Method Article

해수 샘플링 및 수집

DOI:

10.3791/1159

⸱

June 17th, 2009

 ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, University of British Columbia - UBC

In This Article

Summary

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이 동영상은 문서 해안 해양 물 샘플을 수집 및 바이오 매스 농도, 핵산 정화, 세포 풍부, 영양 및 추적 가스 분석 등 다양한 어플 리케이션을위한 스트림을 처리하는 방법을.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 동영상은 문서 해안 해양 물 샘플을 수집 및 바이오 매스 농도, 핵산 정화, 세포 풍부, 영양 및 추적 가스 분석 등 다양한 어플 리케이션을위한 스트림을 처리하는 방법을. 오늘의 데모 샘플 사니치 후미에 HMS 존 스트 리클 랜드 운영의 갑판에서 수집되었다. 다목적 윈치 및 케이블 시스템 데릭 A - 프레임, Niskin와 함께 사용하거나 이동 - 플로 물 샘플링 병입니다. 전도도, 온도 및 깊이 (CTD) 센서도 기본 물의 질량을 샘플하는 데 사용됩니다. outgassing 최소화하려면, 추적 가스 샘플 먼저 수집하고 있습니다. 그런 다음, 영양분, 물 화학, 세포 카운트가 결정됩니다. 마지막으로, 바닷물은 바이오 매스 여과를 위해 수집됩니다. 단일 캐스트에 대한 설정 및 수집 시간은 215m 최대 깊이에 ~ 1.5 시간입니다. 따라서 6 시간 총 일반적으로 여기에서 설명한 컬렉션 시리즈를 완료하는 데 필요합니다.

Protocol

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1 부 : 워터 콜렉션

  1. 깊이는 각 주조에 할당됩니다.
  2. 깊이는 샘플 수와 현재 캐스팅을 위해 수집하는 전체 볼륨이 결정됩니다.
  3. 이것은 이동 - 플로와 Niskin 병이 열려 있으며, 그들의 밸브 및 spigots이 폐쇄되는 것을 보장합니다.
  4. CTD는 라인의 맨 아래에 읽어와 물로 낮습니다.
  5. 캐스팅에서 채취한 깊은 깊이에 대한 병 먼저 CTD 후 라인에로드되며 이것은 라인이 제대로 브라켓에 장착되어 보장되고 나사가 강화됩니다.
  6. 메신저가 저하되기 전에 (가장 깊은 제외한) 각 병에 첨부되어 있습니다.
  7. 라인은 첫 번째 깊이와 다음 사이의 거리를 저하되며 한병 그런 다음로드됩니다. 그것은 20L가 여과에 대한 수집 아르 깊이에 대해, 2 12L 병 총이 떨어져 0.75 m에 대해 연속적으로로드되는 것을인지해야합니다.
  8. 모든 병이 달린되면, 라인은 원하는 깊이에 넣어 져서 2 분 통과 허용됩니다.
  9. 메신저가 아래로 전송되고 몇 분 모든 병 가까이를 보장하기 위해 전달 사용할 수 있습니다.
  10. 라인에 reeled하고 그들이 랙에에 와서 같이 병이 언로 드됩니다.
  11. DNA와 RNA에 대한 20L 샘플을 필요로 깊이 들어, 두 Niskin 병을 수집합니다. 다른이 상자 속에 든 대형 유리병에 탈진하는 동안 한 병은, 화학 매개 변수 (아래 참조) 샘플하는 데 사용됩니다. RNA는 두 번째 Niskin에서 즉시 수집됩니다. 최초의 나머지 부분도 ~ 20L 최종 볼륨을 줄 수있는 상자 속에 든 대형 유리병에 새겨 졌던 것입니다. 저해상도 샘플 물만이 1L는 무균 Nalgene 병의 여과를 위해 별도로 설정됩니다.

2 부 : 가스 샘플 모음

  1. 산소 샘플이 필요한 경우, 먼저 수집하고 있습니다.
  2. 얇은 튜브의 조각은 Niskin에 첨부된 / 이동 - 플로 삽입 및 튜브의 다른 쪽 끝을은 유리 혈청 병으로 자리를 배치됩니다.
  3. 혈청 병은 샘플 물로 3 번 씻어서하고, 기포가 존재하지 않는 등으로 가득차있다.
  4. 50μl 수은 염화물 (HgCl 2) 샘플로 공기 방울을 소개하지 않는 방식으로 혈청 병에 추가됩니다.
  5. 병은 고무 마개와 알루미늄 마개와 곱슬머리로 밀폐되어 있고, 다음 냉장고에서 얼음에 저장됩니다.

파트 3 : 영양소 샘플 모음

  1. 60 CC 주사기가 샘플 물로 씻어서입니다 (0.2 μm의)가 온라인에 연결되어 일부 물이 acrodisc을 통해 밀려있다.
  2. 폴리에틸렌 병은 (rinsing 때 병을 흔들) ~ 10 ML 여과 물을 3 번 씻어서입니다.
  3. 필터링 샘플 물은 약 ​​병에 추가됩니다 벗어 가득.
  4. 예제는 냉장고에 얼음에 저장됩니다.

4 부 : 암모니아 샘플 모음

  1. 샘플 튜브가 샘플 물로 씻어서 있습니다.
  2. 샘플 튜브가 샘플 물로 완전히 채워지게된다.
  3. 샘플 물 5ml는 10ml의 pipet을 사용하여 밖으로 이동되며, 튜브에 물을 나머지는 폐기되고 pipet 팁에서 5ml가 샘플 튜브로 대체됩니다.
  4. 모든 깊이에서 샘플을 수집되고 나면 작업 암모늄 시약의 7.5ml은 각 튜브에 추가됩니다.

제 5 부 : 휴대 열거를위한 샘플 수집

  1. 5.4 ML 37 % 포름 알데히드를 포함하는 미리 표시 50 ML 팰컨 튜브 4 %의 최종 농도에 대한 위로 가득 차 있습니다. 주의 누설하지 않도록합니다.

파트 6 : 수소 황화물 측정 샘플 수집

  1. 20 % 아연 아세테이트 (Zn (O 2 CCH 3) 2)가 포함된 사전 라벨 50 ML 팰컨 튜브가 제일 첫번째로 가득 차 있습니다. 주의 누설하지 않도록합니다.

7 부 : 바이오 매스 농도에 대한 소량의 수집

  1. 1 리터 병은 위로 채워진다.

8 부 : 바이오 매스 농도에 대한 대량 수집

  1. 20 리터 carboys이 채워집니다.

파트 9 : 대표 결과

약 12 용존산소 샘플, 32-48 가스 샘플, 16 영양 샘플, 32 암모늄 샘플, 16 황화수소 샘플, 셀 카운트 16 샘플, 6 20 리터 carboys, 16 1 리터 병에 결과를 샘플링 해수의 최종 결과 및 미생물 바이오 매스를 포함하는 4 Sterivex 0.22μm 필터는 나중에 RNA와 보존.

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Discussion

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전반적으로,이 샘플링 이러한 유형의에 필요한 준비와 계획의 큰 거래이므로 여행 모든 걸 정리 해 줘서 나중에 주문하고 하루 만에 물건을 얻기 위해서는 예산 이일 전에. 일반적으로, 소금물은 연동 펌프와 접촉하거나 필드 장비를 수송하는 데 사용되는 알루미늄 Zarges 상자에 오게하지 않습니다. 존중과 장비를 취급하고 오실 오랫동안 잘 수행합니다.

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Disclosures

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저자는 공개할 것이 없습니다.

Acknowledgements

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우리는 해안과 열린 바다 바닷물의 낮은 산소 지역에 지속적인 연구를 지원하기위한 혁신, 브리티시 컬럼비아 기술 개발 기금과 국립 과학 및 캐나다의 공학 연구 협의회 (NSERC)에 대한 캐나다 재단 감사드립니다. 또한, 도스는 NSERC, 킬람와 툴라 기초 미생물 다양성과 진화에 대한 재정 지원 센터에서 장학금으로 지원했다.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
20L CarboysFisher Scientific02-960-15
3/8" TygonCole-Parmer06429-36
Sterivex 필터Fisher ScientificSVG010RS
Prefilter 하우징 유닛AMD501200
Luer 피팅Cole-Parmer31507-27
1/4" 타이곤 튜빙콜-파머06429-24
1/4" 타이곤 튜빙콜-파머06429-24
1/4" 타이곤 튜빙콜-파머06429-24
50ml 플라스틱 튜브
유리 세럼 병유리 샘플 컬렉션
유리 혈청 병
핸드 크림퍼
20-200ul 피펫 및 팁
유리관암모늄 샘플 수집
30ml 플라스틱 병영양 수집
아크로 디스크 필터EMD Millipore
5 ml 튜브아질산염 샘플 수집
37% 포름알데히드시약세포 수 샘플용
20% 아연 아세테이트시약황화물 샘플용
수은 염화물시약가스 샘플용
milliQ 물시약
암모늄 작업 시약시약붕산염 완충액, 아황산나트륨, 오르토팔라디아미드
시약5g을 450ml 물과 50ml HCl
N-(1-naphthy)-ethylenediamine dihydrochloride 용액약0.5g을 500ml 물에 넣으십시오
용 셉타 및 알루미늄 캡 시.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cline, J. D. Spectrophotometric determination of hydrogen sulfide in natural waters. Limnology & Oceanography. 14, 454-458 (1969).
  2. Holmes, R. M., Aminot, A., Kerouel, R., Hooker, B. A., Peterson, B. J. A simple and precise method for measuring ammonium in marine and freshwater ecosystems. Canadian Journal of fisheries and Aquatic Science. 56, 1801-1808 (1999).

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Seawater SamplingWater CollectionCTD SensorsNiskin BottlesGo Flo BottlesTrace Gas SamplingNutrient AnalysisCell CountingBiomass FiltrationRNA Purification

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