Name: 反復漂白は、コア施設の染色自動化を使用して多様性を拡張します (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: 学ぼう、IBEX法を用いた組織イメージングの多様性拡張と自動染色装置の活用。チラミド信号増感による検出感度向上と再現性の高い染色プロトコルを確立し、神経科学への応用可能性を示します。

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<ol><li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+an+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">IBEX: an iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nature Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">IBEX: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Prichard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+automated+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Overview of automated immunohistochemistry.</a> Arch Pathol Lab Med. 138, 1578-1582 (2014).</li>
<li>Stack, E. C., Wang, C., Roman, K. A., Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+immunohistochemistry%2C+imaging%2C+and+quantitation%3A+a+review%2C+with+an+assessment+of+Tyramide+signal+amplification%2C+multispectral+imaging+and+multiplex+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis.</a> Methods. 70, 46-58 (2014).</li>
<li>Speranza, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+immune+dynamics+during+SARS-CoV-2+infection+in+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in immune dynamics during SARS-CoV-2 infection in rhesus macaques.</a> Life Sci Alliance. 5, 4(2022).</li>
<li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+requirements+and+recommendations+for+multiplex+immunofluorescence+tyramide+signal+amplification+assays+to+support+translational+oncology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Procedural requirements and recommendations for multiplex immunofluorescence tyramide signal amplification assays to support translational oncology studies.</a> Cancers (Basel). 12 (2), 255(2020).</li>
<li>Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence+and+multispectral+imaging%3A+forming+the+Basis+of+a+clinical+test+platform+for+immuno-oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence and multispectral imaging: forming the Basis of a clinical test platform for immuno-oncology.</a> Front Mol Biosci. 8, 674747(2021).</li>
<li>Bankhead, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QuPath%3A+Open+source+software+for+digital+pathology+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">QuPath: Open source software for digital pathology image analysis.</a> Sci Rep. 7, 16878(2017).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+analysis+with+SPIAT+and+spaSim+to+characterize+and+simulate+tissue+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial analysis with SPIAT and spaSim to characterize and simulate tissue microenvironments.</a> Nat Commun. 14, 2697(2023).</li>
<li>Meyer, L., Eling, N., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cytoviewer%3A+an+R%2FBioconductor+package+for+interactive+visualization+and+exploration+of+highly+multiplexed+imaging+data%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">cytoviewer: an R/Bioconductor package for interactive visualization and exploration of highly multiplexed imaging data.</a> BMC Bioinformatics. 25, 9(2024).</li>
<li>Windhager, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+end-to-end+workflow+for+multiplexed+image+processing+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">An end-to-end workflow for multiplexed image processing and analysis.</a> Nat Protoc. 18 (11), 3565-3613 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>染色試薬 Alexa TSAキット</td><td>サーモフィッシャー</td><td></td><td>オパール顕微鏡フィルターがない場合は代替のTSA染料も検討してください。これにはAlexa Fluor 488(青緑チャンネル)、Alexa Fluor 555または568(赤色チャンネル)、Alexa Fluor 647(遠赤チャンネル)、Alexa Fluor 750(適切なフィルターを装備した場合の近赤外線)が含まれます。&nbsp;</td></tr><tr><td>抗体 Arg1</td><td>細胞シグナル伝達</td><td>93668</td><td>図4の1:100で使用されている</td></tr><tr><td>マテリアル ブレード</td><td>ライカ・バイオシステムズ</td><td></td><td>または似たようなこと。高プロファイルか低プロファイルかは組織の種類によって異なります</td></tr><tr><td>抗体 CD11b</td><td>アブカム</td><td>ab133357</td><td>図4の1:2000で使用されている</td></tr><tr><td>抗体 CD163</td><td>アブカム</td><td>ab182422</td><td>図4の1:500で使用されている</td></tr><tr><td>抗体 CD31</td><td>細胞シグナル伝達</td><td>77699S</td><td>図2の1:100で使用されている</td></tr><tr><td>抗体 CD3e</td><td>ダコ</td><td>A045201-2</td><td>図1の1:100で使用されている</td></tr><tr><td>ツール コプリンジャー</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>01-816-21</td><td>または類似のもの</td></tr><tr><td>素材 カバースリップ</td><td>VWR</td><td>V48393-026</td><td>または類似のもの</td></tr><tr><td>抗体 CX3CR1</td><td>アブカム</td><td>AB308613</td><td>図4の1:450で使用されている</td></tr><tr><td>ステイン DAPI</td><td>アコヤ</td><td>FP1490</td><td></td></tr><tr><td>ソフトウェア FIJI</td><td></td><td></td><td>信号強度の測定に使用</td></tr><tr><td>スライド フィッシャースーパーフロントスライド</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>22-037-246</td><td>あるいはそれに似たようなもの</td></tr><tr><td>ソフトウェア HALO</td><td>インディカ・ラボ</td><td></td><td>市販の画像解析ソフトウェアの例。画像のアラインメントや分析に使われました。</td></tr><tr><td>抗体 Iba1</td><td>細胞シグナル伝達</td><td>17191</td><td>図4の1:800で使用されている</td></tr><tr><td>Software inForm</td><td>アコヤ</td><td></td><td>信号強度の測定に使用</td></tr><tr><td>抗体 iNOS</td><td>アブカム</td><td>AB283655</td><td>図4の1:400で使用されている</td></tr><tr><td>計器 ライカボンド処方薬(またはRXm)</td><td>ライカ・バイオシステムズ</td><td>21.2201</td><td>本文では「オートステイナー1」と呼ばれています。染色ボックスやバルク溶液を含む関連する試薬もすべて用意されていることを確認してください。&nbsp;</td></tr><tr><td>試薬 LiBH4</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>62460-5G-F</td><td>無水環境で飼い続けます</td></tr><tr><td>インストゥルメンツ マントラスナップ</td><td>アコヤ</td><td></td><td>染料を分解するためには多分光蛍光顕微鏡が必要です。オパール染料を検出できる顕微鏡の例。</td></tr><tr><td>ツール ミクトーム</td><td>ライカ・バイオシステムズ</td><td></td><td>またはブラシなどの好むアクセサリーで似たようなものを使った</td></tr><tr><td>染色剤 Opal IHC 480キット</td><td>アコヤ</td><td>FP1500001KT</td><td>図4での使用</td></tr><tr><td>染色試薬 Opal IHC 6-plex Plexキット</td><td>アコヤ</td><td>NEL821001KT</td><td>図1、2、4で使われている520号と620号は漂白剤を使いません</td></tr><tr><td>染色試薬 Opal IHC 780キット</td><td>アコヤ</td><td>FP1501001KT</td><td>図4での使用</td></tr><tr><td>ツール オーブン</td><td>ミリポール・シグマ</td><td>Z683329</td><td>または類似の方法も、オートステイナーで行うことができます</td></tr><tr><td>抗体 パンサイトケラチン</td><td>アブカム</td><td>AB9377</td><td>図4の1:50で使用されている</td></tr><tr><td>試薬 PBS(任意)</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>AAJ61196AP</td><td></td></tr><tr><td>Instrument フェノイメージャー</td><td>アコヤ</td><td></td><td>ソフトウェアに内蔵されたマルチスペクトル全スライドイメージング(オンボードスペクトルアンミキシング)</td></tr><tr><td>試薬 ProLong ゴールドアンチフェード</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>P36961</td><td>または類似の水付き固定媒体</td></tr><tr><td>抗体 ProSP-C n末端(ProSPC)</td><td>セブンヒルズ・バイオリエージェント</td><td>WRAB-9337</td><td>図4の1:250で使用されている</td></tr><tr><td>抗体 RAGE</td><td>R&D</td><td>MAB1179</td><td>図1および図2の1:50で使用されている</td></tr><tr><td>試薬 反応バッファー</td><td>ロシュ</td><td>NC1895692</td><td>ベンタナオートステイナーでの使用用</td></tr><tr><td>抗体 SARS-CoV-2-N</td><td>細胞シグナル伝達</td><td>68344</td><td>図2の1:1000で使用されている</td></tr><tr><td>スライド TOMO 接着 CC 顕微鏡スライド-WH</td><td>アヴァンティック</td><td>SKUSL6519-1</td><td>組織の付着が気になる場合</td></tr><tr><td>インストゥルメンツ ベンタナ・ディスカバリー・ウルトラ</td><td>ロシュ</td><td></td><td>本文では「オートステイナー2」と呼ばれています。染色ボックスやバルク溶液を含む関連する試薬もすべて用意されていることを確認してください。&nbsp;</td></tr><tr><td>試薬 ウォッシュバッファー</td><td>ライカ・バイオシステムズ</td><td>AR9590</td><td>ライカボンドオートステイナーでの使用用</td></tr><tr><td>試薬 水</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>15-230-147</td><td>DIが最適で、ミリポアではありません</td></tr><tr><td>ツール 水浴</td><td>ライカ・バイオシステムズ</td><td>140607020C1</td><td>または類似のもの</td></tr></tbody></table>

反復漂白は、コア施設の染色自動化を使用して多様性を拡張します

Iterative Bleaching Extends Multiplicity with Use of Staining Automation for Core Facilities

Iterative Bleaching Extends Multiplicity (IBEX) is a highly sensitive tyramide signal amplification (TSA)-based multi-round fluorescence imaging technique ...

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