Name: 人間の死後の脳組織から神経細胞核の単離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 58 s
Description: 学ぶ 人間の死後脳組織から神経細胞核を単離する方法。密度勾配遠心とフローサイトメトリーにより、クロマチン相互作用と神経特異的遺伝子発現を研究できます。

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著者らは、マサチューセッツ大学医学部でのフローサイトメトリーコアファシリティで博士リチャードKonzとスタッフによるアドバイスや技術的なご支援を賜りますようお願い申し上げます。糖尿病内分泌学研究センター助成DK032520でサポートされているコアのリソースも使用した。この作品は、国立精神衛生研究所（NIMH）、薬物乱用の国立研究所（NIDA）と母子保健と人間開発の国立研究所からの補助金によってサポートされています。

核抽出<ol><li> douncerに5 mlの溶解バッファー1で冷凍死後の脳組織の250mgを入れ、氷の上に置きます。ソートFACS後の約500万人の核を受信するには、我々は通常、サンプルあたり組織の1000mgのを使用してください。 </li><li>組織が融解した後、しばらく氷上で1分間組織をダウンス。 </li><li>ホモジナイズした組織を取り、15 mLの明確な遠心チューブに入れてください。チューブを氷上に置く。 </li><li> 、ピペットでショ糖溶液2の9 mLを取る明確な超遠心チューブの底にピペットを入れ、ショ糖液2の上にホモジナイズした組織液で濃度勾配を作成するためにショ糖液2を離します。 </li><li>超遠心機の中で回転しながら、それらがすべてバランスされることを確認するために超遠心チューブを秤量する。最上層に溶解バッファー1を添加することにより重量に任意の調整を行う。 </li><li>チューブの重量を測定された後、ローターのバケットに入れます。 </li><li> SW28ローター中にすべてのバケツを置き、慎重に超遠心機にローターを配置。 </li><li> 4℃で2.5時間107163.6 RCFでサンプルを超遠心機℃に</li><li>遠心分離が完了するとチューブの下部にある原子核を含むペレットを乱さないように注意しながら、、真空を使用して、濃度勾配で見つかった残骸の層と一緒に、上清を取り除く。 </li><li>各ペレットに1X PBS 500μLを追加し、20分間氷上に放置。これは、後で簡単に機械的ストレスの量は核の経験を少なくなる、ピペッティングによってそれを溶解すること、ペレットが独自に少しを溶解することができます。 </li><li>原子核は、20分間氷上でインキュベートした後、機械的に完全に1XPBS内核を溶解するために上下にピペッティングし。 </li><li>超遠心管から核を含有する溶液を除去し、単一の2 mLのマイクロ遠心チューブに2本の管の内容を組み合​​わせる。再び、氷の上にサンプルを置きます。 </li></ol> FACSのために免疫染色<ol><li>この時点で、一次および二次抗体、およびブロッキングミックスで構成される免疫染色液を作る。各サンプルについて、NeuN抗体、1XPBSに0.5％BSA、10％正常ヤギ血清を含む、およびAlexa Fluor 488の1μLミックスをブロッキングの100μL、1.2μLを含む1XPBS300μLを組み合わせる。コントロールのサンプルについては、一次抗体のNeuNを除外し、代わりに、単により多くの1XPBSを追加。 </li><li>渦暗所で室温にて5分間、免疫染色混合物とインキュベート。 </li><li>染色混合物がインキュベートされている間、サンプルのコントロールを行います。ソートFACSの場合、サンプルは、単独で核を含む、&quot;未染色のコントロール&quot;が必要とされると呼ばれる、番目のサンプル、ネガティブコントロール、一次抗体のNeuNも必要とされることなく、二次抗体のAlexa Fluor ® 488核を含む。 </li><li>ネガティブコントロール用1XPBS 980 ULを含む別の2 mlチューブに染色制御用1XPBS、そして別の20μLを含む2 mlのマイクロチューブに溶液を含む原子核のアリコートを20μL。核含有1XPBSとバックアップを1 mLのサンプルの音量を上げる。すべてのサンプルは氷上に戻って配置されます。 </li><li>免疫染色の混合物がインキュベート終了したので、適切なサンプルに401μLのその内容を追加します。負のサンプルのみを二次抗体のAlexa Fluor ® 488を含む混合物を受け取る一方核のサンプルは、NeuNおよびAlexa Fluor 488の両方を含む混合物を受け取ります。 </li><li> 45分間暗所で回転するように寒い部屋にサンプルを取る。 </li><li>サンプルは45分間、暗所でインキュベートした後、氷の上に置くとFACSの施設にそれらをもたらす。 FACSの施設への輸送中に、サンプルは氷上で、暗所で保管してください。 </li></ol> FACS <ol><li> FACSの施設で、40ええとフィルタを通してサンプルをフィルタリングする。次に、ソートの前にいくつかの予備データを取得するためには、低温に保たれている間、数分間楽器を介してそれらを実行する。 </li><li>この時点で、それは、ソートに必要な適切なゲートを設定する必要があります。いくつかの異なるゲートは、ソートのサンプルに使用されます。最初のゲートは、サンプル内にある別の原子核の大きさのアイデアを与え、実際の原子核からごみのseparatationすることができます。秒のゲートは、私たちが個々に核をソートすることができます。破棄いかなる凝集体はこの時点で破棄されます。最後に、第3のゲートは、私たちの二次抗体で検出された蛍光色素のことと一致する、特定の蛍光波長に設定されています。このゲートを配置することで、並べ替えることができます、したがって、別のNeuN +の、NeuNから神経細胞の核 - 核。 </li><li>すべてのゲートが選択された後、核が1XPBSに並べ替えることができます。 </li><li>一全サンプルが通過した、楽器によってソートされた試料のアリコートを実行することにより、ソートの純度を確認してください。サンプルの蛍光が広がっていない、のではなく、単一の象限内に含まれていることを確認してください。 90％以上の純粋なサンプルを選択することが最善です。 </li></ol> FACSの後<ol><li>サンプルがソートされると、原子核の処理を開始することができます。ソートされたサンプルの10mLを取り、それにショ糖液2の2 mlを加え、1M CaCl 2及び1メートルマグネシウム（エース）2の30 ulの50μlの。念のため、常に核に修正されていないなので、サンプルを氷上で保管してください。 </li><li>ソートされたサンプルの10未満mLのがある場合は、1XPBSを追加することによって、10mLに音量を上げ上げ、またはそれに応じて追加の材料を調整する。 </li><li>サンプルを15分間氷上で数回と場所を反転。 </li><li>サンプルは15分間氷上でインキュベートした後、4℃で15分間1786 RCFで、スイングバケットローターでそれらを遠心℃に </li><li>チューブの下部にある白いペレットが剥がれないように、真空の使用で上清を捨てる。 </li><li>先に進むの実験に必要なあらゆる溶液200μlにペレットを溶解し、上下にピペッティングし。 </li><li>小さなチューブにソリューションを転送し、さらに使用するまで-80℃の冷凍庫に保存してください。 </li></ol>

<ol><li>Siegmund, K. D., Connor, C. M., Campan, M., Long, T. I., Weisenberger, D. J., Biniszkiewicz, D., Jaenisch, R., Laird, P. W., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+methylation+in+the+human+cerebral+cortex+is+dynamically+regulated+throughout+the+life+span+and+involves+differentiated+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">DNA methylation in the human cerebral cortex is dynamically regulated throughout the life span and involves differentiated neurons.</a> PLoS ONE. 2, 895-895 (2007).</li>
<li>Jiang, Y., Matevossian, A., Huang, H. S., Straubhaar, J., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neurosci. 9, 42-42 (2008).</li>
<li>Spalding, K. L., Bhardwaj, R. D., Buchholz, B. A., Druid, H., Frisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrospective+birth+dating+of+cells+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Retrospective birth dating of cells in humans.</a> Cell. 122, 133-143 (2005).</li>
<li>Acevedo, L. G., Iniguez, A. L., Holster, H. L., Zhang, X., Green, R., Farnham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+ChIP-chip+analysis+using+10%2C000+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Genome-scale ChIP-chip analysis using 10,000 human cells.</a> Biotechniques. 43, 791-797 (2007).</li>
</ol>

ここで紹介するプロトコルは、より一般的にはエピジェネティックな神経細胞クロマチンの変化と、上に、神経核の分子表現型上に、通常の開発と老化の間に、または神経学的または精神疾患に焦点を当てた研究のために特に有用であろう。潜在的な老化の過程でニューロンからグリアの配給量の変化や病気に起因するを含む脳組織の細胞の不均質性は、懸念さ1のときの方法が特に有利で ​​ある。例えば、クロマチン免疫沈降の技術と現在のソートプロトコルを組み合わせることにより、我々は最近、神経栄養因子（BDNF）遺伝子のプロモーター、およびその他の神経細胞の遺伝子のための2由来の脳で神経特異的ヒストンメチル化パターンを説明した。同様のメソッドは、遡及誕生デート3の成人の大脳皮質から神経細胞を収集するために以前に使用されていた。ソート技法は、マウス脳の2で採用され、ために核の安定性の凍結後融解した組織を、我々はここで紹介するアプローチは、種の広い範囲に適用可能であることが予想される。れましたため、わずか10,000細胞のクロマチン免疫沈降法をさらに包括的なゲノムカバー率4で実現可能なので、我々は上記で推奨する...

試薬： <table><tr><th colspan="3" align="left"> 1。溶解バッファー</th></tr><tr><td> 0.32M </td><td>スクロース</td><td> 5.47グラム</td></tr><tr><td> 5mMの</td><td> CaCl 2の </td><td> 250μlの</td></tr><tr><td> 3mMの</td><td> MG（アセテート）2 </td><td> 150μlの</td></tr><tr><td> 0.1 mMの</td><td> EDTA </td><td> 10μlの</td></tr><tr><td> 10mMの</td><td>トリス- HCl、PH8 </td><td> 500μlの</td></tr><tr><td> 1mMの</td><td> DTT </td><td> 17μlの</td></tr><tr><td> 0.1パーセント</td><td>トリトンX - 100 </td><td> 50μlの</td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0">オートクレーブした水で50mlにボリュームを調整</td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 2。蔗糖液</th></tr><tr><td> 1.8 M </td><td>スクロース</td><td> 30.78グラム</td></tr><tr><td> 3mMの</td><td> MG（アセテート）2 </td><td> 150μlの</td></tr><tr><td> 1mMの</td><td> DTT </td><td> 17μlの</td></tr><tr><td> 10 mMの</td><td>トリス- HCl、PH8 </td><td> 500μlの</td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0">オートクレーブした水で50mlにボリュームを調整</td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 3。バッファをダウンス</th></tr><tr><td> 10 mMの</td><td>トリス</td><td> 0.242グラム</td></tr><tr><td> 4mMの</td><td> MgCl 2の </td><td> 0.163グラム</td></tr><tr><td> 1mMの</td><td> CaCl 2の </td><td> 0.03グラム</td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> pHを7.5に調整し、オートクレーブした水を加えて200mlにボリューム</td></tr></table>

人間の死後の脳組織から神経細胞核の単離

Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

人間の脳のニューロンは、主に出生前の開発中に分裂となるため、完全な生涯を通じて、その核を維持する。しかし、少しは開発し、老化の過程で、または慢性の精神神経疾患における神経細胞のクロマチンと核組織の変化についてはほとんど知られていない。しかし、ほとんどのクロマチンおよびDNAベースのアッセイ（FISH以外の）不足、単一セルの分解能日付を記入すること。神経細胞の典型的に様々な亜集団がグリア細胞と他の非神経細胞の種類と混ざりされているため、この目的のために、脳組織のかなりの細胞の不均質性は、重要な制限をもたらす。一つの可能​​な解決策は、細胞型特異的な文化を育てることですが、神経細胞を含むほとんどの中枢神経系の細胞は、、数週間で、最高の状態で、持続可能なex vivoのであり、したがって潜在的に完全な寿命にわたって動作エピジェネティックな機構のための不完全なモデルを提供するであろう。ここで、我々は凍結（固定しない）人間の死後の脳から核を抽出し、精製するプロトコルを提供しています。方法は、抗NeuN抗体による超遠心やimmunotagging続いて、低張溶解緩衝液中で核の抽出を行います。標識された神経核は、蛍光活性化ソーティングを使用して別々に収集されます。このメソッドは、種の広い範囲内の任意の脳の領域に適用し、サイトと修正特異的抗ヒストン抗体とクロマチン免疫沈降の研究のための、およびDNAメチル化および他のアッセイに適しているはずです。

ほとんどのアッセイは、単一セルの分解能が不足しているため脳組織の細胞の不均質性は、クロマチンにおけるエピジェネティックなマーキングの研究のための重大な制約をもたらす。ニューロンは通常、グリア細胞および他の非神経細胞が混在しています。私たちは、人間の脳から神経細胞核を抽出して収集するプロトコルを提供しています。

ヒトの脳におけるニューロンは、主に胎児期の発達過程でポストミトーシス（有糸分裂後）の状態となり、そのため生涯を通じて核を維持します。しかしながら、...

ヒト脳におけるニューロン特異的な遺伝子発現を制御するクロマチンDNA相互作用を研究するためには, まずニューロン核の純粋な集団を得る必要があります。死後ヒト脳組織をホモジナイズし, 密度勾配遠心法を用いて全核を単離します。次に, ニューロン特異的抗体で核を標識し, フローサイトメトリーによるソーティングで分離した後, 最終的に超遠心分離法で濃縮します。こんにちは。マサチューセッツ大学医学部精神科のSharon mc Barian博士の研究室に所属しているAnish Matanです。本日は、死後ヒト脳組織から神経細胞核を単離する手順について説明します。それでは始めましょう。ソートする各核サンプルについて、1,000 mgの凍結死後脳組織から開始します。この量から、蛍光活性化細胞分取（FACS）後に約500万個のニューロン核を得ることができます。核抽出を開始するには、250 mgの脳組織を5 mLの溶解バッファーを含むダウンチューブに入れ、氷上に置きます。組織を解凍後、氷上で1分間ダウンサイジングします。ダウンサイジング後、ホモジナイズした組織を15 mLの透明超遠心管に移し、チューブを氷上に置きます。残りの組織についても、このホモジナイズ操作を繰り返します。次に、ホモジナイズした組織溶液がショ糖溶液の上に載るように濃度勾配を作るため、ショ糖溶液9 mLを carefully に超遠心管の底へピペッティングします。次に、超遠心分離中にバランスが保たれるよう、超遠心管の重量を測定します。重量の調整が必要な場合は、最上層に溶解バッファーを添加して調整してください。重量測定後、SW 28ローターを用いて超遠心機にセットし、4°C、107,163.6 RCFで2.5時間、超遠心分離を行います。遠心分離が完了したら、上清と濃度勾配に形成されたデブリ層を吸引して除去します。チューブ底部にある核を含むペレットを乱さないように注意してください。次に、各ペレットに500 µLの1X PBSを加え、氷上で20分間静置します。20分後、ピペッティングによってペレットを再懸濁します。氷上でのインキュベーションにより、ペレットが自然にわずかに溶解するため、核をより容易に再懸濁でき、核へのストレスを軽減できます。その後、再懸濁した核を2 mL centrifuge tubesに移します。2本の超遠心管から得られた核酸溶液を、それぞれマイクロ遠心チューブにまとめ、再度サンプルを氷上に置きます。核酸抽出が完了したため、次に、FACSソートにより神経細胞核を分離するための免疫染色ステップに移ります。核を含むサンプルを、一次抗体と二次抗体、およびブロッキング剤からなる免疫染色混合液とともにインキュベートします。免疫染色混合液を調製するには、1.2 µLの神経細胞特異的抗体NeuNを300 µLの1x PBSに加えます。次に、0.5% BSAおよび10%正常山羊血清を含む1x PBSのブロッキングミックスを100 µL加えます。最後に、LOR 4 88と呼ばれる二次抗体を1 µL添加します。また、この免疫染色の混合液を用いて、陰性対照サンプルのための免疫染色を準備します。一次抗体を除き、代わりに1X PBSを1.2 µL加えます。次に、免疫染色の混合液をボルテックスし、染色混合液のインキュベーション中、室温かつ暗所で5分間インキュベートします。陰性コントロールサンプル用にコントロール核サンプルを調製します。1 XPBS 980 µLを含む2 mLチューブに、再懸濁した核を20 µL分量、分注します。また、核溶液とPBSのみを含む未染色コントロールも調製します。次に、核懸濁液 20 µL を別のチューブに分注し、1×PBS で液量を 1 mL に戻します。その後、すべてのサンプルを再び氷上に置きます。これで、免疫染色混合液の調製が完了しました。適切に分注したサンプルに、混合液を401 µLずつ加えます。核サンプルの試料には、newおよびLOR 4 88の両方を含む混合液を加えました。陰性コントロールサンプルには、二次抗体であるLOR 4 88のみを含む混合液を加え、無染色コントロールサンプルには免疫染色の添加を行いませんでした。次に、サンプルをコールドロンに移し、暗所で45分間回転させます。45分間のインキュベーションが完了しましたので、サンプルをマサチューセッツ大学医学部のフローサイトメトリー・コアファシリティに運び、蛍光活性化細胞分取（FACS）を行います。コアファシリティへの運搬中、サンプルは氷上で遮光状態で保持してください。フローサイトメトリー・コアファシリティでは、まずサンプルを40 µmのフィルターでろ過し、その後、低温を維持しながら数分間装置にかけます。これは、ソーティングを行う前に予備データを取得するために行います。未染色のコントロールによって、ネガティブ蛍光の程度を決定します。この情報に基づいて、装置の蛍光感度を調整してください。染色コントロールは、蛍光のコントロールに使用されます。この時点で蛍光によるバックグラウンドノイズを確認し、ソートに必要な適切なゲートを設定します。サンプルのソートには、いくつかの異なるゲートが使用されます。以下は、最初のゲートに関する典型的なデータです。このfax解析チャートは、ゲート調整後の代表的なサンプルを示しています。最初のゲートでは、蛍光などの設定と一般的な視覚的経験を組み合わせて、デブリと生存核のパターンを認識します。x軸は前方散乱光を表し、これは相対的な大きさに対応します。一方、y軸は側方散乱光であり、顆粒度などの内部複雑性を表します。最初のゲートにより、サンプル内で検出された異なる核のサイズを把握することも可能です。これにより、デブリと実際の核を分離でき、ここでは2番目のゲートから得られた代表的なデータを提示します。このファックスチャートは、凝集物を排除しながら核を個別にソートすることを可能にする、2番目のゲートの例を示しています。このゲートでは、核がレーザーを通過するのにかかる時間の差を解析します。通常、凝集物は通過に時間がかかります。凝集塊が含まれていると、一部の蛍光核が非蛍光核と結合している可能性があり、純度に影響を及ぼすため、このパラメータは非常に重要です。最後に、3番目のゲートから得られた典型的なデータを示します。このゲートは、二次抗体に含まれるフルオロフォアの蛍光波長に合わせて設定されています。このファクチャートでは、X軸に蛍光レベル、Y軸にディープレッドチャンネル検出器のPECy7が表示されています。これらのドットプロットは、単色のヒストグラムと比較して、より優れた視覚的判断を可能にします。SCADAを用いることで、ニューロン陽性核をニューロン陰性の非ニューロン核からソートして分離させることができます。すべてのゲートを選択した後、核を1つのXPBSにソートします。サンプル全体がソートされた後、ソート済みサンプルのEloquaを装置で走らせて、ソートの純度を確認します。以下に最適結果の例を示します。ここでは、核の混合集団を含むソート前のサンプルと、陰性核の大部分が除去されたソート後のEloquaを比較します。純度の割合は、設定されたゲートに基づき、サンプルに混入しているイベント数に基づいていることに注意してください。また、サンプルを最初に装置に通した際に、一部で退色が生じ、輝度が低下することがあります。これを考慮し、いくつかの調整が必要になる場合があることを念頭に置いてください。サンプルのソートが完了したら、核の処理を開始します。まず、ソート済みサンプルを10 µL取り、2 µLのスクロース溶液、50 µLの1 M塩化カルシウム、および30 µLの1 M酢酸マグネシウムを加えます。ソート済みサンプルが10 µLに満たない場合は、1x PBSを加えて10 µLまで増量させるか、あるいは添加量を適宜調整してください。次に、サンプルを数回転倒混和し、氷上で15分間静置します。15分後、スイングバケットローターを用いて、4°C、1,786 RCFで15分間遠心分離します。遠心分離後、チューブ底部の白いペレットを乱さないように、上清を慎重に吸引除去します。次に、前の実験で必要だった適切な溶液200 µLでペレットを溶解させます。今回は、後続のチップ実験のために、ペレットを溶解バッファーで溶解しています。その後、ピペッティングによってペレットを再懸濁させます。この時点で、核をより小さなチューブに移し、-80 °Cのフリーザーに保管することができます。これで、ヒトの死後脳組織から神経細胞核を単離する方法について説明しました。これらの核を用いて、クロマチン免疫沈降などのさまざまな解析を行うことが可能です。この手順を行う際は、核が固定されておらず高温で分解する可能性があるため、サンプルを常に氷上に保持することが重要です。また、ヒト組織はバイオセーフティレベル2以上の安全基準に従って取り扱う必要があります。以上です。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

我々は、死後、人間の脳の上側頭回の層IIIの均質な細胞集団、錐体細胞からRNAを分離して抽出するためにレーザーキャプチャーマイクロダイセクションを使用してプロセスを説明します。私たちは、その後直線的に（T7ベース）mRNAを増幅し、Affymetrix社人間X3Pマイクロアレイにサンプルをハイブリダイズする。...

人間の死後の脳組織における単一細胞から、高品質のRNAを取得

心臓核密度沈降を介して分離し、フローサイトメトリーにより心筋細胞核を識別し、ソートするための中心体周辺物質1（PCM-1）に対する抗体で免疫標識されています。...

事後組織から心筋細胞核の分離

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新鮮凍結神経膠腫組織からの核の単離:神経膠腫腫瘍サンプルから無傷の核を得る方法

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海馬歯状回における非神経細胞から核を分離する技術

このビデオでは、蛍光活性化核選別(FANS)を使用して、新鮮凍結ヒト脳組織から核を分離し、選別する手順を示しています。これにより、さまざまな神経学的応用のための異なる細胞集団の研究が可能になります。...

蛍光活性化核ソーティングを用いた脳組織からの細胞集団の単離

腫瘍内不均一性は、神経膠腫を含む腫瘍の固有の特徴である。我々は、単核RNAおよびATACシーケンシング研究のために、新鮮な凍結したグリオーマ組織から単一核を単一核に分離するために、バッファーと勾配遠心分離の組み合わせを利用するシンプルで効率的なプロトコルを開発した。...

単核RNA-seqおよびATAC-seqのための新鮮な凍結脳腫瘍からの核分離

我々は、下流の分子分析に使用するために、ヒトアストロサイト集団を新鮮凍結組織から濃縮し、単離する方法を開発しました。...

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海馬神経原性ニッチを研究するための単一核RNAシーケンシングと組み合わせたニューロンの蛍光活性化核ネガティブソーティング

この研究では、下流の単一核RNAシーケンシングのために、凍結した哺乳類組織から高品質の核を単離するための、シンプルで迅速、かつ部分的に自動化されたプロトコルについて説明しています。...

単一核の配列のための凍結した哺乳類ティッシュからの単一核の隔離のための簡単で、速く、部分的に自動化されたプロトコル

単一細胞/単一核のトランスクリプトミクスおよびマルチオミクスの成功は、細胞/核の品質に大きく依存します。したがって、組織からの細胞/核の分離とその精製は高度に標準化されなければなりません。このプロトコルは下流の単一核のmultiomeの試金のための頭脳および骨髄からの核の準備を記述する。...

単一核マルチオームアッセイのための高品質脳および骨髄核調製(英語)

学ぶ 人間の死後脳組織から神経細胞核を単離する方法。密度勾配遠心とフローサイトメトリーにより、クロマチン相互作用と神経特異的遺伝子発現を研究できます。

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