Name: CD63-GFPリポーターマウスモデルを用いた脂肪細胞由来細胞外小胞分泌の生体およびin vitroでの特徴付け (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-05T13:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: 学ぶCD63-GFPリポーターマウスを用いた脂肪細胞由来細胞外小胞の生体内およびin vitroでの分泌メカニズム。この方法は脂肪組織における細胞間コミュニケーションの理解に貢献します。

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<li>Oh, E., Miller, R. A., Thurmond, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syntaxin+4+overexpression+ameliorates+effects+of+aging+and+high-fat+diet+on+glucose+control+and+extends+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Syntaxin 4 overexpression ameliorates effects of aging and high-fat diet on glucose control and extends lifespan.</a> Cell Metab. 22 (3), 499-507 (2015).</li>
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<li>Nordin, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrafiltration+with+size-exclusion+liquid+chromatography+for+high+yield+isolation+of+extracellular+vesicles+preserving+intact+biophysical+and+functional+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Ultrafiltration with size-exclusion liquid chromatography for high yield isolation of extracellular vesicles preserving intact biophysical and functional properties.</a> Nanomedicine. 11 (4), 879-883 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5 M EDTA、pH 8.0</td><td>フィッシャー</td><td>AM9260G</td><td>500倍の希釈</td></tr><tr><td>10倍PBS</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>70-013-032</td><td>水で1000倍の希釈</td></tr><tr><td>1 M HEPES</td><td>ギブコ</td><td>15630080</td><td>1000倍の希釈</td></tr><tr><td>脂肪組織前体分離キット、マウス</td><td>ミルテンニ・バイオテック</td><td>30-106-639</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>アミコン超遠心フィルター、100 kDa MWCO</td><td>シグマ</td><td>UFC9100</td><td>15 mL サンプル容量</td></tr><tr><td>アミコン超遠心フィルター、100 kDa MWCO</td><td>シグマ</td><td>UFC9100</td><td>4 mL サンプル</td></tr><tr><td>BSA</td><td>シグマ</td><td>A6003</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>カルネキシン抗体</td><td>カルネキシン</td><td>AB22595</td><td>1000倍の希釈</td></tr><tr><td>CD63抗体</td><td>アブカム</td><td>ab217345</td><td>500倍の希釈</td></tr><tr><td>CD81</td><td>細胞シグナル伝達技術</td><td>10037</td><td>500倍の希釈</td></tr><tr><td>コーニング&nbsp;BioCoatとnbsp;コラーゲンI培養スライド</td><td>シグマ</td><td>CLS354630</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>コーニング&nbsp;セルストレーナー</td><td>シグマ</td><td>CLS431750</td><td>40 & mu;mの孔径</td></tr><tr><td>コーニング&nbsp;セルストレーナー</td><td>シグマ</td><td>CLS431752</td><td>100 & mu;mの孔径</td></tr><tr><td>COX IV抗体</td><td>細胞シグナル伝達技術</td><td>4844</td><td>1000倍の希釈</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ギブコ</td><td>11965092</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>DMEM/F-12、グルタMAXサプリメント</td><td>サーモフィッシャー</td><td>10565018</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>DNASE 1</td><td>シグマ</td><td>D4513</td><td>ストック5 KU/mL、-20度、C</td></tr><tr><td>グルタMAXサプリメント</td><td>ギブコ</td><td>35050061</td><td>100倍の希釈</td></tr><tr><td>停泊・貿易;プロテアーゼとホスファターゼ阻害剤カクテル(100倍)</td><td>サーモフィッシャー</td><td>78444</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>HSP70抗体</td><td>アブカム</td><td>AB181606</td><td>1000倍の希釈</td></tr><tr><td>Invitrogen eBioscience 10X RBC Lysis Buffer(多種)</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>50-112-9743</td><td>水中の希釈10倍</td></tr><tr><td>アイゾンサイエンスUSA Ltd QEVORIGINAL 70NMGEN2 5/PK SDP</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>NC2042225</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>ライカ ステラリス8 共焦点顕微鏡</td><td>ライカ顕微鏡</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>リベラーゼTM研究グレード</td><td>シグマ</td><td>リブトム・ロー</td><td>ストック5 mg/mL、-20度、C</td></tr><tr><td>Millex MCEシリンジフィルター</td><td>シグマ</td><td>SLAA025</td><td>0.8 & mu;mの孔径</td></tr><tr><td>ナノサイト・プロ</td><td>マルバーン・パナリティカル</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>ノベックス・トリスグリシン・ミニプロテインゲル、4&ndash;12%,</td><td>サーモフィッシャー</td><td>XP04120BOX</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>Novex Tris-Glycine SDSサンプルバッファー(2回)</td><td>サーモフィッシャー</td><td>LC2676</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>パシフィックブルー抗マウス Ly-6A/E(Sca-1)抗体</td><td>バイオレジェンド</td><td>108119</td><td>25倍の希釈</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド溶液(16%)</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>50-980-487</td><td>PBSで4%まで希釈してください</td></tr><tr><td>pluriStrainer S / 30 & micro;m(セルストレーナー)</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>NC0922459</td><td>30 & mu;mの孔径</td></tr><tr><td>ポンソーS解</td><td>シグマ</td><td>P7170-1L</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>プリモシン</td><td>インビボジェン</td><td>NC9141851</td><td>500倍の希釈</td></tr><tr><td>ProLong 金アンチフェード試薬(DAPI搭載)</td><td>細胞シグナル伝達技術</td><td>8961S</td><td>使用準備完了</td></tr><tr><td>精製抗マウスCD16/32抗体</td><td>バイオレジェンド</td><td>101301</td><td>100倍の希釈</td></tr><tr><td>RIPA buffer&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>PI89900</td><td>水中の希釈10倍</td></tr><tr><td>スペクトルフローサイトメーター(オーロラ3)</td><td>サイテック・バイオサイエンス</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>シンタキシン4抗体</td><td>シナプス系</td><td>110042</td><td>5000倍の希釈</td></tr><tr><td>テクナイ20(透過電子顕微鏡)</td><td>FEI</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>タージオ-EM</td><td>PIE Scientific LLC</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>ビンキュリン抗体</td><td>アブカム</td><td>AB18508</td><td>5000倍の希釈</td></tr></tbody></table>

cd63-gfpリポーターマウスモデルを用いた脂肪細胞由来細胞外小胞分泌の生体およびin vitroでの特徴付け

Characterization of Adipocyte-Derived Extracellular Vesicle Secretion Using a CD63-GFP Reporter Mouse Model In Vivo and In Vitro

このAdEV検出法を用いて、共焦点顕微鏡によるAPC取り込みを用い、AdipCD63-GFPおよびStopfl/fl/CD63-GFPマウスの鼠径腺脂肪組織からAPCを単離し、核の可視化のためにDAPI染色しました。共焦点顕微鏡検査では、Stopfl/fl/CD63-GFPマウスのAPCに検出可能なGFP点は検出されませんでした(図1A)。対照的に、AdipCD63-GFPマウスから分離されたAPCは、細胞質全体に多数の異なるGFP点を示しました(図1B)。GFPシグナルは、CD63-GFPラベルが成熟脂肪細胞でのみ発現するアディポネクチンプロモーターによって駆動されるため、APCsによるAdEVの取り込みを示しています。30,31。これらの結果は、アプローチの特異性を確認し、プロトコルがAdEVの取り込みイベントを特定できる能力を検証しています。
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CD63-GFPリポーターマウスモデルを用いた脂肪細胞由来細胞外小胞分泌の生体およびin vitroでの特徴付け

Adipocytes are increasingly recognized as active endocrine cells that secrete substantial quantities of EVs enriched in proteins, lipids, and nucleic ...

characterization-adipocyte-derived-extracellular-vesicle-secretion

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、細胞外小胞またはEVの細胞内取り込みを視覚化し定量化するアッセイを実演します。このアッセイは、共焦点顕微鏡を用いた3D蛍光イメージングを利用し、細胞表面に付着したEVと内在するEVを区別することができます。...

細胞外小胞取り込みアッセイ:3D蛍光イメージング技術を使用して細胞外小胞の細胞取り込みを可視化および定量化する方法

内皮グリコカリックス/内皮表面層は、理想的には生体顕微鏡を用いて研究されています。生体顕微鏡検査は、肺などの臓器に移動技術的に困難である。私たちは、同時明視野と蛍光顕微鏡を自由に移動させる際に内皮表面層の厚さを推定するために使用することができる方法を示してい...

マウス肺内皮表面層の in vivo測定における

このプロトコルは、非接着性/間葉性乳房上皮細胞からの細胞外小胞（EVs）/エキソソームの精製、定量化および特徴づけ方法、ならびにこれらを用いて乳腺上皮細胞に乳腺形成能を転移させる方法を記載する。幹様乳腺上皮細胞に由来するEV /エキソソームは、この細胞特性をEV /エキソソームを摂取する細胞に移入することができる。...

細胞外小胞/エキソソームを介した乳腺上皮細胞と乳房管腔細胞との間の乳腺形成能の伝達

この作品は、熱帯熱マラリア原虫感染赤血球によるリリース細胞小胞 (Ev) の役割を調査するプロトコルについて述べる.特に、我々 は EVs...

マラリア感染時の細胞の小胞の機能評価

このプロトコルでは蛍光を用いたナノ粒子追跡によるひと全血から細胞小胞の迅速な分離と特定のマーカーの特性の完全なワークフローを説明します。結果が発表される高レベルの再現性を示し細胞培養上清に調整することができます。...

ナノ粒子追跡によるひと血中の細胞小胞単一の急速な蛍光特性評価

我々は、脂肪組織代謝表現型に寄与するマトリックスおよび脂肪細胞の役割の解剖を可能にする3Dヒト細胞外マトリックス脂肪細胞in...

マトリックス細胞代謝クロストークを研究するためのヒト3D細胞外マトリックス-脂肪細胞培養モデル

最新世代のEV特性評価ツールは、複数のパラメータにわたる単一のEV解析を同時に行うことができます。ナノフローサイトメトリーは、標識なしで45...

ナノフローサイトメトリーによる単一細胞外小胞膜貫通タンパク質の特性評価

このプロトコルは、ヒト脂肪由来間葉系幹細胞(ADSC)の培養や上清の収集から、超遠心分離を使用した細胞外小胞(EV)の抽出まで、すべての手順を説明しています。...

ヒト脂肪由来間葉系幹細胞からの細胞外小胞の精製とキャラクタリゼーション

ここでは、ヒト皮下脂肪組織(hSATMVEC)から微小血管内皮細胞を単離、培養、および表現型決定するためのプロトコールについて説明します。さらに、hSATMVEC-脂肪細胞クロストークの実験モデルについても説明します。...

ヒト皮下脂肪組織における脂肪内皮細胞/脂肪細胞クロストークの研究

生体外移植モデルを用いて、赤身マウスの内臓白色脂肪組織の前縁部の小片を7〜10日間培養し、高脂肪食摂食中の脂肪組織炎症の誘導と研究を可能にします。...

高脂肪食様脂肪組織炎症の 体外 マウスモデル

学ぶCD63-GFPリポーターマウスを用いた脂肪細胞由来細胞外小胞の生体内およびin vitroでの分泌メカニズム。この方法は脂肪組織における細胞間コミュニケーションの理解に貢献します。

CD63-GFPリポーターマウスモデルを用いた脂肪細胞由来細胞外小胞分泌の生体およびin vitroでの特徴付け

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