지드 셀의 파생물로 효모 연대기의 수명 Quantifying

요약

효모의 연대순의 노화는 고정 단계에서 시간과 관련된 세포 생존 능력의 상실을 말합니다. 여기 양적 효모 연대기 수명을 결정하는 높은 처리량 방법을 설명합니다.

프로토콜

1 부 : 노화 문화의 작성

1. YEPD 한천 플레이트에 냉동 주식 (1 % 효모 추출물, 2% bacto - 펩톤, 2 %의 한천, 2 % 포도당)에서 관심 스트 리크 변종.
2. 30 ˚ C 48 시간 단일 식민지가 나타날 때까지 전지를 품어.
3. 테스트 튜브에 YEPD 액체 매체 5 ML (1 % 효모 추출물, 2% bacto - 펩톤, 2 % 포도당)로 하나의 식민지와 예방을 선택하십시오.
4. 30 밤새 문화 ˚ C 쉐이크 또는 롤러 드럼을 사용하여 지속적인 교반을 유지하면서. 그로
5. 숙박 문화의 50 μL와 합성 전체 (SC) 중간 5 ML (표 1)을 예방. 일반적으로 세 SC 문화는 검사되는 각 변형에 대한 수명 분석 세중의 생물 학적 복제를 제공하기 위해 각 변형에 대한 준비가되어 있습니다.
6. 30 문화를 유지 ˚ C 전체 실험 (일반적으로 2 개 이상 주) 대한 롤러 드럼에 대한 끊임없는 동요와 함께.

2 부 : 생존 연령 지점을 촬영

SC 미디어 문화의 두 일 후에, 세포는 정지 단계에서해야하고 나이 지점 첫 촬영 준비가 된 것입니다. 이후 나이 지점은 두 개의 주 최소 2-....

토론

여기에서 설명한 높은 처리량 연대기 수명 분석은 높은 정확성과 정밀도와 변종 다수의 고령화 잠재력을 quantifying위한 효과적인 방법입니다. 식민지 - 형성 단위 (예 ^{3 참조)} 계산에 의해 생존을 결정하는 고전적인 방법을 통해이 방법의 주요 사전은 높은 해상도의 성장 곡선을 얻기 위해 같은 Bioscreen C MBR 시스템으로 쉐이크 / 보육 / 플레이트 읽기 장치의 사용이다 각 나이 가리 킵니다. 낮은 처리량 연대기 수명의 assays와 직접 비교,이 방법은 크게 ⁴ 분석할 수 샘플의 수를 증가하면서 비교 (이상) 정밀도를 달성하기 위해 표시되었습니다.

위에서 설명한 방법은 노화 연구에 대한 일반적으로 사용되는 문화 조건 변경 연대기 장수 유전자 변종을 검사에 적합합니다. 이 방법은 쉽게 다른 문화와 같은 호흡기 성장에 사전 적응 (글리세롤 탄소 소스) ^5, 물속에 유지 보수보다는 만료 미디어와 같은 조건,.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Bacto 펩톤	시약	BD Biosciences	211677
Bacto 효모 추출물	시약	BD Biosciences	288620
Difco 한천	시약	BD Biosciences	214530
Yeast Nitrogen Base (아미노산 및 황산암모늄 제외)	시약	MidSci	J630-500G
아미노산	시약	Sigma-Aldrich
황산암모늄	시약	Spectrum	AM185
덱스트로스	시약	Fisher Scientific	D16-10
Bioscreen C MBR 기기	도구	Growth Curves USA	5101370
Bioscreen 100-웰 허니콤 플레이트	도구	Growth Curves USA	9502550