Name: 背根神経節培養の In Vitro モデルの確立:がん-神経クロストーク研究のための補完的アプローチ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T16:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 26 s
Description: 学ぶマウス背根神経節の3Dおよび2D培養法により、がん細胞の神経突起沿い浸潤を評価する技術。単一マウスから組織レベルと単一細胞データを取得し、がん-神経相互作用の再現性あるモデルを構築する。

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<li>Jang, K., Garraway, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+dorsal+root+ganglia+and+primary+sensory+neuron+plasticity+mediating+inflammatory+and+chronic+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Pain%22%5BJournal%5D)">A review of dorsal root ganglia and primary sensory neuron plasticity mediating inflammatory and chronic neuropathic pain.</a> Neurobiol Pain. 15 (100151), (2024).</li>
<li>Hanani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+neurons+and+satellite+glial+cells+in+mouse+dorsal+root+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in neurons and satellite glial cells in mouse dorsal root ganglia.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2677(2023).</li>
<li>Martinelli, C., Sartori, P., Ledda, M., Pannese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+quantitative+changes+in+mitochondria+of+satellite+cell+sheaths+enveloping+spinal+ganglion+neurons+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Age-related quantitative changes in mitochondria of satellite cell sheaths enveloping spinal ganglion neurons in the rabbit.</a> Brain Res Bull. 61 (2), 147-151 (2003).</li>
<li>Niwa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+age-dependent+trophic+responses+of+nodose%2C+sensory%2C+and+sympathetic+neurons+to+neurotrophins+and+gdnf%3A+Potencies+for+neurite+extension+in+explant+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Differential age-dependent trophic responses of nodose, sensory, and sympathetic neurons to neurotrophins and gdnf: Potencies for neurite extension in explant culture.</a> Neurochem Res. 27 (6), 485-496 (2002).</li>
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<table><tbody><tr><td>ツール</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>70 & マイクロ;m セルストレーナー</td><td>プロジーン</td><td>71-229483-ULT</td><td>細胞懸濁液のろ過に使用</td></tr><tr><td>8ウェルガラス底スライド</td><td>IBidi、ミュンヘン、ドイツ</td><td>80807</td><td></td></tr><tr><td>デュモン #5 - 細い鉗子</td><td>ファインサイエンスツール、フォスターシティ、米国</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>デュモン #5 鉗子</td><td>ファインサイエンスツール、フォスターシティ、米国</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>細かいはさみ</td><td>ファインサイエンスツール、フォスターシティ、米国</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>パターン鉗子</td><td>ファインサイエンスツール、フォスターシティ、米国</td><td>91121-12</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>スプリングハサミ</td><td>ファインサイエンスツール、フォスターシティ、米国</td><td>91500-09</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>試薬</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x リン酸緩衝生理食塩水</td><td>シグマ、セントルイス、アメリカ</td><td>D8662-500MLです</td><td>酵素の溶解に使用されます</td></tr><tr><td>B-27 サプリメント (50x)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック、米国マサチューセッツ州</td><td>17504044</td><td>F12培地で2%濃度で使用</td></tr><tr><td>ウシI型コラーゲン</td><td>Corning Incorporated、ニューヨーク、米国</td><td>354231</td><td>コーティングプレート、作業溶液50&microに使用。g/mL(0.01 M HCl中)</td></tr><tr><td>コラゲナーゼIV型</td><td>Sigma-Aldrich、セントルイス、米国</td><td>C4-BIOC</td><td>PBSに1.25 mg / mLで溶解し、アリコートし、-20°Cで保存します。C</td></tr><tr><td>ディスパーゼII</td><td>Roche、バーゼル、スイス</td><td>4942078001</td><td>PBSに2.5 mg / mLで溶解し、アリコートし、-20°Cで保存します。C</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>ロシュ、バーゼル、スイス。</td><td>11284932001</td><td>&nbspの最終濃度で添加;解離中は0.2 mg / mL</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich、セントルイス、米国</td><td>F1051</td><td>F12培地で10%濃度で使用</td></tr><tr><td>HBSS(ハンクの平衡塩溶液)</td><td>シグマ、セントルイス、アメリカ</td><td>H6648-500MLです</td><td>1%ペニシリン-ストレプトマイシンで調製</td></tr><tr><td>マトリゲル成長因子の減少</td><td>Corning Incorporated、ニューヨーク、米国</td><td>356231</td><td>4度で解凍します。C一晩、氷の上に置いておく</td></tr><tr><td>栄養混合物 F-12 ハム</td><td>Sigma-Aldrich、セントルイス、米国</td><td>N6658-500MLです</td><td>補充培地を調製するための基礎培地</td></tr><tr><td>パパイン</td><td>ロシュ、バーゼル、スイス。</td><td>10108014001</td><td>PBSに30U / mLで溶解し、アリコートし、-20°Cで保存します。C</td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン(100倍)</td><td>Sigma-Aldrich、セントルイス、米国</td><td>P4333-100MLです</td><td>培地中で1%濃度で使用</td></tr><tr><td>トリパンブルー溶液</td><td>Sigma-Aldrich、セントルイス、米国</td><td>T8154-100MLの</td><td>細胞生存率を評価するには</td></tr><tr><td>TrypLE エクスプレス</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック、米国マサチューセッツ州</td><td>12605-028</td><td>がん細胞の採取用</td></tr><tr><td>抗体</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&β;-チューブリンIII抗体</td><td>アブカム(英国、ケンブリッジ)</td><td>AB15568</td><td>希釈 1:200</td></tr><tr><td>アレクサフルオール488</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック、米国マサチューセッツ州</td><td>A-11008</td><td>希釈 1:2000</td></tr><tr><td>アレクサフルオール594</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック、米国マサチューセッツ州</td><td>A-21442</td><td>希釈 1:2000</td></tr><tr><td>アレクサフルオール647</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック、米国マサチューセッツ州</td><td>A-21245</td><td>希釈 1:2000</td></tr><tr><td>NeuN抗体</td><td>Sigma-Aldrich、セントルイス、米国</td><td>MAB377</td><td>希釈 1:100</td></tr><tr><td><強力>蛍光染料&プローブ</ストロング></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ActinGreen 488 ReadyProbes 試薬 (ファロイジン)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック、米国マサチューセッツ州</td><td>R37110</td><td>希釈 1:40</td></tr><tr><td>CellTraceカルセインレッドオレンジ</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック、米国マサチューセッツ州</td><td>C34851</td><td>蛍光顕微鏡下でニューロンを可視化するためのセルトラッカー</td></tr><tr><td>ヘクスト 33342</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック、米国マサチューセッツ州</td><td>H3570型</td><td>希釈 1:5000</td></tr></tbody></table>

背根神経節培養の in vitro モデルの確立:がん-神経クロストーク研究のための補完的アプローチ

Establishing In Vitro Models of Dorsal Root Ganglia Culture: Complementary Approaches for Investigating Cancer-Nerve Crosstalk

私たちのプロトコルは、初代マウスDRG由来細胞の単離と、解離DRG培養と全マウントDRG培養の2つの相補的な培養モデルの確立を説明しています。このプロトコルの主な利点は、同じ動物から単離されたDRGを使用して両方のタイプの培養を生成できるため、動物間および実験間の変動が最小限に抑えられ、各モデルから生成された情報をより簡単に統合でき、細胞動態および細胞間相互作用のより包括的なビューを提供できることです。これらのカルチャモデルは、多くのアプリケーションに適応できます。ただし、ここでは、がんと神経の相互作用の文脈でのそれらの使用に焦点を当てています。
このプロトコルは、DRGの構造を維持し、DRG由来細胞の生存率を最大化しながら、生存可能なDRGとがん細胞のDRG解剖、抽出、および共培養のための効率的なワークフローを提供します(図1)。しかし、DRG培養物は、最初の解剖段階での毛皮のキャリーオーバ...

背根神経節培養の In Vitro モデルの確立:がん-神経クロストーク研究のための補完的アプローチ

The contribution of the nervous system to the tumor microenvironment and the importance of neural invasion as a route for cancer dissemination are being ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

この動画では、マウスの後根神経節と神経向性がん細胞を共培養することで、in...

マウス背根神経節とがん細胞の三次元共培養モデルの確立:神経周囲がん細胞の浸潤を研究するためのインビトロモデル

このビデオでは、DRG細胞と癌細胞を共培養して神経向性と神経浸潤を研究するin...

In vitroでの癌性神経浸潤のモデリング:背根神経節と癌細胞を共培養する方法

表現型の野生型アストロサイトと神経幹細胞は、floxed、条件付き発癌性対立遺伝子で操作され、ウイルスCre媒介組換えを介して形質転換されたマウスから採取され、同系で免疫能力のある同腹仔の脳に形質転換細胞を同所性注射することにより、in vitroおよびin...

モデル星細胞腫発症機序体外とインビボ皮質アストロサイトまたは条件付き、遺伝子改変マウスから神経幹細胞を使用した

細胞培養モデルは、環境条件を詳細に制御を提供し、したがって、神経細胞生物学の多くの側面を解明するための強力なプラットフォームを提供します。私たちは、隔離解離、およびニワトリ胚の培養感覚ニューロンために、迅速な安価で、かつ信頼性の高い方法を記載する。基質の調製および免疫細胞化学の詳細も提供される。...

ニワトリ胚から解離感覚ニューロンの単離および培養

後根神経節（DRG）、末梢神経系の感覚ニューロンを含む構造である。解離した場合、それらは損傷部位でのインビボ環境を模倣し、in vitroでの神経再生及び髄鞘形成を研究するための貴重なモデルを提供し、SC-ような脂肪由来幹細胞（ASC）と共培養することができる。...

根神経節ニューロンと差別化された脂肪由来幹細胞を背：<em&gt;インビトロ</em末梢神経再生を研究するために&gt;共培養モデル

このビデオ記事は、膵管腺癌における後根神経節(DRG)/癌細胞モデルの使用を示しています。...

後根神経節モデル：癌性神経浸潤のin vitroモデルでは

ペリニューラル侵来は、頭頸部扁平上皮癌および他の腫瘍に対する積極的な表現型である。ひよこ絨毛膜モデルは、血管新生、癌の侵入、転移の研究に使用されています。ここでは、このモデルを生体内のペリニューラル侵入を評価するためにどのように利用できるかを示します。...

頭頸部癌のペリオラル侵食を評価する生体内モデルにおけるひよこチョリオアラントIC膜

後根神経節とシュワン細胞の共培養系では、末梢神経系の髄鞘形成を研究することができます。このモデルは、末梢髄鞘形成を観察および定量化し、ミエリン鞘に対する目的の化合物の影響を研究するための実験的機会を提供します。...

ラット背根神経節外植片とシュワン細胞の共培養における末梢軸索のin vitro髄鞘形成

私たちは、遺伝子改変マウスの神経系新生物がヒトの病理を正確に再現しているかどうかを評価するための方法論を開発しました。本研究では、これらの組織学的手法、定義された病理学的基準、および培養方法論を、P...

遺伝子改変マウスモデルにおける悪性末梢神経鞘腫瘍の同定、診断、および悪性度判定

このプロトコルは、成体のSprague...

末梢神経細胞の特徴を研究するためのマルチコンパートメントデバイスにおける後根神経節の採取、埋め込み、および培養

学ぶマウス背根神経節の3Dおよび2D培養法により、がん細胞の神経突起沿い浸潤を評価する技術。単一マウスから組織レベルと単一細胞データを取得し、がん-神経相互作用の再現性あるモデルを構築する。

背根神経節培養の In Vitro モデルの確立:がん-神経クロストーク研究のための補完的アプローチ

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