이 동영상 기사에서 우리는 하이 포스트 - 해동 서바이벌 속도로 햄스터 oocytes를 수집하고 cryopreserve하는 방법에 대한 단계별 데모를 제시한다. 동일한 절차도 성공적으로 동결과 preimplantation 개발의 다른 단계에 마우스 배아를 해동 적용할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
언제 위팅엄 배아와 oocytes 처음으로 성공적으로 30여 년 전에 cryopreserved되었습니다
프로토콜
동물 보호 절차 동물과 바르셀로나, 스페인 Universitat Autònoma 인간 연구에 대한 윤리위원회의 승인 지침과 규정에 따라 실시되었다.
I.의 Oocyte 컬렉션
- 두꺼운 질 분비물 (postovulatory 방전)의 존재에 대한 골든 시리아 변형의, 여성 햄스터 (8-12주의 옛 Mesocricetus auratus)을 확인하고 선택합니다.
- 60시간 나중에 PMSG 40 IU의 intraperitoneal 주사 (임산부 마레 세럼 생식 샘 자극 호르몬) hCG (인간 Chorionic 생식 샘 자극 호르몬)의 40 IU 다음으로 superovulate 선택한 여성을 유발.
- 16 시간 이산화탄소 챔버의 hCG의 관리 후 여성의 햄스터를 안락사.
- 로 비디오에 나타난 여성의 oviducts 격리하고 KSOM - H 매체의 드롭에게 전송할 수 있습니다.
- 37 hyaluronidase (156 U / ML)의 드롭 입체 현미경 수란관 ampulla을 이간하여 oocyte - 큐뮬러스 단지를 수집 ° C. Oocytes은 약 5 분 큐뮬러스 세포에서 해방된 것입니다.
- hyaluronidase의 oocytes을 들고 KSOM - H....
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토론
이 프로토콜의 햄스터 oocytes와 마우스 배아가 성공적으로 cryopreserved 수로. 일단 냉동, oocytes / 배아가 무한정 액체 질소 탱크에 저장하고 원하는 어떤 시간이나 장소에서 복구할 수 있습니다. 이것은 필요한 때마다 사용하는 샘플을 거의 준비가 갖는 장점을 제공합니다. 한편,이 프로토콜은 또한 라이브 동물 식민지의 유지 관리를 위해 경제적이고 안전한 대안으로 가치 마우스 종자 (예 : 유전자 변형 라인 등)에서 배아 cryobanks를 생성하는 데 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 햄스터 oocytes 및 하이브리드 B6CBAF1 마우스 배아를 cryopreserve하도록 최적화됩니다하는 것이 중요합니다. 다른 유전 배경과 마우스 배아 중 후 해동의 생존 요금의 차이는 치료가 각 종 또는 oocytes / 배아의 변형에 cryopreservation 조건을 평가하고 oocyte의 발생 전에 적절한 프로토콜을 확립하기 위해 이동해야하므로, 8,9을 설명했습니다 또는 배아 cryobanks.
햄스터 oocyt.......
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감사의 글
이 작품은 스페인 정부의 드 Educación Y Ciencia (BIO 2006-11792)와 Generalitat 드 Catalunya (2005 - SGR00437)에 의해 지원되었다. 저자는 미디어를 준비하는 그들의 기술 지원을 마크 Puigcerver 및 Jonatan 루카스에게 감사를 표합니다. Servei D' Estabulari의 모든 직원은 동물의 주택에 대한 인정, 그리고이 비디오의 일부를 녹화에서 자신의 추가적인 기여 특히 후안 호세 마틴과 하비에르 베니토입니다. NCB가 Ciência E Tecnologia과 SG는 스페인 정부의 드 Educación Y Ciencia의 동료입니다 포르투갈어 Fundação 파라의 동료입니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 재료명 | 유형 | 회사 | 카탈로그 번호 | 비고 |
| French type mini-straw 0.25 ml | Mini-tub | 13407/0010 | ||
| hCG | Farma-Lepori, Spain | 749036.4 | ||
| Hyaluronidase | Sigma | H-3884 | ||
| KSOM-H 배지 | 참조 [11] | |||
| 액체 질소 | Air Liquide | |||
| 플라스틱 플러그 | Mini-tub | 19046 | ||
| PMSG | Intervet, Spain | 1.614/8447 | ||
| Propilenglycol | Fluka | 82280 | ||
| Sucrose | Merck | 107687 | ||
| 수술용 가위 | Aesculap | BC-060R; BG-061R | ||
| 열 밀봉기 | SIZ | 220 | ||
| 35 및 90 mm 배양 접시 | Nunc | 153066; 150350 | ||
| 10 ml 튜브 | Greiner Bio-one | 163160 | ||
| 질소 탱크 | MVE, Cryogenics | XC 43/28 | ||
| 프로그래밍 가능 냉동고 | Planner Products Ltd. | Kryo-10 Series III | ||
| 포셉 | Aesculap | BD-331R; BD-053R; OC-020R |
참고문헌
- Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C. Science. 178, 411-414 (1972).
- Wilmut, I. The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of develo....
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재인쇄 및 허가
