キャピラスコープ法を用いたマウスの爪床微小血管形態の非侵襲的可視化

私たちの研究室の関心の1つは、神経変性疾患における血管機能障害です。私たちは、毛細血管鏡検査によって末梢微小血管の病理を検出および監視し、中枢神経系疾患におけるその潜在的な役割についての洞察を得ることを目指しています。動物の微小血管機能障害の検出は、多くの場合、侵襲的で、ex vivoで実施され、または費用がかかります。このプロトコルを使用すると、研究者は爪に固定された微小血管系を簡単かつ安価に評価し、臨床的な爪ひだ毛細血管鏡検査の結果を動物モデルに変換できます。鏡像周辺微小血管系を視覚化するための新しい場所であるネイルベッドを紹介します。爪のひだ毛細血管鏡検査と比較して、爪の毛細血管鏡検査は、微小血管の形態と構造をより適切に観察するために、より広い領域を提供します。

[講師]まず、麻酔をかけたマウスを手術台に置き、手順を行います。次に、角膜の乾燥を防ぐために、潤滑剤のアイジェルまたは滅菌の非薬用眼科軟膏を両目に塗布します。次に、ノーズコーンを使用して動物を麻酔下に維持し、アプリケーターを使用して足全体にたっぷりの脱毛クリームを塗布します。足と爪の部分を完全にカバーします。クリームを2分間放置した後、清潔なティッシュで脱毛クリームを注意深く洗い取り、ぬるま湯の滅菌水で足を洗います。毛皮除去後 24 時間、摂氏 21.5 度から 22.5 度の間に維持された温度管理された部屋に毛細血管鏡検査装置を設置します。キャピラロスコープをUSB接続でラップトップコンピューターに接続します。ラップトップでDebutビデオソフトウェアアプリケーションを開きます。マウスに適切に麻酔をかけた後、潤滑剤のアイジェルまたは滅菌の非薬用眼科軟膏を両眼に塗布します。白い実験用テープまたは同様の背景材料を足の下に配置して、コントラストを高め、血管の視覚化を改善します。次に、後足の掌状側を上にして、対物レンズの下のラボテーププラットフォームに置きます。つま先をそっと広げ、アプリケーターを使用して顕微鏡対物レンズの下で爪を分離します。最適な血管イメージングのために、ネイルベッドが明確に分離されていることを確認してください。キャピラロスコープで拡大されているものを視覚化し、XステージとYステージのアジャスターと倍率ホイールを調整して爪に焦点を合わせ、鮮明な画像を取得します。まぶしさを軽減し、集中力を高めるには、足に浸漬オイルをたっぷりと塗布し、爪を完全に覆います。後足の2番目の指の爪は最大の爪であり、マウスで最もイメージ化しやすいため、焦点を合わせます。XステージとYステージのアジャスターと倍率ホイールを調整して、船舶ネットワークに焦点を合わせます。対物レンズを調整してまぶしさを最小限に抑え、釘容器ネットワークを視界に届けます。ビデオを録画するには、Debutの赤い[録画]ボタンを押します。各ビデオを適切なプロジェクト フォルダーに保存し、それに応じて各ビデオにラベルを付けます。次に、ImageJ ソフトウェアを開き、ファイルをソフトウェア インターフェイスにドラッグして画像をロードします。明るさとコントラストを調整するには、画像を選択し、次に調整と明るさ/コントラストを選択します。このツールは、画像のコントラストを変更して、血管の形態をよりよく視覚化するのに役立ちます。画像が調整されたら、明るさ/コントラストツールで[設定]をクリックします。最後に、[ファイル]、[名前を付けて保存]に移動し、[Tiff]を選択して画像を保存します。爪状血管の形態は、毛細血管鏡検査法を使用して正常に画像化されました。典型的なマウスの釘付き血管系は、求心性血管、遠心性血管、および両方を接続する毛細血管のネットワークで構成されていました。釘状毛細管ネットワークは、SV129/S6バックグラウンドとC57/B6Jバックグラウンドの野生型マウスで実証されたように、異なるマウス系統間で一貫していました。