ラットにおける同所性左肺移植

私の研究は、移植後の合併症、特に慢性拒絶反応を調査し、長期的な移植片失敗を引き起こすメカニズムをより深く理解するために、標準化された再現性のある左肺移植モデルの開発に焦点を当てていました。当社のプロトコルは、既存の技術と比較して、学習曲線が短く、単一の操作能力があり、再現性が高いです。当社の標準化された直接肺移植モデルは、肺移植後の合併症を研究するための信頼できるプラットフォームを提供し、移植片の生存率を改善するためのトランスレーショナル リサーチを加速できます。

将来的には、肺移植レシピエントの長期生存率を向上させるために、肺移植後の慢性拒絶反応の研究に焦点を当てます。まず、14ゲージと16ゲージの静脈カテーテルとブレードを入手します。カテーテルを刃付きの尾のあるカフにトリミングします。

次に、各カフを体と尾に分け、それぞれ長さが約2〜3ミリメートルです。メスを使用して、カフ本体に表面的な傷を作り、縫合糸固定の摩擦を増大させます。ドナーの肺を採取するには、鉗子を使用して麻酔をかけたラットの舌を外側および上方に引っ込めます。

サージカルランプを首の前方に配置して、声門の開口部をはっきりと照らします。次に、14 ゲージの静脈内カニューレを声門から気道に挿入します。人工呼吸器を圧力制御モードに設定します。

次に、重量パラメータを入力し、圧力を水深 15 センチメートルに調整し、人工呼吸器を接続します。胸部の上下を観察して、人工呼吸器の周波数と同期していることを確認します。次に、テープまたは拘束具を使用して手足と頭を固定します。

腹壁に沿って正中線を切開します。露出した腹膜静脈からヘパリンを注射し、体循環を 3 分間行い、完全なヘパリン化を確実にします。横隔膜を切断し、胸骨の正中線から胸腔を開きます。

次に、止血剤で両側の胸壁を固定します。胸腺を取り除き、胸腔臓器を露出させます。順番に、上大静脈、下大静脈、左右の耳介を切断します。

次に、ドナーの肺が完全に白くなるまで、20ミリリットルの注射器を使用して肺動脈の根元に冷生理食塩水を1分間かけて注入し、低圧灌流を行います。ドナー肺をつなぐ組織を切断し、ドナーの心臓と肺をブロックで抽出します。ドナーの心肺ブロックを予冷した生理食塩水に浸します。

顕微鏡下で心肺ブロックを氷の上に置きます。止血剤で気管をつかみ、粘土で固定します。濡れた滅菌レンズペーパーで肺を覆います。

次に、鉗子を使用して、顕微鏡下で肺動脈、気管支、肺静脈を分離します。6-0の外科用縫合糸を使用して、肺に近い気管支を結紮します。バネハサミを使用して、肺動脈、気管支、肺静脈を切断します。

16ゲージ、14ゲージ、および16ゲージのくぼみカテーテルで作られたそれぞれのカフから肺動脈、気管支、および肺静脈を抽出します。チューブの壁を8-0でカフに固定します外科用縫合糸。ドナーの肺を生理食塩水で保存し、移植するまで氷の上に戻します。

レシピエント動物の左胸背側領域を脱毛します。サーモスタット手術台に動物を右側臥位の姿勢で配置します。次に、胸腔にアクセスするために、第4肋間腔の頂端インパルスのポイントで皮膚と胸壁を切開します。

まぶたのリトラクターを使用して胸腔を開きます。次に、湿らせた綿棒を使用して左肺をそっと脇に押し、下肺靭帯を露出させ、鋭く横断します。次に、鉗子で左肺をつかみ、胸腔の外に引っ込めます。

止血剤で肺門を固定し、モデリング粘土で安定させます。次に、肺門を解剖して、肺動脈、肺静脈、気管支を分離します。血管クランプを使用して、肺動脈、肺静脈、および気管支の近位端をクランプします。

レシピエントの肺動脈、気管支、肺静脈を 8-0 で事前に結び付けます。迅速な吻合のための外科用縫合糸。ドナー肺の配置を容易にするために、レシピエントのクランプされた左肺のプラットフォームをトリミングします。肺動脈、肺静脈、気管支の遠位端に小さな切開を行います。

血栓形成を防ぐために、肺動脈と肺静脈をヘパリン化生理食塩水ですすぎます。次に、ドナーの肺を氷から取り出し、レシピエントの左肺の準備されたプラットフォームに配置します。鉗子を使用して切断口の片側を持ち上げ、肺動脈、肺静脈、気管支のカフをレシピエントに順次移植して結紮します。

マイクロ止血クリップを開き、ドナーの肺が白から赤に変わるのを観察します。吻合部に出血の兆候がないか検査します。次に、レシピエントの左肺を切除し、ドナーの肺を胸腔に戻します。

胸腔を滅菌綿で拭いて乾かします。次に、胸腔を層ごとに閉じます。人工呼吸器を取り外す前に、自発呼吸が回復するのを待ちます。

1時間後、受給者は自由に食事をできるようになりました。移植から6か月後、CT画像検査では、移植された肺の換気量が偽のグループに匹敵し、肺機能が維持されていることが示されました。肺の肉眼的外観は、偽グループと移植グループの間で目に見える違いはなく、悪化や異常の兆候は見られませんでした。

肺組織のヘマトキシリンおよびエオシン染色では、偽のグループと比較して移植された肺に有意な病理学的変化は見られず、肺胞構造が保存され、炎症性浸潤がありませんでした。