Name: in vitro 調節T細胞の機能分析:増殖と分化に焦点を当てる (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-09T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: 学ぶ 調節T細胞の機能分析手法。マウスTreg細胞とナイーブT細胞の共培養により、効果T細胞の増殖とTh1・Th17分化を同時評価する。フローサイトメトリーで解析し、自己免疫疾患治療研究に応用可能。

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<table><tbody><tr><td>1.5 mL遠心管</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3457IW</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>12.5 &mu;L フィルター付きピペットチップ</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420043</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>1250 &mu;L フィルター付きピペットチップ</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420813</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>15 mL 円錐形遠心管</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339650</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>200 &mu;L フィルター付きピペットチップ</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420318</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>48ウェルプレート</td><td>Corning Incorporated</td><td>3548</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>5 mL シリンジピストン</td><td>Shifeng Medical</td><td>SB2-061(A)</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>50 mL 円錐形遠心管</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>50 &mu;L フィルター付きピペットチップ</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420258</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>70 &mu;m セルストレーナー</td><td>Biosharp Life Sciences</td><td>BS-70-CS</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>抗マウスCD28抗体</td><td>BioXcell</td><td>BE0015-1</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>抗マウスCD3抗体</td><td>BioXcell</td><td>BE0001-1</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>抗マウスFoxp3 PB (FJK-16s)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-5773-82</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>抗マウスIFN-gamma PE (XMG1.2)</td><td>BioLegend</td><td>505808</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>抗マウスIL-17A PE-Cy7 (eBio17B7)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-7177-82</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>Beckman CytoFLEX S フローサイトメーター</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td>免疫細胞サンプルのフローサイトメトリデータ取得用</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2064</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>C57BL/6マウス</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>SM-001</td><td>一次リンパ球およびT細胞サブセットの分離用</td></tr><tr><td>CD25モノクローナル抗体 (PC61.5), PE</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-0251-83</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>CD4+CD25+ 調節性T細胞分離キット, マウス</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-041</td><td>細胞分離用</td></tr><tr><td>CD4+CD62L+ T細胞分離キット, マウス</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-643</td><td>細胞分離用</td></tr><tr><td>CD45.1マウス</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>NM-KI-210226</td><td>一次リンパ球およびT細胞サブセットの分離用</td></tr><tr><td>CD45.1モノクローナル抗体 (A20), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0453-85</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>CD45.2モノクローナル抗体 (104), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>47-0454-82</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>CD62L (L-Selectin) モノクローナル抗体 (MEL-14), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0621-85</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm固定/透過化ソリューションキット</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>eBioscience細胞増殖染色eFluor 450</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>65-0842-90</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>エチレンジアミン四酢酸 (EDTA)</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>E1170</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5669701</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>FlowJo 10.6.2</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>フローサイトメトリデータ分析用ソフトウェア</td></tr><tr><td>ゴルジプラグタンパク質輸送阻害剤</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>ヒトTGF-beta1</td><td>PEPROTECH</td><td>100-21C</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>イオノマイシンカルシウム塩</td><td>Millipore Sigma</td><td>I3909</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>LDカラム</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-901</td><td>細胞分離用</td></tr><tr><td>L-グルタミン (200 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>LSカラム</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>細胞分離用</td></tr><tr><td>MACSマルチスタンド</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td>細胞分離用</td></tr><tr><td>MSカラム</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td>細胞分離用</td></tr><tr><td>OctoMACSセパレーター</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td>細胞分離用</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010049</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>PEラットIgG1, &kappa;アイソタイプCtrl抗体</td><td>BioLegend</td><td>400408</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7ラットIgG2a kappaアイソタイプコントロール抗体</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-4321-82</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>PMA</td><td>Millipore Sigma</td><td>P8139</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>精製抗マウスCD16/32抗体</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>QuadroMACSセパレーター</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td>細胞分離用</td></tr><tr><td>組換えマウスIL-12 p70</td><td>PEPROTECH</td><td>210-12</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>組換えマウスIL-6</td><td>R&amp;D Systems</td><td>406-ML</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>赤血球溶解バッファー (ACK溶解バッファー)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1049201</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>RPMI 1640培地</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>ナトリウムピルビン酸 (100 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360070</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>トライパンブルー溶液, 0.4%</td>

in vitro 調節t細胞の機能分析:増殖と分化に焦点を当てる

In Vitro Functional Analysis of Regulatory T cells: Focus On Proliferation And Differentiation

代表的な実験では、ナイーブT細胞をTresp細胞として用いて、Treg富む細胞がTh1およびTh17細胞の増殖と分化に与える影響を調査しました。この実験では、Tresp細胞は抗マウスCD3およびAPCリッチの非CD4+ 細胞によって活性化され、その後IL-12 p70誘導下でTh1細胞、またはTGF-β1およびIL-6誘導下でTh17細胞へ分化しました。これら2つの誘導条件下で、Treg豊富細胞を1:1の比率で添加した後のTresp細胞の増殖および分化の変化が研究されました。
CD45.2+CD4+ Tresp細胞をCD45.1+CD4+ Tregリッチ細胞と共培養したところ、Th1およびTh17誘導条件下で非増殖Tresp細胞の頻度が有意に増加した(図4A,B)。これはTreg豊富細胞の存在下でTresp細胞の増殖が抑制されたことを示しています。さらに、Treg豊か細胞との共培養...

in vitro 調節T細胞の機能分析:増殖と分化に焦点を当てる

Regulatory T (Treg) cells play key roles in maintaining immune homeostasis. Abnormalities in Treg cell function are associated with various diseases, ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

我々は、単一のヒトの血液ドナーからの規制は、メモリとナイーブT細胞を生成する方法を説明します。偏Tregsのは、その後もここで詳述抑制アッセイを含む遺伝的均一性を持つ遺伝子や機能のさまざまなアプリケーション内の他のサブセットと比較することができます。...

初代ヒトナイーブおよびメモリーT細胞から誘導した調節性T細胞の生成

人工多能性幹（iPS）細胞からTリンパ球の生成は、T細胞ベースの免疫療法のために胚性幹細胞を使用する代替アプローチを提供します。メソッドは、どちらを利用することによってことを示しています...

Tリンパ球に向かって誘導多能性幹細胞の分化の指示

CD4+制御性T細胞は強力な免疫調節因子であり、免疫恒常性において重要な機能を果たします。末梢血中のこれらの細胞が不足しているため、特にHIV-1感染の状況では、機能研究が困難になっています。ここでは、HIV-1感染者の末梢血から機能的なCD4+...

HIV-1に感染した個体からの制御性T細胞を増殖するための新しいツール

ナイーブCD4コクサッキーアデノウイルス受容体のトランスジェニック発現とT細胞へのアデノウイルス遺伝子導入は、制御性T細胞分化の分子解析を可能に...

ナイーブCD4のアデノウイルス形質導入Tregの分化を研究するためにT細胞

ナイーブCD4+ T細胞は、活性化時の環境に応じて、さまざまなサブセットに分極します。 ナイーブCD4+ T細胞の種々のエフェクターサブセットへの分化は、T細胞受容体刺激および特異的サイトカインシグナルの添加により、in vitroで達成することができる。...

マウスナイーブCD4<sup&gt; +</sup&gt; T細胞の単離と<em&gt;インビトロ</em&gt; T細胞サブセットへの分化

ここでは、ナイーブおよび慢性リンパ性脈絡髄膜炎ウイルス感染マウスから分離された制御性T（Treg）細胞の表現型を分析するためのプロトコルについて説明します。さらに、Treg細胞の抑制活性を評価するプロセスを提供します。...

表現型および慢性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスに感染したマウスから単離された活性化制御性T細胞の機能解析

このプロトコルは、in vitroでのナイーブCD4 + T細胞から人為的な制御性T細胞（iTregs）の再現性の生成と表現型を説明しています。 Foxp3誘発のための異なるプロトコルは、それぞれのプロトコルを用いて得られた特定のiTregの表現型の研究を可能にします。...

TGF-βを含むプロトコルを使用したナイーブCD4 + T細胞からのヒトCD4 + FOXP3 +誘導された調節性T細胞（iTregs）のインビトロ分化における

ここでは、受信者からの明瞭な細胞のサブセットの抑制能力と受信者ドナーまたは外因性の抗原への免疫の状態、移植、耐性を誘導し、 in vitroとin...

体外と体内の T, B, 骨髄細胞の抑制活性と移植から体液性応答の評価

本論文では、三次元(3D)胸腺培養系により腫瘍抗原特異的誘導多能性幹細胞由来の甲状腺系(iTE)を生成する新しい方法について説明する。iTEは、増殖、記憶形成、腫瘍抑制の能力を有するナイーブT細胞と密接に関連するT細胞の均質なサブセットである。...

マウス誘導多能性幹細胞由来腫瘍抗原特異的胸腺移民を生成する三次元胸腺培養システム

ここでは、定量PCR(qPCR)を用いて検出されたエピジェネティックシグネチャを通じて免疫細胞の同一性と純度を決定する堅牢な方法について説明します。特定の遺伝子座でのDNA脱メチル化は、特定の細胞タイプの一意の識別子として機能し、CD8+、調節、またはTh17...

エピジェネティックベースの定量PCRを用いた免疫細胞の同一性と純度の測定

学ぶ 調節T細胞の機能分析手法。マウスTreg細胞とナイーブT細胞の共培養により、効果T細胞の増殖とTh1・Th17分化を同時評価する。フローサイトメトリーで解析し、自己免疫疾患治療研究に応用可能。

in vitro 調節T細胞の機能分析:増殖と分化に焦点を当てる

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