</td><td>ベクトン・ディキンソン</td><td>554970</td><td></td></tr><tr>使用前に少なくとも 1 週間前に増殖した<td>Jurkat T 細胞株</td><td></td><td></td>の希釈および濃度については、表 1 を参照してください<td>。マイコプラズマフリー</td></tr><tr><td>LIVE/DEAD 固定可能な近赤外死細胞染色キット</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>L34975</td><td></td></tr><tr><td>Ly6G</td><td>バイオレジェンド</td><td></td><td>127615 希釈と濃度については表1を参照してください</td></tr><tr><td>ここで</td><td></td><td></td><td>マウスはC57BL/6女性を使用し、8-12週齢(チャールズリバーズ)、特に指定がない限り</td></tr><tr><td>マイクロキャピラリーピペット(容量範囲0.5-1,000 &mu;L)</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&スターラボ</td><td>11963466 & 11943466 & 11973466 &S1111-3700</td><td></td></tr><tr><td>NK1.1</td><td>バイオレジェン</td>ド <td>108724</td> PBS pCMV-&Deltaで2% w / vに調製したパラホルムアルデヒドSigma-Aldrich P6148-500G<td>の希釈と濃度については、表1を参照してください</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>。R8.91パッケージングプラスミド</td><td></td><td>Zuffrey, R., et al. 1997</td><td>は、サイトメガロウイルスプロモーターによって駆動されるGag−Pol HIVタンパク質をコードする。アンピシリン耐性。</td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン (100x, 10,000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish</td><td>Greiner Bio One</td><td>664160</td><td></td></tr><tr><td>pHR'SIN-cPPT-SEW plasmid</td><td></td><td>Rosas, M. et al. 2014</td><td>modified for shRNA and miR expression studies.EGFPマーカーの下流SFFVプロモーターおよびウッドチャック肝炎ウイルスエンハンサーの上流をコードします。アンピシリン耐性。</td></tr><tr><td>pMD2.Gプラスミド</td><td></td><td>Naldini, L. et al. 1996</td><td>は、水疱性気孔炎ウイルスg-糖タンパク質(VSV-G)エンベロープをコードしています。アンピシリン耐性。</td></tr><tr><td>ラットIgG1、およびκ;アイソタイプコントロール</td><td>Becton Dickinson</td><td>550617</td><td>希釈および濃度については表1を参照してください</td></tr><tr><td>ラット血清</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R9759-10ML</td><td></td></tr><tr>社内<td>で調製した</td><td></td><td></td><td>赤血球ACK溶解緩衝液</td></tr><tr><td>RPMI 1640培地(1x)+ 400 uM L-グルタミン</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>21875-091</td><td></td></tr><tr><td>サポニン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4521</td><td></td></tr><tr><td>SiglecF</td><td>BD</td><td>562681</td><td>希釈と濃度については表1を参照してください</td></tr><tr><td>次亜塩素酸ナトリウム錠(漂白剤、2,000 ppm)</td><td>ゲストメディカル</td><td>H8818</td><td></td></tr><tr><td>滅菌 24 ウェル細胞培養プレート</td><td>Greiner Bio One</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>滅菌ダルベッコのPBS(DPBS)(1x)Mg++およびCa2+フリー</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>滅菌済み EDTA</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>滅菌済み VWR ディスポーザブルトランスファーピペット (23.0 mL, 30 cm)</td> <td>VWR</td><td>612-4515</td><td></td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>15503022</td><td></td></tr><tr><td>手術用ハサミ</td><td>N/</td><td>A N/A</td><td>ユーザー希望</td></tr><tr><td>シリンジ (50 mL および 1 0mL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10084450 & 768160</td><td></td></tr><tr><td>Tim4</td><td>Biolegend</td><td>130007</td> U底96ウェル細胞培養プレート Greiner Bio One 650180 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>の希釈と濃縮については、表 1 を参照してください</tbody></table>。

マウスにおける腹腔組織常在マクロ ファージの 効率的な遺伝子およびマイクロrna調節のためのレンチウイルスベクター調製

Lentiviral Vector Preparation for Efficient Gene and MicroRNA Modulation of Peritoneal Cavity Tissue&#45;Resident Macrophages In Vivo in Mice

マウスにおける腹腔組織常在マクロ ファージの 効率的な遺伝子およびマイクロRNA調節のためのレンチウイルスベクター調製

Peritoneal tissue-resident macrophages have broad functions in the maintenance of homeostasis and are involved in pathologies within local and neighboring ...

lentiviral-vector-preparation-for-efficient-gene-microrna-modulation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

マイクロRNAは、脳の構造と機能に重要な役割を持っている。ここでは、設計されたmiRNAの発現レンチウイルスの定位注射を使用して過剰発現海馬のmiRNAを強制する方法について説明します。このアプローチは、評価するための比較的急速な方法として役立つことができる...

の定位注入マイクロRNA発現マウス海馬CA1領域にレンチウイルスと行動アウトカムの評価

このプロトコルでは、Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle...

マウスマクロファージにおける先天性免疫応答を調査するために、RNA干渉を使用

ここでは、マウスの腹膜マクロファージを単離するための簡単なプロトコルについて説明します。この手順に続いてRNAを抽出し、Toll様受容体刺激による遺伝子発現解析を行います。...

Toll様受容体刺激時の遺伝子発現解析を行うためにマウス腹腔マクロファージの単離

トランスポゾン ベースの統合のベクトルの流体尾静脈注射によりマウス肝細胞の安定したトランスフェクション体内。長期的な単一遺伝子の発現や遺伝子や肝臓でミール shRNA の組み合わせ構成とドキシサイクリン誘導式ことができますトランスフェクション...

流体の尾静脈注射を使用してマウス肝細胞の生体内で遺伝的変更の構成および誘導システム

ここでは、受精卵母細胞の囲卵腔のレンチウイルスベクターの単純な注射によって transgene の統合および創設者トランスジェニック マウスに高効率の生産を促進するためにプロトコルを提案する.

レンチ ウイルス媒介トランスジェニック マウスの生産: シンプルで高効率な創設者の直接の研究法

この記事では骨髄での蛍光融合蛋白質の表現のための詳しいプロトコル由来樹状細胞とマクロファージを提供します。手法は骨髄の伝達レトロ ウイルス構造続いてマクロファージへの分化と樹状に前駆細胞の in...

マウス骨髄由来の樹状細胞とマクロファージの蛍光融合タンパク質の発現

ポリエチレンイミン (PEI) を使用しての方法を述べる-siRNA 株マクロファージの超常磁性酸化鉄ナノ粒子をコーティングします。これらのナノ粒子は効率的に大食細胞の体外および体内と沈黙のターゲット遺伝子の発現を siRNA...

小さい干渉の RNA のマクロファージへの配信のための車両としてポリエチレンイミン被覆された酸化鉄ナノ粒子の in VitroとIn Vivo

編集を表す DNA エピゲノム強力な治療アプローチを対象としました。このプロトコルは、生産、精製、ひと誘導多能性幹細胞 (こと) のエピゲノム編集アプリケーションに CRISPR dCas9 DNMT3A 遺伝子をかくまっているオール ・ イン ・ ワン...

レンチウイルスベクター人間にエピゲノム編集ツールの効率的な配信用誘導多能性幹細胞由来の疾患モデル

マクロファージ、特に一次マクロファージは、非自己起源の分子の検出に特化しているため、トランスフェクトに挑戦しています。プラスミドなどのDNAテンプレートから生成されたmRNAを用いた一次マクロファージの高効率トランスフェクションを可能にするプロトコルについて説明する。...

インビトロ転写mRNAによる一次マクロファージの高効率トランスフェクション

本プロトコルは、遺伝子治療のために間葉系幹細胞(MSC)由来の細胞外小胞バイオミメティクスを製造・精製する方法を導入することを目的としています。ナノ小胞はMSC由来の脂質二重層に閉じ込められ、目的遺伝子を保持する組換えAAVを腔内に封じ込めています。このナノベシクルは生 体内...

遺伝子送達の強化を目的とした間葉幹細胞膜包覆ナノ小胞の開発

学ぶレンチウイルスベクター調製法を用いたマウス腹腔組織常在マクロファージの遺伝子機能解析。この手法は免疫代謝と疾患予防研究に応用可能です。

マウスにおける腹腔組織常在マクロファージの効率的な遺伝子およびマイクロRNA調節のためのレンチウイルスベクター調製

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